【正文】 摸索，干擾成分難以排除，則也可鑒別其它藥味；但應(yīng)在起草說明中寫明理由。 中成藥顯微鑒定時(shí)，一般需要根據(jù)處方的配比，抓住主要藥味的鑒別特征，并對(duì)各組成藥材逐一分析比較，排除某些類似細(xì)胞組織和內(nèi)含物的干 擾，選取各藥材在該中成藥中具有專屬性的顯微特征作為鑒別依據(jù)。 所收載的顯微特征必須明顯、易察見。 取樣 注意代表性，一般取 10 片（丸）研成細(xì)粉，混勻后，取少量裝片鏡檢。 鑒別時(shí)，用水或甘油醋酸試液裝片觀察淀粉粒、粘膠細(xì)胞或糊化的淀粉團(tuán)塊等；用水合氯醛試液不加熱觀察菊糖等一些多糖類物質(zhì)，加熱觀察組織細(xì)胞特征。長(zhǎng)寬度的測(cè)量用經(jīng)載臺(tái)量尺標(biāo)定的顯微量尺測(cè)量。 細(xì)胞壁性質(zhì)的檢定，可按《中國(guó)藥典》現(xiàn)行版附錄有關(guān)的檢定法對(duì)細(xì)胞壁的木質(zhì)化、木栓化、角質(zhì)化、硅質(zhì)化進(jìn)行檢定。一般皮層薄壁細(xì)胞較大，等徑類圓形，細(xì)胞間隙明顯而韌皮部薄壁細(xì)胞窄長(zhǎng)，間隙少或沒有。如當(dāng)歸的韌皮薄壁細(xì)胞?，F(xiàn)實(shí)木栓細(xì)胞垂周壁平直還是彎曲，有否木栓化增厚，如均勻增厚形成木栓石細(xì)胞（其細(xì)胞間沒有間隙，可區(qū)分其他部位的石細(xì)胞群）。分泌揮發(fā)油細(xì)胞又稱油細(xì)胞，注意其形狀和色澤。前者是單獨(dú)的細(xì)胞，可以數(shù)個(gè)相連成管狀；后者是軸向連而末端壁部分或 全部溶解，錯(cuò)綜連接而成網(wǎng)狀系統(tǒng)。心材藥材的導(dǎo)管內(nèi)注意有無侵填體。典型的木纖維具有木質(zhì)化的次生壁，為長(zhǎng)軸的紡錘狀細(xì)胞，胞腔一般較小，壁上具有退化 的具緣紋孔（纖維管胞）至裂隙狀單紋孔（韌型纖維）。注意其形狀（有否分枝）、大小（長(zhǎng)寬、直徑）、壁厚度、層紋和紋孔、孔徑。毛茸有非腺毛、腺毛兩種。單列式多細(xì)胞非腺毛，注意觀察其色澤、全長(zhǎng)、頂端細(xì)胞長(zhǎng)度，直徑、壁厚度及其排列方向（編彎、倒抑、彎曲等）。是花類藥材的重要顯微特征?；ǚ哿Ｃ劝l(fā)器官是花粉的重要形態(tài)特征。 B．草酸鈣結(jié)晶：觀察其形狀（方晶、族晶、針晶、砂晶、 柱晶），大小及其在細(xì)胞內(nèi)排列方式。如已有文獻(xiàn)報(bào)道，該藥材含有已知的有效成分者，應(yīng)首選已知的有效成分的鑒別試驗(yàn)，如確不能檢出時(shí)方可選擇其他未知的 特征 成分作為鑒別項(xiàng)目。作為共性特征的理化鑒別，如呈色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、熒光反應(yīng)、泡沫試驗(yàn)等對(duì)復(fù)方制劑中的某個(gè)藥材的鑒別專屬性更差，在選用時(shí)尤需謹(jǐn)慎。對(duì)實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)、操作和結(jié)果的判斷等都應(yīng)嚴(yán)格。 薄層鑒別試驗(yàn)必需注意目的性、針對(duì)性、重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。但這只能說明在該品種中含有人參皂甙類的成分，不能說明其含何種人參皂甙，所以一般不應(yīng)作 為首選的方法。 試驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)有對(duì)照品及對(duì)照藥材， 并需作陰性對(duì)照（即除去欲鑒別的藥味的 陰性 對(duì)服液）。有的是結(jié)合含量測(cè)定項(xiàng)目 進(jìn)行。 高效液相色譜很少直接用于中藥制劑的鑒別，如果含量測(cè)定采用了高效液相色譜法，則可在含量測(cè)定項(xiàng)目的進(jìn)行中考察可否間接地用于定性鑒別。 薄層色譜的規(guī)范化技術(shù)要求 ① 儀器與材料 A 薄層板 可用手工自制板或預(yù)制板，用于制備薄層板的玻璃板要求表面光潔，平整，最好使用厚度為 l2mm 的優(yōu)質(zhì)平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄層極，玻璃板需用洗液或堿液洗凈至不掛水，晾干，貯存于干燥潔凈處備用；反復(fù)使用時(shí)應(yīng)注意需再 用洗液或堿液清洗，如選用預(yù)制板應(yīng)注意生產(chǎn)廠家提供的有關(guān)參數(shù)，挑選，檢查并試用是否符合要求。商品有手工、半自動(dòng)及自動(dòng)薄層板涂布器。 為了提高點(diǎn)樣效率，還可選用點(diǎn)樣輔助設(shè)備，如點(diǎn)樣支架，半自動(dòng)或自動(dòng)點(diǎn)樣器。水平式展開箱可以從薄層板的兩側(cè)向中間展開，展距 5cm（特別是高效薄層板），所以一塊薄層板所承受的樣品個(gè)數(shù)比常規(guī)上行法展開增加了一倍。噴霧瓶應(yīng)能在一定壓力下使試劑噴成均勻的細(xì)霧狀。 紫外光燈有長(zhǎng)波段（ 365nm）和短波段（ 254nm）紫外光管，前者用于觀察具有熒光的色譜，后者一般用于觀察硅膠 GFS254板色譜在薄層板面的 熒光背景下出現(xiàn)的暗藍(lán)紫色吸收斑點(diǎn)，選用紫外光燈應(yīng)注意熒光管的功率和濾光片的性能。薄層厚度一般為 ～，由于國(guó)產(chǎn) 常用的硅膠顆粒大小分布范圍較寬（ 10～ 40μm ），如果顆粒分布不夠均勻，而粗顆占比例較多時(shí)，涂布的太薄反而降低分離能力，有的品種，如人參甚至要求用 薄層板。在質(zhì)量 保證的前提下，應(yīng)盡量選用預(yù)制薄層極，以提高時(shí)效和色譜的重現(xiàn)性。 C 展開 點(diǎn)樣后的薄層板置入加有展開劑的薄層展開箱中，密閉，一般采用上行展開，薄層板浸入展開劑深度一般要求溶劑最初的前沿距原點(diǎn)約 5mm，展開至規(guī)定展開距后立即將薄層權(quán)取出，晾干，以備檢測(cè)。 D 檢測(cè) 色譜斑點(diǎn)本身有顏色者可直接在日光下觀察色譜中的色斑，本身在紫外光激發(fā)下可發(fā)射熒光者可直接置紫外光燈下觀察熒光色譜、需加試劑后方能顯色或發(fā)射熒光者，則可將試劑用噴霧器均勻噴灑于薄層板面（或用浸漬法），再按規(guī)定直接觀察或加熱后觀察。以下所述的幾個(gè)方面不僅對(duì)定量分析是必須注意的問題，對(duì)提高定性分析的質(zhì)量也是不可忽視的。樣品提取物經(jīng)預(yù)處理，使供試液得以凈化，往往是一個(gè)重要的有時(shí)甚至是關(guān)鍵的步驟，制各樣品供試液所用的溶劑一般要求溶解度不宜太大，粘度不宜太高，沸點(diǎn)適中；但中藥制劑往往希望將各成分盡量多地提取出來，最常被選用的是甲醇或乙醇，欲測(cè)成分和許多其他 雜質(zhì) 均可能被提取出來。一般在常規(guī)薄層板上原點(diǎn)的直徑不大于 3mm，高效薄層板要求原點(diǎn)直徑不大于 2mm。如用親水性溶劑，或在較高相對(duì)濕度環(huán)境下點(diǎn)樣，點(diǎn)樣后應(yīng)將薄層板再干燥（如真空干燥）。自制的硅膠薄層板在 105～ 110℃ 加熱若干時(shí)間，就是使水合硅醇基脫水變?yōu)橛坞x硅醇基而活化。通常認(rèn)為薄層色譜重現(xiàn)性差，在不同的相對(duì)濕度下點(diǎn)樣和展開即是原因之一?？刂葡鄬?duì)濕度用的硫酸溶液配制可參考下表 表 控制相對(duì)濕度用的硫酸溶液 相對(duì)濕度（ %） 所需硫酸溶度（ V/V） 硫酸（ ml） 水（ ml） 32 68 100 42 57 100 58 100 65 34 100 72 100 88 89 D、溶劑蒸氣在薄層色譜中的作用 薄層色譜與柱色譜的區(qū)別之一就是溶劑的蒸氣相在展開箱中也參與色譜的展開而形成三維的層析過程。在實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意觀察并真實(shí)記錄試驗(yàn)條件，如展開前有無預(yù)平衡，平行時(shí)間等。 6．檢查 中藥制劑檢查項(xiàng)照現(xiàn)行版藥典附錄各有關(guān)通則（如丸劑、散劑、片劑等）項(xiàng)下規(guī)定的檢查項(xiàng)目進(jìn)行檢查，要列出具體數(shù)據(jù)或結(jié)果。必要時(shí)，將重金屬、砷鹽列入正文檢查項(xiàng)目中。如有的外用藥含醋酸，在此成分揮發(fā)后影響藥品質(zhì)量，應(yīng)將醋酸作為檢查項(xiàng)目列入正文之中。 7．浸出物 中藥制劑亦可測(cè)定浸出物以控制質(zhì)量。如處方中藥味含皂甙成分較多，可先用乙 醚去脂后，用正丁醇作溶劑測(cè)定正丁醇浸出物。 ② 制劑應(yīng)首先擇其君藥及所含貴重藥建立含量測(cè)定項(xiàng)，如含毒性藥，更應(yīng)研究建立含量測(cè)定項(xiàng)，量微者也要規(guī)定限度試驗(yàn)，列入檢查項(xiàng)中。有些制劑確因處方藥味多，干擾大，或含量極少，而非實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不合理或操作技 術(shù)問題所致，含量測(cè)定困難，未收載此項(xiàng)者，可以暫時(shí)只對(duì)原料藥材（主藥之一）規(guī)定含量測(cè)定項(xiàng)目，間接控制成藥的質(zhì)量，并繼續(xù)進(jìn)行成品的含量測(cè)定方法研究。 （ 3）含量測(cè)定方法的考察 含量測(cè)定方法可參考有關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)或有關(guān)文獻(xiàn)，也可自行研究后建立，但均應(yīng)作方法學(xué)考察試驗(yàn)。 ④ 線性關(guān)系的考察，分光光度法（包括比色法）須制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，用以確定取樣量并計(jì)算含量，但色譜法一般均采用對(duì)照品比較法、外標(biāo)或內(nèi)標(biāo)法測(cè)定，但也必須進(jìn)行線性考察，目的： A．樣品濃度與峰面積或峰高是否呈線性關(guān)系； B．線性范圍，即適用樣品點(diǎn)樣或進(jìn)樣量的確定； C．直線 是否通過原點(diǎn)，以確定是以 1 種濃度或 2種濃度對(duì)照品（即一點(diǎn)法或二點(diǎn)法）測(cè)定并計(jì)算。 中國(guó)最大的管理資源中心 第 16 頁(yè) 共 24 頁(yè) ⑦ 重復(fù)性試驗(yàn)；按擬定的含量測(cè)定方法，對(duì)同一批樣品進(jìn)行多次測(cè)定（平行試驗(yàn)至少 5 次以上，即 n＞ 5）計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（ RSD），一般要求應(yīng)根據(jù)樣品含量高低和含量測(cè)定方法的繁簡(jiǎn)；如含量很低一般不大于 5％；含量較高的，則應(yīng)從嚴(yán)要求。 A：樣品所含被測(cè)成分量 B：加入純品量 C：實(shí)測(cè)值 回收率試驗(yàn)至少需進(jìn)行 5 次試驗(yàn)（ n=5），或三組平行試驗(yàn)（ n=6），加人欲測(cè)樣品或成分量相同或不同，后者則可進(jìn)一步驗(yàn)證測(cè)定方法取樣量多少更為適合。 回收率一般要求在 95105％，有些方法操作步驟繁復(fù)，可要求在 90－ 110％。 ⑤ 樣品測(cè)定，以說明所建方法的應(yīng)用情況，至少測(cè)三批樣品。 ② 規(guī)定標(biāo)示量 95－ 105％或 85－ 115％。如香連丸、六味地黃丸，對(duì)所測(cè)成分如黃連中總生物堿以鹽酸小檗堿計(jì)不得少于 5． 6％，山茱萸中熊果酸，丹皮中丹皮酚分別不得少于 ％； ％（蜜丸）。達(dá)不到要求者可以不進(jìn)貨，不投料，以保證產(chǎn)品質(zhì)量。用除去被測(cè)成分后的其它組分制備一種 背景空白 ，消除干擾成分的測(cè)定數(shù)值，此法無推廣價(jià)值，也不可上法定標(biāo)推，只能在工藝穩(wěn)定，原料來源不變的情況下，作為企業(yè)內(nèi)控方法，暫時(shí)使用。但如處方中含有不同藥味均含皂甙，有的甚至不是皂甙而是各種甙類，例如處方中含有黃芪、人參、地黃、知母、赤芍等，而以黃芪甲甙或人參皂甙 Re 為對(duì)照員測(cè)定并計(jì)算含量。 用法與用量：先寫用法，后寫一次量及一日使用次數(shù)；同時(shí)可供外用的，則列在服用量后，并用分號(hào)隔開。 規(guī)格：規(guī)格的寫法有以重量計(jì)、以裝置計(jì)、以標(biāo)示量計(jì)等，以重量計(jì)的，如丸、片劑，注明每丸（或片）的重量；以裝量計(jì)的，如散劑、膠囊劑、液體制劑，注明每包（或瓶、粒）的裝置； 以標(biāo)示量計(jì)的，注明每片的含量。 1．名稱、漢語拼音 說明命名的依據(jù)和意義。詳細(xì)研究資料列入 4 號(hào)資料中。片劑及丸劑如包衣者，應(yīng)就片芯及丸芯進(jìn)行描述；硬膠囊就其內(nèi)容物描述。 中國(guó)最大的管理資源中心 第 19 頁(yè) 共 24 頁(yè) 要求隨資料附有關(guān)的圖譜．加顯微鑒別的粉末特征墨線圖，色譜法的色譜圖（包括陰性對(duì)照?qǐng)D譜）。重金屬、砷鹽等考查結(jié)果及列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的理由?；厥章实臏y(cè)定應(yīng)有五份以上數(shù)據(jù)，并統(tǒng)計(jì)處理計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，一般不大于 5％。 9．功能與主治、用法與用量、禁忌、注意、規(guī)格及貯藏等 根據(jù)該藥的研究情況，敘述其需要 說明的問題。如含大黃制劑， 不能單側(cè)總蒽醌，應(yīng)同時(shí)檢測(cè)游離蒽醌或結(jié)合蒽醌才能確實(shí)反映其成分的變化。 考察樣品應(yīng)在三批以上，各批樣品應(yīng)達(dá)中試以上規(guī)模，不得將同一批樣品分成三份代表三批樣品，每批樣品均應(yīng)留有足夠在穩(wěn)定性試 驗(yàn)中各次考核所需的數(shù)量。 2．檢驗(yàn)報(bào)告書 為上述報(bào)臨床研究用的樣品，根據(jù)資料 14 臨床研究用藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告（包括衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)）。 是指成品經(jīng)臨床研究后申報(bào)生產(chǎn)用的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般均較臨床用標(biāo)準(zhǔn)更加完善， 以保證上市產(chǎn)品質(zhì)量的一致性與穩(wěn)定性，從而保證藥品的安全和有效。 1．生產(chǎn)用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中各項(xiàng)目建立相應(yīng)的說明 2．曾經(jīng)進(jìn)行過的實(shí)驗(yàn)而未被收載于正文的內(nèi)容，包括臨床研究用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未被收載的內(nèi)容。 對(duì)測(cè)定方法中采用的對(duì)照品，如屬國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)收載者，則可嚴(yán)格按使用說明書規(guī)定的用途使用，如為非國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)收載品種，應(yīng)按《補(bǔ)充規(guī)定》附件九的要求提供檢定資料；如品種屬國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)收載者，但系用于定性的，而新藥用于定量者，則應(yīng)按《補(bǔ)充規(guī)定》附件九中純度與含量要求提供檢定資料。 新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品及有關(guān)資料（資料 17）按《補(bǔ)充規(guī)定》附件九的技術(shù)要求提供。 化學(xué)對(duì)照品根據(jù)不同的用途可分為： 1．鑒別用； 2．純度或雜質(zhì)檢查用； 3．含量測(cè)定用； 4．校正儀器用。 （ 2）確證：天然產(chǎn)物中成分復(fù)雜，常有同系物或異構(gòu)體存在，因之要對(duì)其化學(xué)結(jié)構(gòu) 加以確證，如測(cè)定熔點(diǎn)、紅外、紫外、核磁、質(zhì)譜 …… 等至少三個(gè)數(shù)據(jù)，并與已知文獻(xiàn)核對(duì)，如無文獻(xiàn)依據(jù)，則可按未知物對(duì)待，分析各種光譜圖及有關(guān)參數(shù)，應(yīng)與所需求的化學(xué)物質(zhì)吻合。雜質(zhì)的出現(xiàn)與樣品量密切相關(guān)，有些文獻(xiàn)記述所用對(duì)照品系色譜純或呈一斑點(diǎn)，并未提及樣品量，可信性差，薄層鑒別用對(duì)照品至少應(yīng)按標(biāo)準(zhǔn)中采用方法數(shù)倍量點(diǎn)樣，要求檢不出雜質(zhì)點(diǎn)，并按 20－ 100μg 梯度點(diǎn)樣得出色譜，便于了解純度情況并存檔備查。 ② 雜質(zhì)檢查用 中國(guó)最大的管理資源中心 第 22 頁(yè) 共 24 頁(yè) 中國(guó)藥典 1990 版一部收載制川烏需檢酯型生物堿，以烏頭堿汁；同版二部收載鹽酸小檗堿中檢巴馬汀及藥根堿等，雜質(zhì)檢查用對(duì)照品純度要求除做薄層檢查外還必須做色譜歸一化法測(cè)定，并盡可能做含量測(cè)定。（如上例，藥根堿純度如為 80％，鹽酸小檗堿點(diǎn)樣 6μg ，實(shí)則出現(xiàn)藥根堿不得比 （ 80% ）班點(diǎn)深，即不得過 4%），含量限度參見含量測(cè)定用對(duì)照品項(xiàng)下，要求基本相同。 也可用相溶度分析和差示掃描熱量法等，均為根