抗腫瘤藥物研究及新藥篩選-預(yù)覽頁
【正文】 制相關(guān)的癌基因 (如 bcl2,bcr/abl,NF/KB等 )的表達(dá)產(chǎn)物可阻斷或阻礙多種因素 (如化療藥物、輻射、激素等 )誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生耐藥性。 CsA在 MDR中可調(diào)節(jié)藥物的運(yùn)輸，使抗癌藥在細(xì)胞內(nèi)積累增加，外排減少，從而增加抗腫瘤藥物的敏感性。其在體內(nèi)的生理活性代謝產(chǎn)物包括全反式維甲酸 (ATRA)、 13順維甲酸(13cisRA)和 9順維甲酸 (9cisRA)，它們可通過核維甲酸受體 (RAR)結(jié)合于 DNA應(yīng)答元件，從而調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄。 AODNs 可以與其靶 RNA鏈互補(bǔ)結(jié)合，形成 RNADNA雜交雙鏈。另外， AODNs 如果和 mRNA結(jié)合可作用于內(nèi)含子外顯子接合處以中斷其拼接 過程。其總體思路是通過加強(qiáng)關(guān)鍵基因的 RNAi機(jī)制，控制疾病中出現(xiàn)異常的蛋白合成進(jìn)程或外源致病核酸的復(fù)制及表達(dá)。目前，國際上與腫瘤治療相關(guān)的抗體研究主要集中在將抗體與耦聯(lián)物作用后直接殺傷腫瘤細(xì)胞，利用抗體促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡和抑制腫瘤血管生成等方面。 HER2可以活化多種信號(hào)傳導(dǎo)通路，包括 PI3K、MAPK等。 Trastuzumab處理的細(xì)胞被阻滯于 G1調(diào)定點(diǎn)，細(xì)胞增殖減少。 ④抑制血管形成。體外研究顯示可與許多化療藥物產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。 體外抗腫瘤活性試驗(yàn)常用方法 體外試驗(yàn)常用方法有： ? 染料排斥法 ? 四氮唑鹽還原法 ? 阿拉馬藍(lán)法 ? 磺酰羅丹明染色法 ? 集落形成法 ? 生長曲線測(cè)定法。 ? 方法要點(diǎn)：向一定容積的待檢細(xì)胞懸液加入定量的某種染液，最常用的是 %臺(tái)盼藍(lán)液，混勻，室溫染色 515min，將已染色的細(xì)胞懸液滴加至血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，直接在光鏡下計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞總數(shù)。 ? 方法要點(diǎn)：細(xì)胞經(jīng)受試樣品處理后，加入 1020ul阿拉馬藍(lán)染液，繼續(xù)培養(yǎng)一定時(shí)間，用微培養(yǎng)板自動(dòng)讀數(shù)儀在激發(fā)與發(fā)射波長分別為 530nm和 590nm處讀取熒光強(qiáng)度值。它反映了單個(gè)細(xì)胞的增殖潛力，故能較靈敏地測(cè)定抗癌藥的活性，日前被認(rèn)為是一種較理想的檢測(cè)方法。隨著細(xì)胞密度不斷增高，由于代謝產(chǎn)物的積聚及營養(yǎng)物的消耗，細(xì)胞生長逐漸減慢以致停止，此時(shí)稱高坪期或穩(wěn)定期。 ? 觀測(cè)指標(biāo) 倍增時(shí)間 (TD),將實(shí)際生在曲線進(jìn)行直線回歸求出 0和 t時(shí)刻的理論細(xì)胞數(shù) N0和 N t，據(jù)此計(jì)算： TD=（ log N t— log N0）；2 增殖細(xì)胞殺傷率（ %） =( N0— N0’)/ N0 100%； 3 細(xì)胞生長飽和密度（ N s），代表高坪期每毫升細(xì)胞數(shù)的均數(shù)。故可用作細(xì)胞數(shù)的定量。 ? 觀測(cè)指標(biāo) 同 MTT法。 按生長抑制率或細(xì)胞死亡率對(duì)樣品濃度繪出量效關(guān)系曲線圖，并求出： GI50，即生長抑制率為 50%時(shí)的樣品濃度； TGI，即生長抑制率為 100%時(shí)的樣品濃度： LC50，即細(xì)胞死亡率為 50%時(shí)的樣品濃度。 ? 方法要點(diǎn)：受試樣品處理細(xì)胞結(jié)束后，加入 5mg/ml MTT液 20微升 /孔，繼續(xù)培養(yǎng)四小時(shí)。 體外抗腫瘤活性試驗(yàn) 體外篩選方法的優(yōu)點(diǎn)： 操作簡單 用藥量少 取材可直接用于人體腫瘤 得出結(jié)果快速 4020020406080100K101K102K103K104K201K202K203K204K205K206K207K208K209K301K302K303K304K305K306K307QGY7701A540NCIH460Case: Activity of 20 pounds on the growth of three cancer cell lines Provider: C Biotech Company Human NCIH460 lung cancer cell without treatment Human NCIH460 lung cancer cell With Compound A treatment 體外抗腫瘤活性試驗(yàn) 體外篩選方法的缺陷： 細(xì)胞毒性易顯陽性，有毒物質(zhì)也常常顯陽性，故假陽性率高 非直接對(duì)腫瘤細(xì)胞作用的藥物顯示假陰性 體外細(xì)胞并不能完全代表體內(nèi)腫瘤的惡性細(xì)胞 體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn) 自發(fā)性腫瘤 誘發(fā)的腫瘤 移植性腫瘤 （ a）皮下腫瘤模型 （ b）腹水瘤模型 （ c）原位接種模型 體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn) 小鼠腫瘤模型 淋巴細(xì)胞白血病腹水瘤 L1210和 P38白血病 L61宮頸癌 U1肝癌 H2 Lewis肺癌、黑色素瘤 B1網(wǎng)織細(xì)胞瘤 M507腸癌2腸腺癌 3乳腺癌 CD8F艾氏腹水瘤（ EAC）、肉瘤 180等，以及各種小鼠腫瘤的亞型和耐藥株等。 (3) 對(duì)模型生長情況應(yīng)全面了解，尤其是生長快的模型 (4) 為了保持移植瘤的生物學(xué)特性和遺傳特性，復(fù)蘇后移植瘤體內(nèi)傳代應(yīng)少于 1520代 體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn) ? 接種： 腫瘤接種方法主要有皮下接種、腹腔接種和原位接種。 體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn) 原位接種模型 原位接種是指將來源于某臟器的腫瘤接種在動(dòng)物的某臟器，如將人肝癌接種在裸小鼠的肝臟。給藥途徑應(yīng)與推薦臨床用藥的途徑相同。 抗腫瘤藥物的篩選和評(píng)價(jià) 以國立腫瘤研究所（ Nationai Cancel Institute NCI)為代表的美國抗腫瘤藥物篩選模式經(jīng)歷了三個(gè)發(fā)展階段。 ? 1990至今，以人腫瘤細(xì)胞株為基礎(chǔ)、疾病本位的體外抗腫瘤藥物篩選體系，其目的在于發(fā)現(xiàn)對(duì)某種組織類型腫瘤活性強(qiáng)但可能對(duì)其他組織類型腫瘤活性弱的化合物。 ? 體外抗瘤譜試驗(yàn)選用了正常細(xì)胞株，綜合考慮了受試樣品對(duì)正常組織的毒性
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