【正文】 加 。 選擇肌苷酸酶弱或喪失的出發(fā)菌株；252。 模型：Ade－ + Xa－ + dea－ + GMPred－ + 8AGr（或 8AXr、 ARr） + SGr + NP－ + ARr + Smr （符號見《微生物工程工藝原理》 ）4）選育 Mn2+脫敏突變株（ MnINS），或控制培養(yǎng)基中 Mn2+的濃度，解除細(xì)胞膜滲透型障礙。另一方面，核苷酸的代謝也與組氨酸的生物合成有關(guān)：252。 SAMP→AMP 反應(yīng)的供能體為 GTP， XMP→GMP 反應(yīng)的供能體為 ATP。216。216。枯草桿菌的嘌呤核苷酸生物合成途徑琥珀酰腺苷酸 黃苷酸肌苷酸腺苷酸鳥苷酸（ 5胺基 4氨甲酰咪唑核苷酸）（ 5胺基 4（ N琥珀基） 代氨甲酰咪唑核苷酸）（ 5磷酸核糖胺）（磷酸核糖焦磷酸）葡萄糖 →→→5 磷酸核糖 →產(chǎn)黃短桿菌的嘌呤核苷酸生物合成途徑2. 嘧啶核苷酸的全合成途徑（略）3. 核苷酸生物合成的補(bǔ)救途徑當(dāng)全合成受阻時，微生物可從培養(yǎng)基中取得完整的嘌呤或嘧啶，和戊糖、磷酸通過酶的作用直接合成單核苷酸，稱為 “補(bǔ)救途徑 ”。 IMP 的生成（ “從無到有 ”）嘌呤核苷酸的全合成途徑 (2) —— AMP 和 GMP的互變（枯草芽孢桿菌）各種微生物合成 IMP 的途徑是一樣的，但是從 IMP分別生成AMP和 GMP的途徑是不同的。 谷氨酸脫氫酶的活力很強(qiáng) ，并喪失谷氨酸對谷氨酸脫氫酶的反饋抑制和 反饋阻遏，同時， NADPH2再氧化能力弱，這會使 ?酮戊二酸到琥珀酸 的過程受阻；252。216。 Glu生產(chǎn)菌大多是生物素缺陷型，發(fā)酵時控制生物素亞適 量，使細(xì)胞變形拉長，改變了細(xì)胞膜的通透性引起代謝失 調(diào)使 Glu得以積累。 在微生物的代謝中， Glu比 Asp優(yōu)先合成；合成過量時則抑制谷氨酸脫氫酶，使代謝轉(zhuǎn)向合成 Asp； Asp過量時反饋抑制 PEP羧化酶的活力，停止合成草酰乙酸。 谷氨酸菌存在 CO2固定生成草酰乙酸的 PEP羧化酶和蘋果酸酶， 與谷氨酸得率正相關(guān)；252。216。252。 基因工程菌：生產(chǎn) L色氨酸（大腸桿菌）、 L蘇氨酸（ 55 g/L） 。252。252。216。若幾種氨基酸有一個共同的前體應(yīng)切斷其它氨基酸的合成途徑；252。一種氨基酸可能是另一種氨基酸的前體；216。216。氨基酸p氨基酸發(fā)酵機(jī)理和菌種選育216。252。 異青霉素 N被青霉素?；复呋?，使側(cè)鏈裂解生成 6–APA，它是合成各 種半合成青霉素的主要原料。252。 但現(xiàn)在用同位素試驗證實纈氨酸的異丙基完整的摻入了青霉素，否定 了上述結(jié)論。216。 L–纈氨酸在形成三肽的 過程中，改變構(gòu)型成 D–型。252。252。母核由 β– 內(nèi)酰胺環(huán)（ B環(huán)）和噻唑環(huán)（ A環(huán)）組成，稱為 6– 氨基青霉烷酸。異青霉素 N 的形成p青霉素的合成青霉素是含有青霉素母核（ 6–APA ）的一類化合物的總稱。p具體產(chǎn)品介紹252。抗生素概況p 根據(jù)抗生素的化學(xué)結(jié)構(gòu)分類化學(xué)結(jié)構(gòu)決定抗生素的理化性質(zhì)、作用機(jī)制和療效。干擾素是一類在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)，其活性的發(fā)揮又受細(xì)胞基因組的調(diào)節(jié)和控制，涉及 RNA和蛋白質(zhì)的合成。216。252。 人胰島素 (Insulin)：216。B 非蛋白質(zhì)類雜質(zhì)：主要有病毒和細(xì)菌等微生物、熱原、熱原質(zhì)、內(nèi)毒素、致敏原及 DNA。 雜質(zhì)：蛋白質(zhì)、非蛋白質(zhì)。（ 3）純度分析純度分析是基因工程藥物質(zhì)量控制的關(guān)鍵項目，包括：目的蛋白質(zhì)含量測定和雜質(zhì)限量分析兩個方面的內(nèi)容。 濃度測定方法主要有：凱氏定氮法、雙縮脲法、染料結(jié)合比色法、福林 －酚法和紫外光譜法等。 氨基酸成分分析：對目的產(chǎn)物的純度仍可以提供重要信息。 目標(biāo)產(chǎn)品的質(zhì)量控制（ 1）產(chǎn)品鑒別216。培養(yǎng)過程的質(zhì)量控制（ 4）始終能排除外源微生物污染。 分離純化的基本過程分離純化是基因工程藥物生產(chǎn)中極其重要的一環(huán)。（ 4）在高拷貝質(zhì)粒（ 240）工程菌中，前體大量被利用而引起不足，產(chǎn)生 “嚴(yán)緊反應(yīng) ”（ ppGpp），核糖體及有關(guān)酶水平比宿主細(xì)胞低。二、菌體生長與能量（碳源）的關(guān)系（ 1）菌體生長最大比生長速率由呼吸控制；（ 2）菌體生長所需能量大于有氧代謝所能提供的能量時，代謝副產(chǎn)物乙酸 能抑制菌體的生長，尤其在高密度培養(yǎng)時；（ 3）分批培養(yǎng)中選用不同的碳源、補(bǔ)料培養(yǎng)中控制補(bǔ)料速度、連續(xù)培養(yǎng)中 控制稀釋速率等；通過降低供能速度和前體供應(yīng)速度來控制菌體的糖酵解速度，使之低于三羧酸循環(huán)和呼吸鏈的最大代謝能力，避免 乙酰輔酶 A的積累， 減少乙酸產(chǎn)生和抑制；在一定范圍能控制菌體生長，實現(xiàn)高密度培養(yǎng)和提高產(chǎn)物的表達(dá)水平。選擇培養(yǎng)方式（ 1）補(bǔ)料分批培養(yǎng)：注意溶氧、流加補(bǔ)料；（ 2）連續(xù)培養(yǎng)：兩階段連續(xù)培養(yǎng)，控制和優(yōu)化誘導(dǎo)水平、稀釋率、細(xì)胞比生長速率。l 基因工程產(chǎn)品生產(chǎn)流程工程菌選擇 設(shè)計發(fā)酵反應(yīng)器 選擇培養(yǎng)方式確定發(fā)酵培養(yǎng)基組分 工藝優(yōu)化與參數(shù)監(jiān)控計算機(jī)的應(yīng)用生物催化劑的使用產(chǎn)品分離、純化 基因工程藥物的質(zhì)控工程菌選擇能用一般基因重組技術(shù)獲得； 有高產(chǎn)潛力；能以工業(yè)原料（碳源）為培養(yǎng)基；生產(chǎn)工藝能用一般工業(yè)生產(chǎn)經(jīng)驗；能產(chǎn)生、分泌蛋白質(zhì)；不致病、無毒性；生產(chǎn)安全，符合國家衛(wèi)生部門規(guī)定；代謝能控制；產(chǎn)品有特異性；發(fā)酵液黏度??；u甲醇營養(yǎng)型巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)l具有甲醇精確誘導(dǎo)調(diào)控的醇氧化酶（ AOX）啟動子 PAOX；u以甲醇作為唯一碳源和能源是其主要特征；216。據(jù)估計，人用蛋白藥物的全球市場，每年可達(dá) 200億美元，在這種巨大利益驅(qū)使下，世界各大制藥公司相繼投入巨資用于這些重組蛋白藥物的研究開發(fā)。有 50%～ 70%的把握在畢赤酵母系統(tǒng)表達(dá)絕大部分蛋白， 且達(dá)到相當(dāng)水平，其中大部分可成為醫(yī)藥制品。與基因工程菌培養(yǎng)有關(guān)的幾個問題一 、基因工程菌生長代謝的特點（ 1）菌體生長速率反映蛋白質(zhì)的合成速度；（ 2）控制菌體生長可提高質(zhì)粒穩(wěn)定性，減少代謝副產(chǎn)物的積累 和提高外源性蛋白產(chǎn)率；（ 3）能量的供應(yīng)決定菌體的最大比生長速率；（ 4）小分子前體和催化組分的限制決定菌體的最大比生長速率。（ 2）由于基因工程菌質(zhì)粒的復(fù)制和外源基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯需要與宿主細(xì)胞 競爭共同的前體和催化結(jié)構(gòu)，從而加劇了這些成分的不足；（ 3）在中等拷貝質(zhì)粒（ 56）工程菌中，外源基因的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯引起 菌體內(nèi)前體濃度的降低，可誘導(dǎo)與前體合成有關(guān)的酶相對水平增加（與 宿主細(xì)胞比）。216。目的基因、表達(dá)載體、宿主細(xì)胞252。252。216。（ 2）重組蛋白質(zhì)的濃度測定和相對分子質(zhì)量測定216。凝膠過濾法是測定完整的蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量；蛋白質(zhì)亞基的相對分子質(zhì)量測定采用 SDS－ PAGE法。216。同時需輔以電泳等其他檢測手段對其加以補(bǔ)充和驗證。（ 5）穩(wěn)定性考察（ 6）產(chǎn)品一致性保證產(chǎn)品保存的質(zhì)量控制l 液態(tài)：低溫、穩(wěn)定 pH、高濃度、加保護(hù)劑；l 固態(tài)p具體產(chǎn)品介紹252。如丹麥 Novo用重組酵母 分泌產(chǎn)生胰島素原，再用酶法轉(zhuǎn)化為人胰島素。它有多種生物功能，主要是刺激身體生長。 干擾素（ Interferon， IFN）216。可采用重組大腸桿菌生產(chǎn)。據(jù)統(tǒng)計 ，至 2023年，全球抗生素年總產(chǎn)值達(dá) 250多億美元，其中頭孢菌素類最多，約為 150億美元；青霉素 55億美元；其余 50億美元。生物合成機(jī)制頭孢菌素 C和青霉素結(jié)構(gòu)非常近似，見下圖。側(cè)鏈?zhǔn)怯?α– 氨基己二酸構(gòu)成的。 前體、二肽及三肽的合成纈氨酸、半胱氨酸和 α–氨基己二酸的合成：以葡萄糖為原料，經(jīng) EMP途徑產(chǎn)生丙酮酸。 丙酮酸進(jìn)入 TCA循環(huán)，產(chǎn)生異檸檬酸，在異檸檬酸裂解酶催化下產(chǎn)生 乙醛酸，再經(jīng)還原、氨基化、巰基化