【正文】 ）病毒的分類：按專性宿主分類：動(dòng)物病毒，植物病毒，細(xì)菌病毒，放線菌病毒，藻類病毒，真菌病毒。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測(cè)定的準(zhǔn)確度愈高。2．接種(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶?jī)?nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無(wú)菌大試管中。用于測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞數(shù)量的方法已在上述實(shí)驗(yàn)作了介紹。3．根據(jù)所測(cè)得的光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的含菌數(shù)。（四）操作步驟1．標(biāo)準(zhǔn)曲線制作（1）編號(hào) 取無(wú)菌試管7支，分別用記號(hào)筆將試管編號(hào)為7。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，菌體計(jì)數(shù)可采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，平板菌落計(jì)數(shù)或細(xì)胞干重測(cè)定等方法。，如果過(guò)少菌液不易涂布開，過(guò)多則在涂布完后或在培養(yǎng)時(shí)菌液仍會(huì)在平板表面流動(dòng)，不易形成單菌落。5．計(jì)數(shù)培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)5一般選擇每個(gè)平板上長(zhǎng)有30~300個(gè)菌落的稀釋度計(jì)算每毫升的含菌量較為合適?！溆嘁来晤愅?，整個(gè)過(guò)程如圖153所示。(稀釋度)各3套。但是，由于待測(cè)樣品往往不易完全分散成單個(gè)細(xì)胞，所以，長(zhǎng)成的一個(gè)單菌落也可來(lái)自樣品中的2～3或更多個(gè)細(xì)胞。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)，對(duì)于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易舌清楚計(jì)數(shù)室方格線，或只見豎線或只見橫線。B（個(gè)）同理，如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/516104B=32000A另外兩種計(jì)菌器的使用方法可參看各廠商的說(shuō)明書。（二）基本原理顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測(cè)樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計(jì)菌器)，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀的方法。6．7．HIV在病毒分類學(xué)上屬8．HDV的感染只有在感染了二、選擇題（32分）1．測(cè)定病毒大小最準(zhǔn)確的方法是（）A 超濾法B 超速離心法C 油鏡D 電鏡2．對(duì)于需要較長(zhǎng)時(shí)間保存的病毒標(biāo)本，最適宜的貯存溫度是（）A70℃B 25℃C 37℃D 4℃3．下列哪種方法在病毒感染的實(shí)驗(yàn)室檢查中有“金標(biāo)準(zhǔn)”之稱（）A ELISAB 病毒分離培養(yǎng)C 免疫熒光D PCR4．傳染性最強(qiáng)的乙型病毒性肝炎指標(biāo)是（）A HBsAg+、HBeAg+、HBeAb、HBcAb+、HBsAbB HBsAg+、HBeAg、HBeAb+、HBcAb+、HBsAbC HBsAg+、HBeAg、HBeAb、HBcAb+、HBsAbD HBsAg、HBeAg、HBeAb+、HBcAb+、HBsAb5．關(guān)于HIV復(fù)制，錯(cuò)誤的是（）A 病毒體的包膜糖蛋白刺突gP120與細(xì)胞表面受體CD8吸附B 病毒以RNA為模板，逆向轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生互補(bǔ)的負(fù)股DNA，構(gòu)成RNA：DNA雜交體C 前病毒利用宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)進(jìn)行復(fù)制D 病毒核衣殼經(jīng)過(guò)細(xì)胞膜以出芽方式形成完整病毒體6．對(duì)酸穩(wěn)定，不易被胃酸和膽汁滅活的病毒是（）A 脊髓灰質(zhì)炎病毒B 鼻病毒C 副流感病毒D 皰疹病毒7．下列哪種疾病不由沙眼衣原體引起（）A 沙眼B非淋菌性尿道炎C鸚鵡熱D 性病淋巴肉芽腫8．下列哪種試驗(yàn)屬于密螺旋體抗原試驗(yàn)（）A VDRLB USRC TPID RPR四、簡(jiǎn)答（26分）1．分別簡(jiǎn)述HBV、HIV的傳播方式。2．鑒定病毒時(shí)常用的血清學(xué)反應(yīng)有哪幾種？第二篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)細(xì)菌群體生長(zhǎng)表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。目前國(guó)內(nèi)外常用的計(jì)菌器有：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、PeteroffHauser計(jì)菌器以及Hawksley計(jì)菌器等，它們都可用于酵母、細(xì)菌、霉菌孢子等懸液的計(jì)數(shù)，基本原理相同。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法。B（個(gè)）（三）器材1．菌種 釀酒酵母2．儀器或其他用具 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，蓋玻片，無(wú)菌毛細(xì)滴管。在計(jì)數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計(jì)數(shù)。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。依次標(biāo)是1010101010106。放菌液時(shí)吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個(gè)稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結(jié)果誤差較大。同一稀釋度的三個(gè)重復(fù)對(duì)照的菌落數(shù)不應(yīng)相差很大，否則表示試驗(yàn)不精確。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．結(jié)果2．將培養(yǎng)后菌落計(jì)數(shù)結(jié)果填入下表稀釋度104105106Cfu數(shù)/平板123平均123平均123平均每毫升中的cfu2．思考題(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?(2)要使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個(gè)關(guān)鍵?為什么?(3)試比較平板菌落計(jì)數(shù)法和顯微鏡下直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。（2）調(diào)整菌液濃度 用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)培養(yǎng)24小時(shí)的釀酒酵母菌懸液，并用無(wú)菌生理鹽水分別稀釋調(diào)整為每毫升110210410610810101012106含菌數(shù)的細(xì)胞懸液。（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告l．結(jié)果每毫升樣品原液菌數(shù)=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的菌數(shù)稀釋倍數(shù)2．思考題(1)光電比濁計(jì)數(shù)的原理是什么?這種計(jì)數(shù)法有何優(yōu)缺點(diǎn)?(2)光電比濁計(jì)數(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中有何應(yīng)用價(jià)值?(3)本實(shí)驗(yàn)為什么采用560nm波長(zhǎng)測(cè)定酵母菌懸液的光密度?如果你在實(shí)驗(yàn)中需要測(cè)定大腸桿菌生長(zhǎng)的OD值，你將如何選擇波長(zhǎng)?四 大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定(一)目的要求1．通過(guò)細(xì)菌數(shù)量的測(cè)量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長(zhǎng)線。本實(shí)驗(yàn)用分光光度計(jì)(spectrophotometer)進(jìn)行光電比濁測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間細(xì)菌懸浮液的OD值，繪制生長(zhǎng)曲線。3．培養(yǎng)將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(yǎng)(振蕩頻率250r/min)，分別培養(yǎng)0、1116和20h，將標(biāo)有相應(yīng)時(shí)間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測(cè)定其光密度值。(五)實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．結(jié)果(1)將測(cè)定的OD600值填入下表：培養(yǎng)時(shí)間對(duì)照 0 3 4 6 8 10 12 14 16 20光密度值OD600(2)繪制大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線。按核算分類：DNA病毒，RNA病毒。11）噬菌體：噬菌體是感染細(xì)菌，真菌，放線菌或螺旋體微生物的病毒。17）細(xì)胞質(zhì)膜：細(xì)胞質(zhì)膜是緊貼在細(xì)胞壁的內(nèi)側(cè)而包圍細(xì)胞質(zhì)的一層柔軟而富有彈性的膜。22）細(xì)菌的染色方法簡(jiǎn)單染色法和復(fù)合染色法 23）革蘭氏染色法：步驟1在無(wú)菌的條件下，用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌于干凈的載玻片上涂布均勻，固定。3,*革蘭氏陽(yáng)性菌含特殊的RNAMg2+鹽與革蘭氏染色有關(guān)。33）藻類的繁殖。處理廢水及用酵母菌檢測(cè)重金屬。抑制作用是指由于某些物質(zhì)與酶的活性部位結(jié)合。56)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入微生物細(xì)胞的方式：?jiǎn)渭償U(kuò)散，促進(jìn)擴(kuò)散，主動(dòng)運(yùn)輸，基團(tuán)轉(zhuǎn)位57)單純擴(kuò)散：?jiǎn)渭償U(kuò)散是物理過(guò)程，不包括細(xì)胞的主動(dòng)代謝。60)基團(tuán)轉(zhuǎn)位：基團(tuán)轉(zhuǎn)位是存在于某些原核生物中的一種物質(zhì)運(yùn)輸方式。68)大多數(shù)細(xì)菌，他們對(duì)PH的適應(yīng)范圍為410。73)共生關(guān)系：共生關(guān)系是指兩種不能單獨(dú)生活的微生物共同生活于同一環(huán)境中，各自執(zhí)行優(yōu)勢(shì)的生理功能，在營(yíng)養(yǎng)上互為有利而所組成的共生體，這兩者之間的關(guān)系就叫共生關(guān)系。土壤微生物中細(xì)菌最多，作用強(qiáng)度和影響最大，放線菌和真菌類次之，藻類和原生動(dòng)物等數(shù) 量較少，影響也小。84)自發(fā)突變：自發(fā)突變是指某種微生物的自然條件下，沒(méi)有人工參與而發(fā)生的基因突變。89)轉(zhuǎn)導(dǎo)。1有機(jī)污染物排入水體后被水體稀釋，有機(jī)和無(wú)機(jī)固體物沉降至河底。〔基本原理〕178。（描繪時(shí)按視野實(shí)際大小5－10倍繪制）菌名：大腸桿菌菌名：金黃色葡萄球菌放大倍數(shù)：100179。菌名：大腸桿菌菌名：金黃色葡萄球菌放大倍數(shù)：100179。作業(yè)繪出所觀察到到細(xì)菌的視野圖，并說(shuō)明染色反應(yīng)。(二)液體及固體培養(yǎng)基的配制過(guò)程原料稱量（按配方次序）溶解調(diào)節(jié)ｐH 過(guò)濾澄清分裝塞棉塞和包札滅菌分別按教材配方配制牛肉膏蛋白胨、馬鈴薯液體及固體培養(yǎng)基。〔實(shí)驗(yàn)討論〕滅菌器的滅菌效果必須間隔一段時(shí)間，加以驗(yàn)證，主要方法除無(wú)菌檢查外，還通過(guò)壓力試紙同時(shí)滅菌來(lái)驗(yàn)證其壓力與溫度；培養(yǎng)基通常成批制作備用?！卜椒ú襟E〕(一)菌落特征的觀察(二)個(gè)體形態(tài)與出芽(三)子囊孢子的觀察(四)酵母死活細(xì)胞的觀察。5）特殊結(jié)構(gòu)：分生孢子梗（帚狀分枝）特殊結(jié)構(gòu)：孢子囊菌名：曲霉（Aspergillus）菌名：根霉（Rhizopus）放大倍數(shù)：模式圖放大倍數(shù)：100179。劃線法是常用的分離與純化方法，通過(guò)無(wú)菌操作條件下，“漸劃漸稀”的效應(yīng)而得到菌落純的菌株?！步Y(jié)果分析〕有較大片菌苔生長(zhǎng)時(shí)，棄用。實(shí)驗(yàn)七 細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)〔目的要求〕了解細(xì)菌生理生化反應(yīng)原理，掌握細(xì)菌鑒定中常用的生理生化反應(yīng)方法；通過(guò)對(duì)不同細(xì)菌對(duì)不同含碳、氮化合物的分解利用情況，了解基代謝多樣性；學(xué)習(xí)不同培養(yǎng)基基中的不同生長(zhǎng)現(xiàn)象及其代謝產(chǎn)物在鑒別細(xì)菌中的意義。產(chǎn)氣桿菌則進(jìn)行丁二醇發(fā)酵，甲基紅試驗(yàn)為陰性。實(shí)驗(yàn)八（綜合實(shí)驗(yàn)）化能異養(yǎng)微生物的分離與純化 [目的要求]1．掌握細(xì)菌、放線菌、酵母苗和霉菌稀釋分離、劃線分離等技術(shù)。為了分離和確保獲得某種微生物的單苗落，首先要考慮制備不同稀釋度的苗懸液。四大類微生物的分離培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間見表所示。[實(shí)驗(yàn)步驟]1．稀釋分離法平板分離菌有傾注法和涂布法兩種?；靹蛲寥老♂屢?。將已滅菌的肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基融化，待冷卻至4550度左右，分別傾入到已盛有I010107土壤稀釋液的無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)。理鹽水內(nèi)，振蕩20min，即成102的面曲稀釋液。但劃線分離的培養(yǎng)基必須事先傾倒好，需充分冷凝待平板稍于后方可使用；為便于劃線，一般培養(yǎng)基不宜太薄，每皿約傾倒20mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)基應(yīng)厚薄均勻，平板表面光滑。接種環(huán)不要嵌入培養(yǎng)基內(nèi)劃破培養(yǎng)基，線條要平行密集，充分利用平板表面積，注意勿使前后兩條線重疊。取菌、接種、培養(yǎng)方法與連 續(xù)劃線法相似。本次實(shí)驗(yàn)在分離細(xì)菌的平板上選取單菌落。通常以第二個(gè)稀釋度的平板上出現(xiàn)50個(gè)左右菌落為好。貼好標(biāo)簽，在各自適宜的溫度下培養(yǎng)，培養(yǎng)后觀察是否為純種，記錄斜面培養(yǎng)條件及苗苔特征。（2）較全面的了解微生物對(duì)于人類日常生活的影響，以及微生物在工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生、食品加工和環(huán)境保護(hù)等方面的應(yīng)用。本課程與其他課程的聯(lián)系微生物學(xué)是生物技術(shù)和生物科學(xué)專業(yè)的一門重要專業(yè)基礎(chǔ)課程。第一章 緒論（2學(xué)時(shí)）基本內(nèi)容：微生物及微生物學(xué)的定義、微生物的類群和分類地位、微生物的特點(diǎn)、微生物學(xué)的發(fā)展史、真原核微生物的區(qū)別、微生物對(duì)于人類的關(guān)系和重要性。第五節(jié) 真原核微生物的主要區(qū)別真原核微生物在形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和生理生化上的主要區(qū)別。第三節(jié) 細(xì)菌的群體形態(tài)和繁殖細(xì)菌的群體形態(tài)特征——菌落、菌苔和液體培養(yǎng)特征及其在細(xì)菌分類中的作用；菌落和菌苔的概念；細(xì)菌的繁殖方式。第一節(jié) 真菌的形態(tài)、結(jié)構(gòu)真菌的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)和特殊構(gòu)造。教學(xué)難點(diǎn)：噬菌體的增殖過(guò)程?；靖拍睿何⑸锏乃拇鬆I(yíng)養(yǎng)類型病毒、微生物吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的四種方式、培養(yǎng)基。教學(xué)重點(diǎn)：微生物的能量代謝。教學(xué)重點(diǎn)：微生物的生長(zhǎng)曲線。教學(xué)難點(diǎn)：基因重組。教學(xué)重點(diǎn)：微生物之間的相互關(guān)系；微生物在自然界氮素循環(huán)中的作用。教學(xué)重點(diǎn)：非特異性免疫和特異性免疫，抗原抗體反應(yīng)。第一節(jié) 傳染與免疫傳染與傳染?。挥绊憘魅镜囊蛩?。第一節(jié) 微生物在自然界中的分布微生物在土壤、水、空氣和生物體中的分布；極端環(huán)境微生物。第二節(jié) 基因突變和誘變育種基因突變的類型和特點(diǎn)，突變率；基因突變的機(jī)制；自發(fā)突變與誘發(fā)突變?cè)谟N上的應(yīng)用。第一節(jié) 微生物生長(zhǎng)微生物生長(zhǎng)的定義；微生物群體生長(zhǎng)的測(cè)定方法。第一節(jié) 微生物的能量代謝ATP產(chǎn)生的三種方式（基質(zhì)水平磷酸化、氧化磷酸化和光合磷酸化）；微生物能量代謝的類型（有氧呼吸、無(wú)氧呼吸和發(fā)酵作用）。教學(xué)難點(diǎn)：微生物吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的方式。第二節(jié) 病毒的分類病毒的分類方法和病毒的主要類群。真菌的準(zhǔn)性生殖。第五節(jié) 藍(lán)細(xì)菌藍(lán)細(xì)菌的基本形態(tài)和特殊構(gòu)造，藍(lán)細(xì)菌的繁殖。第二章 原核微生物（8學(xué)時(shí)）基本內(nèi)容：原核生物的概念、細(xì)菌的形態(tài)、大小與結(jié)構(gòu)、細(xì)菌的繁殖，放線菌、藍(lán)細(xì)菌和其他的原核微生物。教學(xué)重點(diǎn)：微生物及微生物學(xué)的概念、真原核微生物的區(qū)別。推薦教材和參考書（一）教材（1）周德慶編著《微生物學(xué)教程》，高等教育出版社。（二）基本技能要求（1）掌握微生物學(xué)的制片、染色和觀察技術(shù)。[實(shí)驗(yàn)報(bào)告] 。4．平板菌落形態(tài)及個(gè)體形態(tài)觀察 從不同平板上選擇不同類型菌落用肉眼觀察，區(qū)分細(xì)菌、放線菌、酵母茵和霉菌的菌落形態(tài)特征。劃線接種后的平板，倒置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。為防止第四區(qū)內(nèi)劃線與l、3區(qū)線條和接觸，應(yīng)使4區(qū)線條與l區(qū)線條和平行，這樣區(qū)與區(qū)間線條夾角最好保持120度左右。灼燒接種環(huán)，待冷卻后放置接種架上。(1)連續(xù)劃線法 連續(xù)劃線法是從平板邊緣一點(diǎn)開始，連續(xù)作波浪式劃線直到平板的另一端為止，當(dāng)中不需灼燒接種環(huán)上的菌。3)涂布法分離 依前法向無(wú)菌培養(yǎng)皿中傾倒已融化并冷卻至4550℃的豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基，待平板冷凝后，用無(wú)菌移液管分別吸取上述l0l0，依次滴加于對(duì)應(yīng)編號(hào)已制備好的豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基平板上。傾倒培養(yǎng)基時(shí)注意無(wú)菌操作，要在火焰旁進(jìn)行。 m1無(wú)菌水試管，制成104：土壤稀釋液。然后按10倍稀釋法進(jìn)行稀釋分離，以制備102稀釋度為例，具體操作過(guò)程如下： mL無(wú)菌水試管6支，按102......107順序編號(hào)，放置在試管架上。鏟去表土層2～3cm，取3～10cm深層土壤10g，裝入已滅過(guò)菌的牛皮紙袋內(nèi)．封好袋口，并記錄取樣地點(diǎn)、環(huán)境及日期。其次，應(yīng)考慮各類微生物的不同特性，避免樣品中各類微生物的相互干擾。3．學(xué)習(xí)并掌握平板傾注法和斜面接種技術(shù)，了解培養(yǎng)細(xì)菌、放線菌、酵母菌及