抗腫瘤藥物研究及新藥篩選-預覽頁
【正文】 制相關的癌基因 (如 bcl2,bcr/abl,NF/KB等 )的表達產(chǎn)物可阻斷或阻礙多種因素 (如化療藥物、輻射、激素等 )誘導的腫瘤細胞凋亡，產(chǎn)生耐藥性。 CsA在 MDR中可調(diào)節(jié)藥物的運輸，使抗癌藥在細胞內(nèi)積累增加，外排減少，從而增加抗腫瘤藥物的敏感性。其在體內(nèi)的生理活性代謝產(chǎn)物包括全反式維甲酸 (ATRA)、 13順維甲酸(13cisRA)和 9順維甲酸 (9cisRA)，它們可通過核維甲酸受體 (RAR)結(jié)合于 DNA應答元件，從而調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄。 AODNs 可以與其靶 RNA鏈互補結(jié)合，形成 RNADNA雜交雙鏈。另外， AODNs 如果和 mRNA結(jié)合可作用于內(nèi)含子外顯子接合處以中斷其拼接 過程。其總體思路是通過加強關鍵基因的 RNAi機制，控制疾病中出現(xiàn)異常的蛋白合成進程或外源致病核酸的復制及表達。目前，國際上與腫瘤治療相關的抗體研究主要集中在將抗體與耦聯(lián)物作用后直接殺傷腫瘤細胞，利用抗體促進腫瘤細胞凋亡和抑制腫瘤血管生成等方面。 HER2可以活化多種信號傳導通路，包括 PI3K、MAPK等。 Trastuzumab處理的細胞被阻滯于 G1調(diào)定點，細胞增殖減少。 ④抑制血管形成。體外研究顯示可與許多化療藥物產(chǎn)生協(xié)同效應。 體外抗腫瘤活性試驗常用方法 體外試驗常用方法有： ? 染料排斥法 ? 四氮唑鹽還原法 ? 阿拉馬藍法 ? 磺酰羅丹明染色法 ? 集落形成法 ? 生長曲線測定法。 ? 方法要點：向一定容積的待檢細胞懸液加入定量的某種染液，最常用的是 %臺盼藍液，混勻，室溫染色 515min，將已染色的細胞懸液滴加至血細胞計數(shù)板，直接在光鏡下計數(shù)活細胞數(shù)和細胞總數(shù)。 ? 方法要點：細胞經(jīng)受試樣品處理后，加入 1020ul阿拉馬藍染液，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間，用微培養(yǎng)板自動讀數(shù)儀在激發(fā)與發(fā)射波長分別為 530nm和 590nm處讀取熒光強度值。它反映了單個細胞的增殖潛力，故能較靈敏地測定抗癌藥的活性，日前被認為是一種較理想的檢測方法。隨著細胞密度不斷增高，由于代謝產(chǎn)物的積聚及營養(yǎng)物的消耗，細胞生長逐漸減慢以致停止，此時稱高坪期或穩(wěn)定期。 ? 觀測指標 倍增時間 (TD),將實際生在曲線進行直線回歸求出 0和 t時刻的理論細胞數(shù) N0和 N t，據(jù)此計算： TD=（ log N t— log N0）；2 增殖細胞殺傷率（ %） =( N0— N0’)/ N0 100%； 3 細胞生長飽和密度（ N s），代表高坪期每毫升細胞數(shù)的均數(shù)。故可用作細胞數(shù)的定量。 ? 觀測指標 同 MTT法。 按生長抑制率或細胞死亡率對樣品濃度繪出量效關系曲線圖，并求出： GI50，即生長抑制率為 50%時的樣品濃度； TGI，即生長抑制率為 100%時的樣品濃度： LC50，即細胞死亡率為 50%時的樣品濃度。 ? 方法要點：受試樣品處理細胞結(jié)束后，加入 5mg/ml MTT液 20微升 /孔，繼續(xù)培養(yǎng)四小時。 體外抗腫瘤活性試驗 體外篩選方法的優(yōu)點： 操作簡單 用藥量少 取材可直接用于人體腫瘤 得出結(jié)果快速 4020020406080100K101K102K103K104K201K202K203K204K205K206K207K208K209K301K302K303K304K305K306K307QGY7701A540NCIH460Case: Activity of 20 pounds on the growth of three cancer cell lines Provider: C Biotech Company Human NCIH460 lung cancer cell without treatment Human NCIH460 lung cancer cell With Compound A treatment 體外抗腫瘤活性試驗 體外篩選方法的缺陷： 細胞毒性易顯陽性，有毒物質(zhì)也常常顯陽性，故假陽性率高 非直接對腫瘤細胞作用的藥物顯示假陰性 體外細胞并不能完全代表體內(nèi)腫瘤的惡性細胞 體內(nèi)抗腫瘤活性試驗 自發(fā)性腫瘤 誘發(fā)的腫瘤 移植性腫瘤 （ a）皮下腫瘤模型 （ b）腹水瘤模型 （ c）原位接種模型 體內(nèi)抗腫瘤活性試驗 小鼠腫瘤模型 淋巴細胞白血病腹水瘤 L1210和 P38白血病 L61宮頸癌 U1肝癌 H2 Lewis肺癌、黑色素瘤 B1網(wǎng)織細胞瘤 M507腸癌2腸腺癌 3乳腺癌 CD8F艾氏腹水瘤（ EAC）、肉瘤 180等，以及各種小鼠腫瘤的亞型和耐藥株等。 (3) 對模型生長情況應全面了解，尤其是生長快的模型 (4) 為了保持移植瘤的生物學特性和遺傳特性，復蘇后移植瘤體內(nèi)傳代應少于 1520代 體內(nèi)抗腫瘤活性試驗 ? 接種： 腫瘤接種方法主要有皮下接種、腹腔接種和原位接種。 體內(nèi)抗腫瘤活性試驗 原位接種模型 原位接種是指將來源于某臟器的腫瘤接種在動物的某臟器，如將人肝癌接種在裸小鼠的肝臟。給藥途徑應與推薦臨床用藥的途徑相同。 抗腫瘤藥物的篩選和評價 以國立腫瘤研究所（ Nationai Cancel Institute NCI)為代表的美國抗腫瘤藥物篩選模式經(jīng)歷了三個發(fā)展階段。 ? 1990至今，以人腫瘤細胞株為基礎、疾病本位的體外抗腫瘤藥物篩選體系，其目的在于發(fā)現(xiàn)對某種組織類型腫瘤活性強但可能對其他組織類型腫瘤活性弱的化合物。 ? 體外抗瘤譜試驗選用了正常細胞株，綜合考慮了受試樣品對正常組織的毒性
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