【正文】 無法檢出；點(diǎn)樣量過大，超過了吸附劑的線性分離范圍，會(huì)使斑點(diǎn)重疊、分離不清。如果點(diǎn)樣量較大或?yàn)榱藵饪s的目的需要反復(fù)點(diǎn)樣時(shí)，每次點(diǎn)樣的量不可過大，樣點(diǎn)直徑必須控制在 3mm以內(nèi)，重復(fù)點(diǎn)樣時(shí)，必須待前次點(diǎn)樣的樣點(diǎn)干后再點(diǎn)，以免樣點(diǎn)直徑擴(kuò)大。 ? 不同吸附劑薄層的制備條件 吸附劑 溶劑 吸附劑：溶劑 活化條件 硅膠 G 氧化鋁 G 聚酰胺 硅膠（ 5%淀粉 ） 硅膠（ CMC） 蒸餾水 蒸餾水 甲醇 蒸餾水 1%CMC水溶液 1： 2— 3 1： 1— 3 1： 4— 10 1： 2 1： 2 105110℃ 30min 200℃ 4h 80℃ 15min 105℃ 30min 105℃ 30min (二 ) 點(diǎn)樣 點(diǎn)樣是一項(xiàng)細(xì)致的工作，要求樣點(diǎn)集中，直徑不能大于 3mm。由于干板吸附劑顆粒較粗（太細(xì)推不成薄層），展開后斑點(diǎn)不太集中，所以分離效果稍差。這樣鋪好的薄層板即為干板（軟板）。或者取 CMC1g于燒杯中，加蒸餾水 100ml，在液面外和燒杯上劃一標(biāo)記，然后直火加熱至完全溶解，并補(bǔ)足消耗的水分。由于加粘合劑的種類不同，硬板又分為多種，常用的有以下幾種： ? （ 1）硅膠（氧化鋁） H板 是不加粘合劑的硬板，直接將吸附劑調(diào)成糊狀后鋪板，這種板制成后板面較軟，易破壞 。鋪層前應(yīng)用洗液浸洗，再用自來水、蒸餾水洗凈烘干，防止有油污和水漬。用于預(yù)試驗(yàn)可裁成 2 7cm或 2 10cm。若在吸附劑中加入一定量的粘性物質(zhì)即粘合劑，便可制成較牢固的薄層板。檢樣中吸附能力強(qiáng)的組分，不易發(fā)生溶解，在薄層板上移動(dòng)速度慢、距離短；反之，吸附能力弱的組分，容易溶解，在薄層板上移動(dòng)速度快、距離長(zhǎng)，從而使檢樣中各組分將按其吸附能力強(qiáng)弱不同得以分離?？梢赃M(jìn)行定性鑒定，也可以進(jìn)行含量測(cè)定?？梢允剐再|(zhì)相似的化合物，得到分離。 ? 設(shè)備簡(jiǎn)單、容易操作。運(yùn)動(dòng)失調(diào)，時(shí)而轉(zhuǎn)圈，時(shí)而倒地，步態(tài)不穩(wěn)， （ 二 ） 、眼結(jié)膜囊內(nèi)液氯化鈉的檢驗(yàn) ? [原理 ] 氯化鈉中的氯離子在酸性條件下與硝酸銀中的銀離子結(jié)合，生成不溶性的氯化銀白色沉淀。 （一） 中毒癥狀 分急性食鹽中毒和慢性食鹽中毒兩種 豬 臨床癥狀為食欲減少，口渴，流涎，頭碰撞物體，步態(tài)不穩(wěn)，轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)。檢材需做有機(jī)質(zhì)破壞，如有機(jī)質(zhì)含量不多，可直接灼燒，殘?jiān)?5%硝酸在水浴上溶解，供檢。各種毒物均可發(fā)生，反芻動(dòng)物最敏感，主要發(fā)生于牛、羊、家禽。 70 二 、 鉛的檢驗(yàn) ?鉛主要用于制造鉛蓄電池；鉛合金可用于鑄鉛字、做焊錫；鉛還用來制造放射性輻射、 X射線的防護(hù)設(shè)備；以前用作汽油的防暴劑（含鉛汽油）。 ? （ 5）如含汞量低時(shí)，可用鹽酸肼代替鹽酸進(jìn)行試驗(yàn)，其方法是取鹽酸肼 ，加入銅片（或銅絲）及檢液適量，加熱至微沸 5min再觀察結(jié)果。 ? [說明 ] ? （ 1） 本試驗(yàn)中鹽酸濃度宜在 2%8%之間，濃度過高可引起汞揮發(fā)，過低反應(yīng)不易進(jìn)行。先在水浴上加熱 10min，以除去硫化物的干擾。 ? [操作 ] ? （ 1）取銅片或銅絲 23片（卷）于試管中，加入 硝酸處理，待銅片干凈明亮后，先用水洗，再用乙醇，后用乙醚洗滌，用濾紙吸干（不能用手拿，以避免污染），備用。 ? （ 2）銅片 5 10mm或用玻璃棒將 20號(hào)銅絲繞成十圈螺旋狀。肝、腎、血液等檢材最好破壞有機(jī)質(zhì)后再進(jìn)行檢驗(yàn)。 ? （ 3）注射用硫代硫酸鈉 13g加注射用水 1020ml，溶解后，一次靜脈注射，每天 23次。 ? （ 1） 10%二巰基丙醇注射液 125250mg，一次肌肉注射。 ? 含量監(jiān)測(cè) ： 病死動(dòng)物內(nèi)臟、肝、腎、毛、糞中汞測(cè)定，有助于診斷，當(dāng)腎汞達(dá)到 1015mg/kg即可認(rèn)為是汞中毒。口腔、腸道炎癥，牙齒松動(dòng)或脫落，瘙癢脫毛，預(yù)后多不良。有些動(dòng)物皮膚發(fā)癢，啃咬皮膚、擦癢等。但用升汞消毒，汞撒利、甘汞作臨床應(yīng)用時(shí)，被犢牛、貂添食可引起局部強(qiáng)烈腐蝕作用，產(chǎn)生 口炎、舌炎、胃腸炎，開始流涎，進(jìn)而腹痛、拉稀、排綠色糞便、腐臭味 。（ 3）粘度小而流動(dòng)性大，很易碎成小汞珠，無孔不入地留存于工作臺(tái)、地面等 處（ 4）地面、工作臺(tái)、墻壁十天花板等的表面都吸附汞蒸氣，有時(shí)，汞作業(yè)車間移作它用，仍殘留有汞危害的問題 。 58 汞 ?汞 (mercury， Hg)，又稱水銀，是唯一在常溫下呈液態(tài)并易流動(dòng)的金屬 。 ?一 、汞化合物的檢驗(yàn) (砷化物的檢驗(yàn) ) ?汞含 金屬汞、無機(jī)汞和有機(jī)汞 三種形式，其中有機(jī)汞的毒性較大。 ? 金屬及其化合物在體內(nèi)的毒理作用主要通過它與含有硫、氮、氧基團(tuán)的酶結(jié)合，使蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，酶的活性被抑制甚至消失而影響細(xì)胞的新陳代謝。 ? 堿性苦味酸試紙制法 : 可取定性濾紙一條在 10%苦味酸溶液中浸濕，并用濾紙吸去多余溶液，再滴加飽和碳酸鈉溶液，陰干即可應(yīng)用。 ? [試劑 ] ? （ 1） 10%酒石酸溶液。 ? [說明 ] ? ⑴ 本方法不需水蒸餾，可用檢樣直接檢驗(yàn)，所以具有操作簡(jiǎn)便，快速等優(yōu)點(diǎn)。 ? （ 2） 10%硫酸亞鐵溶液（用時(shí)現(xiàn)配）。本實(shí)驗(yàn)采取 水蒸氣蒸餾法提取 口粘膜、食道和胃及胃內(nèi)容物。 ?微量擴(kuò)散法 ? 適用于各種揮發(fā)性毒物的分離提取，特別是被檢樣量很小時(shí)，不宜進(jìn)行水蒸氣蒸餾，用此方法分離極為方便。 ? [操作 ] 取檢液 1— 2滴，置白瓷反應(yīng)板上，加 1— 2滴聯(lián)苯胺冰醋酸溶液，如有亞硝酸鹽存在，即出現(xiàn) 紅棕色 。 亞硝酸鹽概略定量表 溶 液 的 顏 色 NO的含量（ mg/L） 剛剛 呈現(xiàn)玫瑰色 淡玫瑰色 玫瑰色 鮮艷玫瑰色 深紅色 小于 大于 本反應(yīng)亦可在白瓷反應(yīng)板上進(jìn)行，其操作方法是取格利斯試劑干粉少許于白瓷反應(yīng)板凹窩中，加檢液 3— 5滴，用小玻璃棒攪勻，如有亞硝酸鹽存在，即顯紫紅色，陰性不顯色。 ? （ 2） .取血液少許與小試管內(nèi) ,滴入數(shù)滴 1%KCN溶液 ,若有高鐵血紅蛋白 ,血液立即由棕褐色變?yōu)轷r紅色。 ? ①胃內(nèi)容物、嘔吐物、剩余飼料中亞硝酸鹽的提取：取上述檢材 10到 20克加適量蒸餾水調(diào)成糊狀，過濾，濾液若有顏色，可用活性炭脫色。 亞硝酸鹽中毒 是由于采食 富含 亞硝酸鹽或硝酸鹽 的飼料，引起 高鐵（ Fe3+ ）血紅蛋白 血癥 ，導(dǎo)致組織缺氧的一種急性、亞急性中毒。 ?一、水溶性毒物的提取 ? [操作 ] ? 半透膜的制作 取火棉膠數(shù)毫升，傾于潔凈干燥的小燒杯（或其他理想的容器）中迅速轉(zhuǎn)動(dòng)燒杯，使火棉膠均勻地分布在燒杯內(nèi)壁上，形成一層薄膜，將多余的火棉膠倒回原瓶中，待膜稍干，輕輕用刀尖將邊緣剝離，向薄膜和燒杯之間輕輕吹氣或注水，即可完全取下，將其放置在一個(gè)裝有水的燒杯中，待用。 ? 檢驗(yàn)結(jié)果陰性，但臨癥和尸變與該種毒物引起的中毒表現(xiàn)一致，要考慮送檢的檢材采集的部位是否合適。 ? 檢驗(yàn)的各項(xiàng)結(jié)果均為陽(yáng)性（如可疑飼料、胃內(nèi)容物、嘔吐物等）與中毒病畜的臨癥、尸變完全一致，可做出某種毒物中毒的結(jié)論。 ? 高效液相層析法有哪些？ ? 1） .吸附層析 ? 2） .分配層析 ? 3） .離子交換層析 ? 4） .凝膠滲透層析 ? HPLC的特點(diǎn) ? 具有高壓、高速、高效、高靈敏度等特點(diǎn)，因此廣泛應(yīng)用于氨基酸、蛋白質(zhì)、甾族化合物、糖類、有機(jī)酸、生物堿、藥物、農(nóng)藥、抗菌素、維生素、高聚物以及各種無機(jī)鹽類的分離與分析。 ? (3) 按分離過程所主要依據(jù)的物理化學(xué)原理分類：可分為 吸附層析 、 分配層析 、 離子交換層析 、 分子排阻層析 、 親和層析 等。 ?三 、 層析法原理及其在毒物檢驗(yàn)中的應(yīng)用 層析技術(shù) 是利用混合物中各組分的 物理化學(xué)性質(zhì)(分子的形狀和大小、分子極性、吸附力、 分子親和力、分配系數(shù)等 )的不同，使各組分以不同程度分布在 固定相和流動(dòng)相 中，當(dāng)流動(dòng)相流過固定相時(shí)， 各組分以不同的速度移動(dòng) ，而達(dá)到分離的技術(shù)。因?yàn)橐环N成熟的提取方法所規(guī)定的各種條件（如溫度、 PH、時(shí)間、試劑加入的方式與 程 序等。但有機(jī)磷遇熱易揮發(fā)，在提出后揮散有機(jī)溶劑時(shí)，溫度不可過高。 ? 2） 揮發(fā)性毒物 提取 常用 的 方法 ? 水蒸氣蒸餾法 ；離心法； 微量擴(kuò)散法 ； 驅(qū)氣 法與抽氣法 ；頂空氣相色譜法。 ? （ 3）要求現(xiàn)用現(xiàn)配的試劑，一定要在使用前新配。 動(dòng)物試驗(yàn) ?（四）做好檢驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作 ? 保證實(shí)驗(yàn)試劑和儀器的質(zhì)量 ? （ 1）毒檢試驗(yàn)一般要求二級(jí)品（分析純） AR。 ? 實(shí)驗(yàn)所用的動(dòng)物有青蛙、小白鼠、家兔等。又如亞硝酸鹽定性檢驗(yàn)，食物呈弱陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)，不一定會(huì)引起中毒，必要時(shí)需進(jìn)行含量測(cè)定。 定性檢驗(yàn) ?又稱： 定量分析 。定性反應(yīng)多數(shù)是化學(xué)反應(yīng)方法， 根據(jù)被檢毒物的特殊化學(xué)反應(yīng)，判定毒物是否存在，因此，使用的化學(xué)反應(yīng)必須容易辨認(rèn)，如溶液顏色的改變、沉淀的生成或溶解、氣體的生成等。如金屬砷汞等； ? 簡(jiǎn)單的化學(xué)方法 ， 如植物有毒成分的 分析 。 ? ③查清了可能引起中毒的具體毒物及其來源，就要確證一下就行了，這是最省事的。 ? 在未知毒物中毒時(shí)，取材應(yīng)盡可能全面，且數(shù)量要充足，以免事后無法彌補(bǔ)。瓶口要塞緊，袋口要扎牢，以防外漏。送檢單的內(nèi)容要填入“毒物檢驗(yàn)記錄”中。 ? （一）中毒的一般診斷 （回答 2個(gè)問題） ? 對(duì)于第 1和第 2個(gè)問題，主要是通過病史調(diào)查、臨床癥狀和尸體剖檢的觀察等一般的診斷來回答 ,前面 講課中已講過了，這里再補(bǔ)充幾點(diǎn)： ? 上述調(diào)查了解最好毒檢工作者親自到現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行，掌握第一手資料。如果查不清毒物，單憑病史、癥狀、病理變化等是很難對(duì)中毒病進(jìn)行確診的。常見重要毒物的檢驗(yàn) 毒物檢驗(yàn)的基本知識(shí) 1 2 4 水溶性毒物的檢驗(yàn) 2 揮發(fā)性毒物的檢驗(yàn) 3 金屬毒物及微量元素的檢驗(yàn) 4 農(nóng)藥的檢驗(yàn) 5 殺鼠藥的檢驗(yàn) 6 黃曲霉毒素的檢驗(yàn) 7 第一節(jié) 毒物檢驗(yàn)的一般知識(shí) ?概念 ? ： ? 是一類特殊的毒物，是由活的機(jī)體分泌的具有生物活性的物質(zhì)。即是否中毒，是什么毒物引起的中毒 ,為中毒的診斷、急救和預(yù)防提供科學(xué)的依據(jù)。 ?二、毒物檢驗(yàn)中的幾個(gè)主 要 環(huán)節(jié) ? 毒物的種類很多，中毒的原因也很復(fù)雜，在進(jìn)行毒檢之前，要考慮以下幾個(gè)問題： ? 有無中毒的可能，即是否為中毒？ ? 如果是中毒可能是何種毒物中毒？ ? 該取什么檢材？ ? 用什么方法進(jìn)行檢驗(yàn)。檢材的種類、數(shù)量、包裝情況，取材日期，送檢目的和要求等。 ? 2 檢材的封裝要適當(dāng) ? 檢材要裝在潔凈的玻璃瓶或清潔無損的塑料袋內(nèi)，各種材料都要貼上標(biāo)簽，注明檢樣名稱，不能混放。 ? 急性中毒的動(dòng)物應(yīng)以取胃腸內(nèi)容物及肝臟、血液為主， ? 慢性中毒死亡者以取臟器及排泄物為主。它比第一種情況省事。如砷等金屬物質(zhì)，灼燒后在管壁上可見到升華物，置于顯微鏡下可見到不同形狀的結(jié)晶。 根據(jù)了解的情況或預(yù)試驗(yàn)所得到的線索，必須進(jìn)行一系列的定性反應(yīng)加以確證。陰性和陽(yáng)性樣品要同檢材做同樣的處理。如食鹽是動(dòng)物體內(nèi)必須的物質(zhì)，只有在進(jìn)行含量測(cè)定后，才能確定是否發(fā)生中毒。 動(dòng)物試驗(yàn) ? 把可疑檢材 接種 給于動(dòng)物，觀察 其臨床癥狀和剖檢變化，可推出毒物的種類。 ? 由于許多毒物具有相同毒性作用，引起中毒癥狀也大致相同，因此，動(dòng)物試驗(yàn)最好在化學(xué)試驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行，互為印證，才能得出正確結(jié)論 。配試劑時(shí)，濃度要精確。 ?（五）毒物的提取 ? 方法 ? 1）毒物的 分離 提取方法很多，主要包括 ： ? 水汽蒸餾法： （ 酸性水汽蒸餾法，堿性水汽蒸餾 ） ； ? 透析法；溶劑萃取法；灰化法；消化法；層析法： （ 紙層析、薄層層析、柱層析、氣相層析法、高效液相層析法 )。如有機(jī)磷農(nóng)藥易溶于有機(jī)溶劑，因而可以用有機(jī)溶劑浸泡或振搖提取。 ? 3） 、要嚴(yán)格控制好提取過程中的各種條件。 ? 5） 、提取過程中往往有毒氣體或有機(jī)溶劑的蒸汽揮散，工作人員要注意防護(hù)。 ? (2) 按固定相的使用形式分類：可分為 柱層析 、紙層析 、 薄層層析 、 薄膜層析 等。特別適用于高沸點(diǎn)、不能氣化或熱穩(wěn)定性差的有機(jī)物分離分析，在生物化學(xué)與分子生物學(xué)中的應(yīng)用日益廣泛。 ? （二）檢驗(yàn)結(jié)果的判定和報(bào)告 ? 毒物檢驗(yàn)及結(jié)果通知單