分子生物學(xué)實驗流程及相關(guān)試劑、儀器概述-文庫吧在線文庫
【正文】 反應(yīng)系統(tǒng)，通過 PCR獲得與目標(biāo)基因完全一致的 DNA片段（通過測序確證）? 體內(nèi)表達：選擇合適的表達載體插入目標(biāo)片段。最后在恒溫搖床中洗膜（探針標(biāo)記：放射性和非放射性）? 將噬菌體培養(yǎng)于平板，于 42℃ 培養(yǎng)幾小時后，于 37℃ 用 IPTG誘導(dǎo)融合蛋白的表達并印記于尼龍膜上，利用抗原 抗體反應(yīng)進行雜交利用 PCR技術(shù)獲得目標(biāo)基因? 利用 GSP，以文庫為模板通過 PCR擴增出目標(biāo)基因，并通過電泳、凝膠成像系統(tǒng)檢測? 利用文庫載體序列和已知的目標(biāo)基因的序列設(shè)計通用引物和 GSP，通過 5’RACE和3’RACE擴增出目標(biāo)基因的 5’和 3’端序列。利用化學(xué)方法或電轉(zhuǎn)化儀等手段轉(zhuǎn)入細胞表達? 體外轉(zhuǎn)錄和翻譯系統(tǒng)：兔網(wǎng)織紅細胞裂解物、小麥胚芽提取物等表達蛋白的純化? SDS聚丙烯酰胺膠回收：利用 SDS聚丙烯酰胺膠分離不同大小的的蛋白。在雜交箱中利用特定探針雜交。? 利用 6HIS、 GST（谷胱甘肽）等和親和樹脂純化：通過表達目標(biāo)基因的融合蛋白，利用親和層析洗脫出目標(biāo)蛋白? 自動核酸 /蛋白純化工作站目標(biāo)蛋白功能分析? 抗體的制備：多抗、單抗? DNA蛋白質(zhì)相互作用研究： Gelshift實驗、蛋白質(zhì)磷酸化分析、酵母單雜交系統(tǒng)等? 蛋白質(zhì) 蛋白質(zhì)相互作用研究：酵母雙雜交系統(tǒng)、噬菌體表面展示技術(shù)等蛋白體內(nèi)表達研究? Western blotting：利用抗原 抗體反應(yīng)，對蛋白質(zhì)混合物中的目標(biāo)蛋白進行鑒別和定量? 免疫組織化學(xué)研究：通過切片技術(shù)和免疫反應(yīng)，利用特異抗體檢測特定蛋白在組織細胞內(nèi)的表達和定位? 蛋白質(zhì)芯片系統(tǒng)基因轉(zhuǎn)化實驗和轉(zhuǎn)基因結(jié)果分析? 轉(zhuǎn)基因載體的構(gòu)建：載體、農(nóng)桿菌、特殊抗生素? 植株的轉(zhuǎn)化：葉盤轉(zhuǎn)化法、基因槍? 植株的篩選：熒光檢測、 GUS染
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