【正文】 214442134721812221022392322126未知雜質2835182367654934995788634 富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查溶液穩(wěn)定性試驗結果（對照溶液）名稱/時間0h3h6h9h12h平均值RSD%沃諾拉贊223519224561224146224257224210224139 富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查溶液穩(wěn)定性試驗結果（雜質對照品溶液）峰面積/時間0h3h6h9h12h平均值RSD%雜質Ⅰ232331232403232799232538230054232025雜質Ⅱ250524250764251106251264250123250756雜質Ⅲ154679154344153319153644154283154054雜質Ⅳ222815222039224030223597222471222990雜質Ⅴ194349190641188570185235180721187903雜質Ⅵ244802246539250233246858237531245193結論：供試品溶液、對照溶液、雜質對照品溶液12h內穩(wěn)定性良好。 溶液穩(wěn)定性試驗供試品溶液：取本品適量（約相當于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。重復測定6次，考察精密度。，取雜質Ⅰ、Ⅱ，雜質Ⅲ，雜質Ⅳ，雜質Ⅴ，雜質Ⅵ，混合均勻，作為供試品。線性關系試驗 同原料藥。定量限試驗 同原料藥。分別取雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ工作對照品各適量，精密稱定，作為雜質對照品溶液。各已知雜質測的含量的RSD均小于10%。線性～，相關系數(shù)R2=雜質Ⅰ～，相關系數(shù)R2=雜質Ⅱ～，相關系數(shù)R2=雜質Ⅲ～，相關系數(shù)R2=雜質Ⅳ～，相關系數(shù)R2=雜質Ⅴ～，相關系數(shù)R2=雜質Ⅵ～，相關系數(shù)R2=準確度雜質Ⅰ%～%范圍內，準確度良好，RSD=%雜質Ⅱ%～%范圍內，準確度良好，RSD=%雜質Ⅲ%～%范圍內，準確度良好，RSD=%雜質Ⅳ%～%范圍內，準確度良好，RSD=%雜質Ⅴ%～%范圍內，準確度良好，RSD=%雜質Ⅵ%～%范圍內，準確度良好，RSD=%精密度重復性試驗：測得雜質Ⅰ含量RSD=%，雜質Ⅱ含量RSD=%，雜質Ⅲ含量RSD=%，雜質Ⅳ含量RSD=%，測得雜質Ⅴ含量RSD=%，雜質Ⅵ含量RSD=%，其他單雜含量RSD=%，其他總雜含量RSD=%。系統(tǒng)適用性主峰及各已知雜質與相鄰雜質分離良好，理論板數(shù)符合要求。精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取富馬酸沃諾拉贊工作對照品適量，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。如MUG陽性、靛基質陽性，判檢出大腸埃希菌；如MUG陰性、靛基質陰性，判未檢出大腸埃希菌。于24h在366nm紫外光下觀察，同時用未接種的MUG培養(yǎng)基作本底對照。菌液組測定試驗所加入試驗菌的菌數(shù)。：用平皿法，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄Ⅺ J）。 計算公式：含量（%）=（W對分別為對照品的稱樣量，mg；P對為對照品的含量；A樣、A對分別為供試品、對照品溶液中沃諾拉贊的峰面積；V樣、V對分別為供試品溶液、對照品溶液的稀釋體積） 分別測定每片以標示量為100的相對含量，求其均值和標準差以及標示量與均值之差的絕對值：如，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若，則不符合規(guī)定；若，且，則應另取20支復試，根據(jù)初、復試結果，計算30支的均值、標準差和標示量與均值之差的絕對值：如，則供試品的含量均勻度符合規(guī)定；若，則不符合規(guī)定。 對照品溶液：取富馬酸沃諾拉贊工作對照品適量（約相當于沃諾拉贊10mg），精密稱定，置100ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。 含量均勻度檢查方法：含量均勻度檢查法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅹ E） 高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。試液與試藥：鹽酸、磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。另取雜質Ⅶ工作對照品適量，精密稱定，作為對照品溶液。 吡啶3磺酸 檢查方法：高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：高效液相色譜儀、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、電子分析天平、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。照高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D）試驗，用十八烷基鍵合硅膠為填充劑，（）甲醇（52：48）為流動相A，甲醇為流動相B，按上表梯度進行洗脫，檢測波長為230nm。試驗條件：十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）； 紫外檢測器（檢測波長為230nm）； 流動相：（）甲醇（52：48）為流動相A，甲醇為流動相B，按下表梯度進行洗脫； 溶劑：流動相A； 流速：。色譜條件：流動相：（）甲醇（52:48）流速：：流動相 檢測器：紫外檢測器 波長：230nm 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）具體試驗操作：在含量測定項下記錄的色譜圖中，比較供試品溶液中沃諾拉贊峰與對照品溶液中沃諾拉贊峰的保留時間。目錄 制劑的質量控制 3 質量標準 3 分析方法 4 性狀 4 鑒別 4 檢查 4 含量測定 10 分析方法的驗證 11 分析方法學驗證用樣品 11 有關物質方法學驗證 11 吡啶3磺酸方法學驗證 21 含量測定方法學驗證 28 溶出度測定方法學驗證 32 微生物限度檢查方法學驗證 44 批檢驗報告 44 雜質 45 雜質情況分析 45 雜質制定依據(jù) 46 質量標準制定依據(jù) 46 質量標準 46 5060 / 59 制劑的質量控制 質量標準檢驗項目方法放行標準限度貨架期標準限度性狀感觀本品為薄膜衣片，除去包衣后顯白色或類白色本品為薄膜衣片，除去包衣后顯白色或類白色鑒別HPLC法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)供試品溶液中沃諾拉贊峰保留時間應與對照品溶液中沃諾拉贊峰保留時間一致供試品溶液中沃諾拉贊峰保留時間應與對照品溶液中沃諾拉贊峰保留時間一致有關物質HPLC法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)雜質Ⅰ：%、雜質Ⅱ：%、雜質Ⅲ：%、雜質Ⅳ：%、雜質Ⅴ：%、雜質Ⅵ：%、其他單雜：%、其他總雜：%雜質Ⅰ：%、雜質Ⅱ：%、雜質Ⅲ：%、雜質Ⅳ：%、雜質Ⅴ：%、雜質Ⅵ：%、其他單雜：%、其他總雜：%吡啶3磺酸HPLC法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)%%含量均勻度含量均勻度檢查法（中國藥典2010年版二部附錄X E）應符合規(guī)定應符合規(guī)定溶出度溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅹ C第二法）≥90%≥85%微生物限度微生物限度檢查法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅺ J）細菌數(shù)不得過1000cfu/g；霉菌和酵母菌數(shù)不得過100cfu/g；大腸埃希菌不得檢出/g細菌數(shù)不得過1000cfu/g；霉菌和酵母菌數(shù)不得過100cfu/g；大腸埃希菌不得檢出/g含量HPLC法（中國藥典2010年版二部附錄V D)含（C17H16FN3SO2）%~%含（C17H16FN3SO2）%~% 分析方法 性狀 檢查方法：感觀具體試驗操作：取本品，觀察其外觀性狀。試藥與試劑：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。試液與試藥：磷酸二氫鉀、三乙胺、甲醇、水。取富馬酸沃諾拉贊工作對照品及雜質工作對照品各適量，作為系統(tǒng)適用性溶液。 計算公式：已知雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ： （Ax為供試品溶液中已知雜質的峰面積，AS為對照品溶液中已知雜質的峰面積，Wx為已知雜質工作對照品的稱樣量，Px為已知雜質工作對照品含量，Vx為已知雜質對照品溶液的稀釋體積，V為供試品溶液的稀釋體積，W為供試品的稱樣量） （Ai為供試品溶液中其他單個未知雜質的峰面積，At為對照溶液主峰面積） （A總為供試品溶液中所有峰的峰面積和，A主為供試品溶液中沃諾拉贊的峰面積，為供試品溶液中已知雜質的峰面積之和，At為對照溶液中沃諾拉贊的峰面積）限度：供試品溶液色譜圖中如顯雜質峰（溶劑峰及富馬酸峰除外），雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ按外標法以峰面積計算，%；其他單個未知雜質峰面積不得大于對照溶液的主峰面積（%）；其他雜質峰面積的和不得大于對照溶液的主峰面積的4倍（%）。梯度如下表：時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）01000710001090910901000201000 具體試驗操作：取本品細粉適量（約相當于沃諾拉贊25mg），精密稱定，置50ml量瓶中，加流動相A適量，振搖，使充分溶解，加流動相A稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。 溶出度檢查方法：溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅹ C第二法） 高效液相色譜法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅴ D)儀器與用具：溶出儀、溫度計、高效液相色譜儀、電子分析天平、十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm）、容量瓶、移液管、燒杯，PH計。 計算公式：（A供為供試品溶液的主峰面積；A對為對照品溶液主峰面積；M對為對照品的稱樣量，mg；T對為對照品的含量；V對為對照品溶液的稀釋體積；V供為供試品溶液的稀釋體積；X為標示量，10mg或20mg）限度：不得低于標示量的85%。 具體試驗操作： 供試品溶液：取本品1片，置100ml量瓶（10mg規(guī)格）或200ml量瓶（20mg規(guī)格）中，加流動相適量，振搖，使充分溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。依法測定10片中沃諾拉贊的含量。：智能生化培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、電動吸引器 、薄膜過濾器等。立即傾注瓊脂培養(yǎng)基15～20ml，每株菌平行制備2個平皿，待凝固后置規(guī)定溫度培養(yǎng)3～5天觀察結果，測定其菌數(shù)。陰性菌對照組：取1：10供試液10ml，分別加入100ml、200ml的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，加入10～100cfu/ml的金黃色葡萄球菌，同試驗組方法進行試驗。本底對照的MUG和靛基質試驗應為陰性。色譜條件：流動相：（）甲醇（52:48）流速：：紫外檢測器 波長：230nm 溶劑：流動相 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠柱（5μm 250mm） 具體試驗操作：取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于沃諾拉贊10mg），置100ml量瓶中，加流動相適量，振搖，使充分溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。 分析方法學驗證用樣品批號規(guī)格批量（片）試制日期試制地點XA00910mg155山東富創(chuàng)醫(yī)藥科技有限公司XS15030110mg36402015030110mg36480～2015030210mg36160～2015030310mg36840～XB00120mg145XS15030220mg1800～2015030420mg18460～2015030520mg18520 ～2015030620mg18560～ 有關物質方法學驗證 有關物質檢查方法學驗證總結試驗項目驗證結果條件選擇C18柱，（）甲醇（52:48）為流動相A，甲醇為流動相B，進行梯度洗脫；紫外檢測器，檢測波長為230nm。定量限；雜質Ⅰ；雜質Ⅱ；雜質Ⅲ；雜質Ⅳ；雜質Ⅴ；雜質Ⅵ。耐用性采用不同色譜柱，不同的流動相比例、pH、鹽濃度等檢查本品的有關物質，各已知雜質的分離度均符合要求。對照溶液：精密量取供試品溶液適量，作為對照溶液。（～13，制劑的質量控制一第65~77頁） 富馬酸沃諾拉贊片有關物質檢查破壞試驗結果名稱沃諾拉贊總峰面積主峰面積/%物料平衡/%分離度峰純度未 破 壞合格22467470100高溫破壞合格22340471光照破壞合格22346631酸 破 壞合格21616957堿 破 壞合格21194823氧化破壞合格21645931計算公式：物料平衡%=（破壞后總峰面積/濃度）/（破壞前總峰面積/濃度）結論：溶劑及輔料均不干擾本品的測定，各破壞條件下主峰與相鄰雜質峰的分離度符合要求，主峰未檢出不純物，樣品破壞前后物料守恒，故該方法測定本品有關物質的專屬性良好。 富馬酸沃諾拉贊及已知相關雜質檢測