【正文】 第四節(jié) 微生物在自然界物質(zhì)循環(huán)中的作用微生物在自然界碳素、氮素、磷素和硫素等物質(zhì)循環(huán)中的作用。第八章 微生物的遺傳變異和基因重組（6學(xué)時）基本內(nèi)容：微生物的遺傳物質(zhì)、基因突變和誘變育種、微生物的基因重組。第三節(jié) 微生物吸收營養(yǎng)物質(zhì)的方式微生物吸收營養(yǎng)物質(zhì)的四種方式（被動運輸、促進(jìn)擴散、主動運輸和基團(tuán)轉(zhuǎn)位）和運輸?shù)奶攸c。第四章 非細(xì)胞結(jié)構(gòu)生物——病毒（4學(xué)時）基本內(nèi)容：病毒的定義、病毒的一般特征、病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)、病毒的增殖、病毒的溶原性、亞病毒。教學(xué)難點：細(xì)胞壁的構(gòu)造。（2） etc《Microbiology》，科學(xué)出版社，1999。應(yīng)該如何進(jìn)一步分離和純化；經(jīng)過次分離的菌種是否皆為純種，若不純，應(yīng)采用哪種分離方法最合適? 、放線苗、酵母菌與霉菌?它們的細(xì)胞結(jié)構(gòu)表現(xiàn)在菌落形態(tài)上有什么聯(lián)系？第五篇：微生物學(xué)教學(xué)大綱微生物學(xué)課程教學(xué)大綱課程中文名稱：微生物學(xué)課程英文名稱：Microbiology 課程類別：專業(yè)基礎(chǔ)課課程編號: 09003011 課程歸屬單位：生命科學(xué)學(xué)院 制定時間：2007年7月20日一、課程的性質(zhì)、任務(wù)微生物是生命科學(xué)的主要研究對象，學(xué)生應(yīng)從宏觀到微觀的各個層次上系統(tǒng)地了解微生物。每克菌樣品中微生物的活細(xì)胞數(shù)＝(同一稀釋度的3個平板上菌落平均數(shù)X稀釋倍數(shù))/含菌樣品克數(shù)。(2)分區(qū)劃線法平板分四區(qū)，故又稱四分區(qū)劃線法。2劃線分離法 菌種被其他雜苗污染時或混合菌懸液常用劃線法進(jìn)行純種分離。2)傾注法分離 取無菌培養(yǎng)皿69套，分別于培養(yǎng)皿底面按稀釋度編號。也可用酒曲等替代。不同土樣中各類微生物數(shù)量不同，一般土壤中細(xì)菌數(shù)量最多，其次為放線菌和霉菌。在配制培養(yǎng)基時預(yù)先加入溴甲酚紫（～），當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時，培養(yǎng)基由紫色變黃，氣體的產(chǎn)生則可由試管中倒置的杜氏小管中有無氣泡來判斷。土壤中微生物分離純化及平板計數(shù)采土樣（5－20cm）土10g，裝入到已滅菌的牛皮袋（信封）中，封好袋口（三角瓶）中，吹吸三次，振蕩均勻(103)。10（179。(五)培養(yǎng)基的滅菌 培養(yǎng)基用濕熱法滅菌；皿用干熱法分別滅菌。10（179。〔器材用具〕顯微鏡、載玻片、凹玻片、蓋玻片、接種環(huán)、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水紙、擦鏡紙；細(xì)菌、放線菌等固定裝片；；無菌水、生理鹽水?；蚬こ淌怯萌斯し椒ò阉枰哪骋还w生物的DNA提取出來，在離體的條件下用限制性內(nèi)切酶將離體DNA切割成帶有目的的基因的DNA片段，每一段平均長度有幾千個核苷酸，用DNA連接酶把它和質(zhì)粒的DNA分子在體外連接成重組DNA分子，然后將重組體導(dǎo)入某一受體細(xì)胞中，以便外來的遺傳物質(zhì)在其中進(jìn)行復(fù)制，擴增和表達(dá)，再進(jìn)行重組體克隆的篩選和鑒定；最后對外源基因表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分離提純，從而獲得新品種。80)遺傳可改變的一面是變異81)遺傳是相對的，變異是絕對的。71)競爭關(guān)系：競爭關(guān)系是指不同的微生物種群在同一環(huán)境中，對食物等營養(yǎng)，溶解氧，空間和其他共同要求的物質(zhì)互相競爭，互相收到不利影響。59)主動運輸：當(dāng)微生物細(xì)胞內(nèi)積累的營養(yǎng)物質(zhì)濃度高于細(xì)胞外的濃度時，營養(yǎng)物質(zhì)就不能按濃度梯度擴散到細(xì)胞內(nèi)，而是逆濃度梯度被“抽”進(jìn)細(xì)胞內(nèi)。44）酶的反應(yīng)通式：氧化還原酶類：AH2+B=A+BH2轉(zhuǎn)移酶類：AR+B=A+BR水解酶類：AB+H2O=AOH+BH裂解酶類：AB=A+B異構(gòu)酶：葡萄糖=果糖（例）合成酶：A+B+ATP=AB+ADP+Pi或A+B+ATP=AB+AMP+Pii 45）酶的特性：1酶具有一般催化劑的共性2酶的催化作用具有高度的專一性（只作用一種或以類物質(zhì)）3酶的催化反應(yīng)條件溫和4酶對環(huán)境條件的變化極為敏感5酶的催化效率極高46）酶促反應(yīng)的動力學(xué)方程式：E酶S底物ES中間產(chǎn)物P最終產(chǎn)物47）酶的濃度對酶促反應(yīng)速率的影響：下圖48)底物濃度對酶促反應(yīng)速率的影響：P116 49)溫度對酶促反應(yīng)速率的影響：上圖 50)PH對酶促反應(yīng)速率的影響：P117 51)激活劑對酶促反應(yīng)速率的影響：凡能激活酶的物質(zhì)稱酶的激活劑。28）原生動物的營養(yǎng)類型：1全動性營養(yǎng)2植物性營養(yǎng)3腐生性營養(yǎng)29）原生動物的繁殖：有性生殖和無性生殖（二分裂發(fā)，多分裂法，縱分裂或橫分裂）30）原生動物的作用：所有原生動物在污水生物處理過程中都起著指示生物的作用。19）核糖體。溫和噬菌體，侵入宿主細(xì)胞后，其核算附著并整合在宿主染色體上，和宿主的核酸同步復(fù)制，宿主細(xì)胞不裂解而繼續(xù)生長，不引起宿主細(xì)胞裂解。2．分別在培養(yǎng)0、1116和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測定OD值。不同的細(xì)菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長曲線不同，同樣的細(xì)菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長曲線也不相同。另外，對于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質(zhì)的懸液不適合用此法進(jìn)行測定。平板菌落計數(shù)法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進(jìn)行。吹吸菌液時不要太猛太快，吸時吸管伸人管底，吹時離開液面，以免將吸管中的過濾棉花浸濕或使試管內(nèi)液體外溢。（二）、基本原理平板菌落計數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個單細(xì)胞。取樣時先要搖勻菌液；加樣時計數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。目前已有一些方法可以克服這一缺點，如結(jié)合活菌染色微室培養(yǎng)（短時間）以及加細(xì)胞分裂抑制劑等方法來達(dá)到只計數(shù)活菌體的目的。3．1956年我國學(xué)者表現(xiàn)為不同的存在形式，一種是，一種是。除了用這些計菌器外，還有在顯微鏡下直接觀察涂片面積與視野面積之比的估算法，此法一般用于牛乳的細(xì)菌學(xué)檢查。2．鏡檢計數(shù)室在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進(jìn)行鏡檢。A表示五個中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。將多余的菌液放回原菌液中。由1010106三個稀釋度計算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。但是，由于光密度或透光度除了受菌體濃度影響之外，還受細(xì)胞大小、形態(tài)、培養(yǎng)液成分以及所采用的光波長等因素的影響。(二)基本原理大多數(shù)細(xì)菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時期的大腸桿菌細(xì)胞每20min分裂一次。從早取出的培養(yǎng)液開始依次測定，對細(xì)胞密度大的培養(yǎng)液用LB液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測定，~(測定OD值前，將待測定的培養(yǎng)液振蕩，使細(xì)胞均勻分布)。8）朊病毒：朊病毒是一種引起牛，羊疾病的感染因子（蛋白質(zhì)感染顆粒）。脂質(zhì)是由磷脂，甘油，脂肪酸和含氮堿組成。分為三類營養(yǎng)菌絲，氣生菌絲，孢子絲。39）傘菌：無毒的有機廢水可用于培養(yǎng)食用菌的菌絲體。58)促進(jìn)擴散：細(xì)胞膜上的載體蛋白分子有和被運輸物質(zhì)特異結(jié)合的位置，這樣載體在膜的外表面能夠和物質(zhì)結(jié)合，形成的底物載體蛋白復(fù)合體，便從高濃度向低濃度區(qū)域擴散或越膜。70)微生物之間的關(guān)系：微生物之間的關(guān)系有種內(nèi)的關(guān)系和種間的關(guān)系。土壤中微生物的垂直分布與紫外輻射的照射，營養(yǎng)，水，溫度等因素有關(guān)。90)質(zhì)粒：質(zhì)粒在原核微生物中除有染色體外，還含有另一種較小的，攜帶少量遺傳基因的環(huán)狀DNA分子，稱為質(zhì)粒，也叫染色體外DNA。sinα=λ/，但有效放大率取決于鏡口率。5）放大倍數(shù)：100179。150平口試管或150mL錐形瓶貼上標(biāo)簽分裝（至試管高度1/41/3，斜面制作用1/5，半固體用1/3）要求：每人制作斜面3支。10（179。統(tǒng)計菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品含菌量。細(xì)菌的這種代謝方式可供鑒別細(xì)菌之用。3．學(xué)習(xí)并掌握平板傾注法和斜面接種技術(shù)，了解培養(yǎng)細(xì)菌、放線菌、酵母菌及霉菌四大類微生物的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)時間。鏟去表土層2～3cm，取3～10cm深層土壤10g，裝入已滅過菌的牛皮紙袋內(nèi)．封好袋口，并記錄取樣地點、環(huán)境及日期。 m1無菌水試管，制成104：土壤稀釋液。3)涂布法分離 依前法向無菌培養(yǎng)皿中傾倒已融化并冷卻至4550℃的豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基，待平板冷凝后，用無菌移液管分別吸取上述l0l0，依次滴加于對應(yīng)編號已制備好的豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基平板上。灼燒接種環(huán)，待冷卻后放置接種架上。劃線接種后的平板，倒置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。[實驗報告] 。推薦教材和參考書（一）教材（1）周德慶編著《微生物學(xué)教程》，高等教育出版社。第二章 原核微生物（8學(xué)時）基本內(nèi)容：原核生物的概念、細(xì)菌的形態(tài)、大小與結(jié)構(gòu)、細(xì)菌的繁殖，放線菌、藍(lán)細(xì)菌和其他的原核微生物。真菌的準(zhǔn)性生殖。教學(xué)難點：微生物吸收營養(yǎng)物質(zhì)的方式。第一節(jié) 微生物生長微生物生長的定義；微生物群體生長的測定方法。第一節(jié) 微生物在自然界中的分布微生物在土壤、水、空氣和生物體中的分布；極端環(huán)境微生物。教學(xué)重點：非特異性免疫和特異性免疫，抗原抗體反應(yīng)。教學(xué)難點：基因重組。教學(xué)重點：微生物的能量代謝。教學(xué)難點：噬菌體的增殖過程。第三節(jié) 細(xì)菌的群體形態(tài)和繁殖細(xì)菌的群體形態(tài)特征——菌落、菌苔和液體培養(yǎng)特征及其在細(xì)菌分類中的作用；菌落和菌苔的概念；細(xì)菌的繁殖方式。第一章 緒論（2學(xué)時）基本內(nèi)容：微生物及微生物學(xué)的定義、微生物的類群和分類地位、微生物的特點、微生物學(xué)的發(fā)展史、真原核微生物的區(qū)別、微生物對于人類的關(guān)系和重要性。（2）較全面的了解微生物對于人類日常生活的影響，以及微生物在工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生、食品加工和環(huán)境保護(hù)等方面的應(yīng)用。通常以第二個稀釋度的平板上出現(xiàn)50個左右菌落為好。取菌、接種、培養(yǎng)方法與連 續(xù)劃線法相似。但劃線分離的培養(yǎng)基必須事先傾倒好，需充分冷凝待平板稍于后方可使用；為便于劃線，一般培養(yǎng)基不宜太薄，每皿約傾倒20mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)基應(yīng)厚薄均勻，平板表面光滑。將已滅菌的肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基融化，待冷卻至4550度左右，分別傾入到已盛有I010107土壤稀釋液的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)。[實驗步驟]1．稀釋分離法平板分離菌有傾注法和涂布法兩種。為了分離和確保獲得某種微生物的單苗落，首先要考慮制備不同稀釋度的苗懸液。產(chǎn)氣桿菌則進(jìn)行丁二醇發(fā)酵，甲基紅試驗為陰性?！步Y(jié)果分析〕有較大片菌苔生長時，棄用。5）特殊結(jié)構(gòu)：分生孢子梗（帚狀分枝）特殊結(jié)構(gòu)：孢子囊菌名：曲霉（Aspergillus）菌名：根霉（Rhizopus）放大倍數(shù)：模式圖放大倍數(shù)：100179?！矊嶒炗懻摗硿缇鞯臏缇Ч仨氶g隔一段時間，加以驗證，主要方法除無菌檢查外，還通過壓力試紙同時滅菌來驗證其壓力與溫度；培養(yǎng)基通常成批制作備用。作業(yè)繪出所觀察到到細(xì)菌的視野圖，并說明染色反應(yīng)。（描繪時按視野實際大小5－10倍繪制）菌名：大腸桿菌菌名：金黃色葡萄球菌放大倍數(shù)：100179。1有機污染物排入水體后被水體稀釋，有機和無機固體物沉降至河底。84)自發(fā)突變：自發(fā)突變是指某種微生物的自然條件下，沒有人工參與而發(fā)生的基因突變。73)共生關(guān)系：共生關(guān)系是指兩種不能單獨生活的微生物共同生活于同一環(huán)境中，各自執(zhí)行優(yōu)勢的生理功能，在營養(yǎng)上互為有利而所組成的共生體，這兩者之間的關(guān)系就叫共生關(guān)系。60)基團(tuán)轉(zhuǎn)位：基團(tuán)轉(zhuǎn)位是存在于某些原核生物中的一種物質(zhì)運輸方式。抑制作用是指由于某些物質(zhì)與酶的活性部位結(jié)合。33）藻類的繁殖。22）細(xì)菌的染色方法簡單染色法和復(fù)合染色法 23）革蘭氏染色法：步驟1在無菌的條件下，用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌于干凈的載玻片上涂布均勻，固定。11）噬菌體：噬菌體是感染細(xì)菌，真菌，放線菌或螺旋體微生物的病毒。(五)實驗報告1．結(jié)果(1)將測定的OD600值填入下表：培養(yǎng)時間對照 0 3 4 6 8 10 12 14 16 20光密度值OD600(2)繪制大腸桿菌的生長曲線。本實驗用分光光度計(spectrophotometer)進(jìn)行光電比濁測定不同培養(yǎng)時間細(xì)菌懸浮液的OD值，繪制生長曲線。（2）調(diào)整菌液濃度 用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)培養(yǎng)24小時的釀酒酵母菌懸液，并用無菌生理鹽水分別稀釋調(diào)整為每毫升110210410610810101012106含菌數(shù)的細(xì)胞懸液。五、實驗報告1．結(jié)果2．將培養(yǎng)后菌落計數(shù)結(jié)果填入下表稀釋度104105106Cfu數(shù)/平板123平均123平均123平均每毫升中的cfu2．思考題(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?(2)要使平板菌落計數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個關(guān)鍵?為什么?(3)試比較平板菌落計數(shù)法和顯微鏡下直接計數(shù)法的優(yōu)缺點及應(yīng)用。放菌液時吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結(jié)果誤差較大。因此平板菌落計數(shù)的結(jié)果往往偏低。在計數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計數(shù)。用血細(xì)胞計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)是一種常用的微生物計數(shù)方法。2．鑒定病毒時常用的血清學(xué)反應(yīng)有哪幾種？第二篇：微生物學(xué)實驗細(xì)菌群體生長表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。（二）基本原理顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計菌器)，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。B（個）同理，如果是16個中方格的計數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/516104B=32000A鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。(稀釋度)各3套。5．計數(shù)培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)5一般選擇每個平板上長有30~300個菌落的稀釋度計算每毫升的含菌量較為合適。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時，菌體計數(shù)可采用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)，平板菌落計數(shù)或細(xì)胞干重測定等方法。3．根據(jù)所測得的光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的含菌數(shù)。2．接種(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶內(nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無菌大試管中。6）病毒的分類：按專性宿主分類：動物病毒，植物病毒，細(xì)菌病毒，放線菌病毒，藻類病毒，真菌病毒。16）原生質(zhì)體