【正文】 的繁殖過(guò)程：1吸附2侵入3復(fù)制與聚集4宿主細(xì)胞裂解和成熟噬菌體粒子的釋放。6）病毒的分類：按專性宿主分類：動(dòng)物病毒，植物病毒，細(xì)菌病毒，放線菌病毒，藻類病毒，真菌病毒。2）微生物的特點(diǎn)：1個(gè)體極小2分布廣種類繁多3繁殖快4易變異 3）原核微生物與真核微生物區(qū)別：真核微生物有發(fā)育完好的細(xì)胞核，原核微生物只有擬核。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測(cè)定的準(zhǔn)確度愈高。本操作步驟也可用簡(jiǎn)便的方法代替：1．~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計(jì)的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個(gè)大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調(diào)零點(diǎn)，測(cè)定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。2．接種(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶?jī)?nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無(wú)菌大試管中。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/。用于測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞數(shù)量的方法已在上述實(shí)驗(yàn)作了介紹。將一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延遲期，對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)階段。3．根據(jù)所測(cè)得的光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的含菌數(shù)。比色測(cè)定時(shí)，用無(wú)菌生理鹽水作空白對(duì)照，并將OD值填入下表管號(hào)12345678細(xì)胞數(shù)106/ml光密度（OD）每管菌懸液在測(cè)定OD值時(shí)均必須先搖勻后再倒入比色皿中測(cè)定(4)以光密度(OD)值為縱坐標(biāo)，以每毫升細(xì)胞數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（四）操作步驟1．標(biāo)準(zhǔn)曲線制作（1）編號(hào) 取無(wú)菌試管7支，分別用記號(hào)筆將試管編號(hào)為7。因此，對(duì)于不同微生物的菌懸液進(jìn)行光電比濁計(jì)數(shù)應(yīng)采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，菌體計(jì)數(shù)可采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，平板菌落計(jì)數(shù)或細(xì)胞干重測(cè)定等方法。二、基本原理當(dāng)光線通過(guò)微生物菌懸液時(shí)，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過(guò)量降低。，如果過(guò)少菌液不易涂布開，過(guò)多則在涂布完后或在培養(yǎng)時(shí)菌液仍會(huì)在平板表面流動(dòng)，不易形成單菌落。平板菌落計(jì)數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。5．計(jì)數(shù)培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)5一般選擇每個(gè)平板上長(zhǎng)有30~300個(gè)菌落的稀釋度計(jì)算每毫升的含菌量較為合適。，這樣容易加大同一稀釋度幾個(gè)重復(fù)平板間的操作誤差?！溆嘁来晤愅疲麄€(gè)過(guò)程如圖153所示。OptionsEmail Replies將101試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。(稀釋度)各3套。（三）器材1．菌種 大腸桿菌菌懸液。但是，由于待測(cè)樣品往往不易完全分散成單個(gè)細(xì)胞，所以，長(zhǎng)成的一個(gè)單菌落也可來(lái)自樣品中的2～3或更多個(gè)細(xì)胞。各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml12345第一室第二室2．思考題(1)根據(jù)你的體會(huì)，說(shuō)明用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來(lái)自哪些方面?應(yīng)如何盡量減少誤差．力求準(zhǔn)確?(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)1～2種可行的檢測(cè)方法。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)，對(duì)于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易舌清楚計(jì)數(shù)室方格線，或只見豎線或只見橫線。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。B（個(gè)）同理，如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/516104B=32000A計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格(圖15—2)；另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格，但無(wú)論是哪一種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，每一個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)。另外兩種計(jì)菌器的使用方法可參看各廠商的說(shuō)明書。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是直觀、快速、操作簡(jiǎn)單。（二）基本原理顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測(cè)樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計(jì)菌器)，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡(jiǎn)便、快速、直觀的方法?？傊?，測(cè)定微生物生長(zhǎng)量的方法很多，各有優(yōu)缺點(diǎn)，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。6．7．HIV在病毒分類學(xué)上屬8．HDV的感染只有在感染了二、選擇題（32分）1．測(cè)定病毒大小最準(zhǔn)確的方法是（）A 超濾法B 超速離心法C 油鏡D 電鏡2．對(duì)于需要較長(zhǎng)時(shí)間保存的病毒標(biāo)本，最適宜的貯存溫度是（）A70℃B 25℃C 37℃D 4℃3．下列哪種方法在病毒感染的實(shí)驗(yàn)室檢查中有“金標(biāo)準(zhǔn)”之稱（）A ELISAB 病毒分離培養(yǎng)C 免疫熒光D PCR4．傳染性最強(qiáng)的乙型病毒性肝炎指標(biāo)是（）A HBsAg+、HBeAg+、HBeAb、HBcAb+、HBsAbB HBsAg+、HBeAg、HBeAb+、HBcAb+、HBsAbC HBsAg+、HBeAg、HBeAb、HBcAb+、HBsAbD HBsAg、HBeAg、HBeAb+、HBcAb+、HBsAb5．關(guān)于HIV復(fù)制，錯(cuò)誤的是（）A 病毒體的包膜糖蛋白刺突gP120與細(xì)胞表面受體CD8吸附B 病毒以RNA為模板，逆向轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生互補(bǔ)的負(fù)股DNA，構(gòu)成RNA：DNA雜交體C 前病毒利用宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)進(jìn)行復(fù)制D 病毒核衣殼經(jīng)過(guò)細(xì)胞膜以出芽方式形成完整病毒體6．對(duì)酸穩(wěn)定，不易被胃酸和膽汁滅活的病毒是（）A 脊髓灰質(zhì)炎病毒B 鼻病毒C 副流感病毒D 皰疹病毒7．下列哪種疾病不由沙眼衣原體引起（）A 沙眼B非淋菌性尿道炎C鸚鵡熱D 性病淋巴肉芽腫8．下列哪種試驗(yàn)屬于密螺旋體抗原試驗(yàn)（）A VDRLB USRC TPID RPR四、簡(jiǎn)答（26分）1．分別簡(jiǎn)述HBV、HIV的傳播方式。第一篇：微生物學(xué)單元測(cè)試微生物學(xué)檢驗(yàn)16~121~31章單元測(cè)試題一、填空（42分）1．2．螺旋體是一類細(xì)長(zhǎng)、柔軟、彎曲呈螺旋狀、運(yùn)動(dòng)活潑的型微生物，常用的染色方法是。2．鑒定病毒時(shí)常用的血清學(xué)反應(yīng)有哪幾種？第二篇：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)細(xì)菌群體生長(zhǎng)表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。本實(shí)驗(yàn)主要介紹生產(chǎn)、科研工作中比較常用的顯微鏡直接計(jì)數(shù)法、平板菌落計(jì)數(shù)法和光電比濁計(jì)數(shù)法。目前國(guó)內(nèi)外常用的計(jì)菌器有：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、PeteroffHauser計(jì)菌器以及Hawksley計(jì)菌器等，它們都可用于酵母、細(xì)菌、霉菌孢子等懸液的計(jì)數(shù)，基本原理相同。但此法的缺點(diǎn)是所測(cè)得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法。每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為lmm，則每一個(gè)大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，(萬(wàn)分之一毫升)。B（個(gè)）（三）器材1．菌種 釀酒酵母2．儀器或其他用具 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，蓋玻片，無(wú)菌毛細(xì)滴管。3．加樣品將清潔干燥的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無(wú)菌的毛細(xì)滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動(dòng)進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液。在計(jì)數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計(jì)數(shù)。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，即作為兩個(gè)菌體計(jì)數(shù)。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。二平板菌落計(jì)數(shù)法（一）目的要求學(xué)習(xí)習(xí)近平板菌落計(jì)數(shù)的基本原理和方法。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。2．培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。依次標(biāo)是1010101010106。另取一支lml吸管插入10?1試管中來(lái)回吹吸菌懸液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。放菌液時(shí)吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個(gè)稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結(jié)果誤差較大。圖15—3平板菌落計(jì)數(shù)操作步驟4．倒平板．盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動(dòng)平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或?yàn)R到平皿蓋上。同一稀釋度的三個(gè)重復(fù)對(duì)照的菌落數(shù)不應(yīng)相差很大，否則表示試驗(yàn)不精確。一般以三個(gè)連續(xù)稀釋度中的第二個(gè)稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個(gè)左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．結(jié)果2．將培養(yǎng)后菌落計(jì)數(shù)結(jié)果填入下表稀釋度104105106Cfu數(shù)/平板123平均123平均123平均每毫升中的cfu2．思考題(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?(2)要使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個(gè)關(guān)鍵?為什么?(3)試比較平板菌落計(jì)數(shù)法和顯微鏡下直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用。在一定的范圍內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測(cè)出(圖154)。本實(shí)驗(yàn)采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過(guò)最大吸收波長(zhǎng)以及穩(wěn)定性試驗(yàn)來(lái)確定。（2）調(diào)整菌液濃度 用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)培養(yǎng)24小時(shí)的釀酒酵母菌懸液，并用無(wú)菌生理鹽水分別稀釋調(diào)整為每毫升110210410610810101012106含菌數(shù)的細(xì)胞懸液。2．樣品測(cè)定將待測(cè)樣品用無(wú)菌生理鹽水適當(dāng)稀釋，搖均勻后，用560nm波長(zhǎng)、lcm比色皿測(cè)定光密度。（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告l．結(jié)果每毫升樣品原液菌數(shù)=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的菌數(shù)稀釋倍數(shù)2．思考題(1)光電比濁計(jì)數(shù)的原理是什么?這種計(jì)數(shù)法有何優(yōu)缺點(diǎn)?(2)光電比濁計(jì)數(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中有何應(yīng)用價(jià)值?(3)本實(shí)驗(yàn)為什么采用560nm波長(zhǎng)測(cè)定酵母菌懸液的光密度?如果你在實(shí)驗(yàn)中需要測(cè)定大腸桿菌生長(zhǎng)的OD值，你將如何選擇波長(zhǎng)?四 大腸桿菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定(一)目的要求1．通過(guò)細(xì)菌數(shù)量的測(cè)量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長(zhǎng)線。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速率為縱坐標(biāo)作圖所繪制的曲線稱為該細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線。本實(shí)驗(yàn)用分光光度計(jì)(spectrophotometer)進(jìn)行光電比濁測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間細(xì)菌懸浮液的OD值，繪制生長(zhǎng)曲線。圖15—5 帶側(cè)臂試管的三角燒瓶(三)器材1．菌種 大腸桿菌2．培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。3．培養(yǎng)將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(yǎng)(振蕩頻率250r/min)，分別培養(yǎng)0、1116和20h，將標(biāo)有相應(yīng)時(shí)間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測(cè)定其光密度值。測(cè)定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。(五)實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．結(jié)果(1)將測(cè)定的OD600值填入下表：培養(yǎng)時(shí)間對(duì)照 0 3 4 6 8 10 12 14 16 20光密度值OD600(2)繪制大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線。第一章4）病毒：病毒是沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，專性寄生在活的敏感宿主體內(nèi)的超微小生物。按核算分類：DNA病毒，RNA病毒。10）噬菌體的溶原性：毒性噬菌體，侵入宿主細(xì)胞后，隨即引起宿主細(xì)胞裂解的噬菌體。11）噬菌體：噬菌體是感染細(xì)菌，真菌，放線菌或螺旋體微生物的病毒。14）細(xì)菌的結(jié)構(gòu)：細(xì)菌為單細(xì)胞結(jié)構(gòu)，所有的細(xì)菌均有如下結(jié)構(gòu)：細(xì)胞壁，細(xì)胞質(zhì)膜，細(xì)胞質(zhì)及其內(nèi)含物，擬核。17）細(xì)胞質(zhì)膜：細(xì)胞質(zhì)膜是緊貼在細(xì)胞壁的內(nèi)側(cè)而包圍細(xì)胞質(zhì)的一層柔軟而富有彈性的膜。4，細(xì)胞質(zhì)膜上含有酶，進(jìn)行物質(zhì)代謝和能量代謝5，細(xì)胞質(zhì)膜上有鞭毛基粒，鞭毛由此長(zhǎng)出，為鞭毛提供附著點(diǎn)。22）細(xì)菌的染色方法簡(jiǎn)單染色法和復(fù)合染色法 23）革蘭氏染色法：步驟1在無(wú)菌的條件下，用接種環(huán)挑取少量細(xì)菌于干凈的載玻片上涂布均勻，固定。5，用番紅溶液復(fù)染1MIN，革蘭氏陽(yáng)性菌仍呈紫色，革蘭氏陰性菌則呈現(xiàn)紅色。3,*革蘭氏陽(yáng)性菌含特殊的RNAMg2+鹽與革蘭氏染色有關(guān)。第三章27）原生動(dòng)物：原生動(dòng)物是動(dòng)物中最原始，最低等，結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的單細(xì)胞動(dòng)物。33）藻類的繁殖。35）酵母菌：酵母菌是單細(xì)胞真菌。處理廢水及用酵母菌檢測(cè)重金屬。41）酶的分類：化學(xué)組分；單成分酶（只含有蛋白質(zhì)）和全酶（蛋白質(zhì)及輔基或輔酶的熱穩(wěn)定的非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物或金屬離子，全酶要在酶蛋白和輔酶同時(shí)存在起作用）42）全酶的分類：1酶蛋白+非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物2酶蛋白+非蛋白質(zhì)小分子有機(jī)物+金屬離子3酶蛋白+金屬離子43）酶的分類：六類，氧化還原酶，轉(zhuǎn)移酶，水解酶類，裂解酶類，異構(gòu)酶類和合成（連接）酶類。抑制作用是指由于某些物質(zhì)與酶的活性部位結(jié)合。54)培養(yǎng)基配制的原則：1不同微生物，不同培養(yǎng)基2各種營(yíng)養(yǎng)物的濃度及配比3調(diào)PH值4考慮加生長(zhǎng)因子5培養(yǎng)基物美價(jià)廉55)培養(yǎng)基的種類：按培養(yǎng)基組成物的性質(zhì)分類：合成培養(yǎng)基，天然培養(yǎng)基（天然有機(jī)物配制而成的培養(yǎng)基），復(fù)合培養(yǎng)基。56)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入微生物細(xì)胞的方式：?jiǎn)渭償U(kuò)散，促進(jìn)擴(kuò)散，主動(dòng)運(yùn)輸，基團(tuán)轉(zhuǎn)位57)單純擴(kuò)散：?jiǎn)渭償U(kuò)散是物理過(guò)程，不包括細(xì)胞的主動(dòng)代謝。不消耗能量。60)基團(tuán)轉(zhuǎn)位：基團(tuán)轉(zhuǎn)位是存在于某些原核生物中的一種物質(zhì)運(yùn)輸方式。正常情況下，同化作用大于異化作用，微生物的細(xì)胞質(zhì)量不斷迅速增長(zhǎng)，稱為生長(zhǎng)。68)大多數(shù)細(xì)菌，他們對(duì)PH的適應(yīng)范圍為410。不同種間關(guān)系有6種，競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，原始合作關(guān)系，共生關(guān)系，偏害關(guān)系，捕食關(guān)系，寄生關(guān)系。73)共生關(guān)系：共生關(guān)系是指兩種不能單獨(dú)生活的微生物共同生活于同一環(huán)境中，各自執(zhí)行優(yōu)勢(shì)的生理功能，在營(yíng)養(yǎng)上互為有利而所組成的共生體，這兩者之間的關(guān)系就叫共生關(guān)系。分非特異性偏害和特異性偏害。土壤微生物中細(xì)菌最多，作用強(qiáng)度和影響最大，放線菌和真菌類次之，藻類和原生動(dòng)物等數(shù) 量較少，影響也小。79)遺傳有保守性，是微生物在它的系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中形成的系統(tǒng)。84)自發(fā)突變：自發(fā)突變是指某種微生物的自然條件下，沒有人工參與而發(fā)生的基因突變。86)基因重組：兩個(gè)不同形狀個(gè)體細(xì)胞的DNA融合，使基因重新組合，從而發(fā)生遺傳變異，產(chǎn)生新品種，此過(guò)程稱為基因重組。89)轉(zhuǎn)導(dǎo)。91)基因工程：基因工程是指在基因水平上的遺傳工程，