分子生物學實驗流程及相關試劑、儀器概述(更新版)
【正文】 規(guī)材料組織器官 原生質(zhì)體 \細胞 細菌 \真菌 \酵母特殊材料少量起始材料 特殊病變組織 亞細胞結(jié)構(gòu)實驗起始材料的選取和準備水稻卵細胞的分離分離準備工作材料的速凍長期保存人工氣候箱、制冰機超凈工作臺、顯微操作系統(tǒng)RNasefree 耗材、液氮罐超低溫冰箱RNase 抑制劑卵細胞 mRNA的提取、純化Oligotex系列試劑盒細胞裂解勻漿去蛋白和細胞殘渣溫浴并結(jié)合洗脫去鹽和回收旋渦混勻器離心機恒溫水浴鍋離心機、旋渦混勻器200℃ 烘箱DEPC 、RNasefree DNase I 、RNasefree 耗材目標片段的克隆和分析? 利用 SMART cDNA文庫構(gòu)建試劑盒構(gòu)建水稻卵細胞 cDNA文庫? 目標基因的獲得? 通過噬菌體載體自切割或 TVector、平末端載體克隆獲得目標質(zhì)粒? 利用測序儀和通用引物對克隆的目的基因測序通過 SMART技術(shù)構(gòu)建 cDNA文庫第一鏈的合成第二鏈的合成和擴增 酶切、純化和片段分離cDNA檢測插入載體并包裝文庫質(zhì)量檢測文庫擴增及保藏恒溫水浴鍋、制冰機 RTase、 RNase抑制劑PCR儀 高保真 Taq酶恒溫水浴鍋、離心機 限制性內(nèi)切酶、過濾柱電泳儀器、凝膠成像系統(tǒng) 瓊脂糖恒溫水浴鍋超凈工作臺、烘箱、 PCR儀 培養(yǎng)基超低溫冰箱 DMSO目標基因的克隆? 利用特異探針，通過核酸雜交的方法或利用特異的抗體，通過抗原 抗體反應進行文庫目標基因的篩選? 利用 GSP（基因特異引物）通過 PCR擴增出目標基因? 通過 5‘RACE和 3’RACE克隆已知部分序列的目標基因通過核酸雜交和免疫反應篩庫? 將培養(yǎng)于平板的噬菌斑通過印跡轉(zhuǎn)于尼龍膜，并于核酸交聯(lián)儀中固定
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