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[理學(xué)]如何做好酶切-全文預(yù)覽

2025-09-07 03:34 上一頁面

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【正文】 是否需要添加BSA, 是否使用正確的緩沖溶液。 3) 模板純度是否夠:模板制備方式影響DNA的質(zhì)量,制備過程中使用到乙醇,氯仿,苯酚,SDS, EDTA等如果殘留在最終的DNA模板中,都會不同程度影響酶的活性。 2) 模板性質(zhì)是否清楚:如果 DNA的類型變了所需要的酶量也不同。因為不同公司酶可能是從不同系統(tǒng)中純化的,雖然識別位點相同,但是酶的特性可能是有差異的。10) 是否和如何終止反應(yīng)?酶切鑒定之類的實驗不需要特殊處理。9) 反應(yīng)時間的選擇。一般不能使用振蕩器混勻。濃度過低,也會影響酶活性。用完后需要及時送回原處。 3) 正確使用和保存酶。 1) 成功酶切的關(guān)鍵是準(zhǔn)備好模板DNA。問題在什么地方?能系列生產(chǎn)限制性內(nèi)切酶的公司國際上,就那么幾個,位列前3 的是NEB, Fermentas, SibEnzyme。但是在實際操作過程中,我們不斷聽到:切不動,裝不上。下面幾點對你的酶切是有幫助的。根據(jù)酶切序列選用,特別注意選用甲基化對酶活性的干擾。手拿酶管時不要接觸酶管下步含酶的部分,移酶時盡可能用長TIP, 避免污染。5) 模板濃度問題:濃度過高,溶液黏度過大,酶不能有效擴(kuò)散,酶切效果不會好。7) 酶切反應(yīng)的各個組分加完后,需要用TIP小心混勻幾次,short spin 一
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