【正文】 ? 利用測序儀和通用引物對克隆的目的基因測序通過 SMART技術(shù)構(gòu)建 cDNA文庫第一鏈的合成第二鏈的合成和擴增 酶切、純化和片段分離cDNA檢測插入載體并包裝文庫質(zhì)量檢測文庫擴增及保藏恒溫水浴鍋、制冰機 RTase、 RNase抑制劑PCR儀 高保真 Taq酶恒溫水浴鍋、離心機 限制性內(nèi)切酶、過濾柱電泳儀器、凝膠成像系統(tǒng) 瓊脂糖恒溫水浴鍋超凈工作臺、烘箱、 PCR儀 培養(yǎng)基超低溫冰箱 DMSO目標(biāo)基因的克隆? 利用特異探針，通過核酸雜交的方法或利用特異的抗體，通過抗原 抗體反應(yīng)進(jìn)行文庫目標(biāo)基因的篩選? 利用 GSP（基因特異引物）通過 PCR擴增出目標(biāo)基因? 通過 5‘RACE和 3’RACE克隆已知部分序列的目標(biāo)基因通過核酸雜交和免疫反應(yīng)篩庫? 將培養(yǎng)于平板的噬菌斑通過印跡轉(zhuǎn)于尼龍膜，并于核酸交聯(lián)儀中固定。在雜交箱中利用特定探針雜交。最后在恒溫?fù)u床中洗膜（探針標(biāo)記：放射性和非放射性）? 將噬菌體培養(yǎng)于平板，于 42℃ 培養(yǎng)幾小時后，于 37℃ 用 IPTG誘導(dǎo)融合蛋白的表達(dá)并印記于尼龍膜上，利用抗原 抗體反應(yīng)進(jìn)行雜交利用 PCR技術(shù)獲得目標(biāo)基因? 利用 GSP，以文庫為模板通過 PCR擴增出目標(biāo)基因，并通過電泳、凝膠成像系統(tǒng)檢測? 利用文庫載體序列和已知的目標(biāo)基因的序列設(shè)計通用引物和 GSP，通過 5’RACE和3’RACE擴增出目標(biāo)基因的 5’和 3’端序列。并通過電泳、凝膠成像系統(tǒng)檢測DNA、 RNA的提取、純化和分析? 包含有目標(biāo)基因的質(zhì)粒的獲得? 水稻基因組 DNA的提取、純化和分析? 水稻各器官 Total RNA的提取、純化和分析包含有目標(biāo)基因的質(zhì)粒的獲得? 對于通過篩庫技術(shù)獲得的目標(biāo)基因? 通過噬菌體載體的自切割作用生成目標(biāo)質(zhì)