分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)流程及相關(guān)試劑、儀器概述-全文預(yù)覽
【正文】 隆和分析? DNA、 RNA的提取、純化和分析? 克隆化基因的表達(dá)及表達(dá)蛋白的純化和功能分析? 基因轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)及轉(zhuǎn)基因結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)起始材料的選取和準(zhǔn)備常規(guī)材料組織器官 原生質(zhì)體 \細(xì)胞 細(xì)菌 \真菌 \酵母特殊材料少量起始材料 特殊病變組織 亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)起始材料的選取和準(zhǔn)備水稻卵細(xì)胞的分離分離準(zhǔn)備工作材料的速凍長(zhǎng)期保存人工氣候箱、制冰機(jī)超凈工作臺(tái)、顯微操作系統(tǒng)RNasefree 耗材、液氮罐超低溫冰箱RNase 抑制劑卵細(xì)胞 mRNA的提取、純化Oligotex系列試劑盒細(xì)胞裂解勻漿去蛋白和細(xì)胞殘?jiān)鼫卦〔⒔Y(jié)合洗脫去鹽和回收旋渦混勻器離心機(jī)恒溫水浴鍋離心機(jī)、旋渦混勻器200℃ 烘箱DEPC 、RNasefree DNase I 、RNasefree 耗材目標(biāo)片段的克隆和分析? 利用 SMART cDNA文庫(kù)構(gòu)建試劑盒構(gòu)建水稻卵細(xì)胞 cDNA文庫(kù)? 目標(biāo)基因的獲得? 通過(guò)噬菌體載體自切割或 TVector、平末端載體克隆獲得目標(biāo)質(zhì)粒? 利用測(cè)序儀和通用引物對(duì)克隆的目的基因測(cè)序通過(guò) SMART技術(shù)構(gòu)建 cDNA文庫(kù)第一鏈的合成第二鏈的合成和擴(kuò)增 酶切、純化和片段分離cDNA檢測(cè)插入載體并包裝文庫(kù)質(zhì)量檢測(cè)文庫(kù)擴(kuò)增及保藏恒溫水浴鍋、制冰機(jī) RTase、 RNase抑制劑PCR儀 高保真 Taq酶恒溫水浴鍋、離心機(jī) 限制性內(nèi)切酶、過(guò)濾柱電泳儀器、凝膠成像系統(tǒng) 瓊脂糖恒溫水浴鍋超凈工作臺(tái)、烘箱、 PCR儀 培養(yǎng)基超低溫冰箱 DMSO目標(biāo)基因的克隆? 利用特異探針，通過(guò)核酸雜交的方法或利用特異的抗體，通過(guò)抗原 抗體反應(yīng)進(jìn)行文庫(kù)目標(biāo)基因的篩選? 利用 GSP（基因特異引物）通過(guò) PCR擴(kuò)增出目標(biāo)基因
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