【正文】 300 mL mol/L 醋酸，再加 g 胃蛋白酶，提取 48 小時(shí)，在12348 小時(shí)分別取 5 mL 提取液，用 500 目的膜過濾兩次后，測定羥脯草魚皮膠原蛋白的制備及性質(zhì)研究10氨酸含量。然后，研究了草魚皮的提取工藝參數(shù)溫度對酸溶性和酶溶性膠原蛋白提取率及性質(zhì)的影響。食品中最終不得殘留。本研究充分利用水產(chǎn)加工的副產(chǎn)品，研制出高附加值，具有廣泛市場前景的潔白、無魚腥味、高純度的膠原蛋白。本工藝比傳統(tǒng)工藝縮短了工藝步驟。在膠原蛋白用于食品工業(yè)的研究方面，國外的研究更為成熟，在國內(nèi)，膠原食品的優(yōu)越性還沒有得到消費(fèi)者的充分認(rèn)識，隨著人們生活水平的提高及對綠色食品需求的增加，膠原蛋白這種低脂高蛋白食品會越來越得到消費(fèi)者的青睞。利用膠原的成膜性，可將其用作固化酶的膜材料和肉食品標(biāo)簽，后者已經(jīng)在歐洲實(shí)際應(yīng)用。陳潔 [65]等人用明膠制成的生物降解膜主要用于水果保鮮、肉類保鮮、食品包裝或直接食用。 肉制品改良劑研究發(fā)現(xiàn)，膠原蛋白可以影響肉類的嫩度和肉類蒸煮后肌肉的紋理，其含量和存在狀態(tài)與肉制品的嫩度密切相關(guān) [50，6163] ：通過破壞膠原蛋白分子內(nèi)的氫鍵，使其原有的緊密超螺旋結(jié)構(gòu)破壞，形成分子較小、結(jié)構(gòu)較為松散的明膠，即可改善結(jié)締組織的嫩度，提高其食用價(jià)值，研究表明：將酸法制得的膠原蛋白粉添加到肉制品中，不僅能改善產(chǎn)品品質(zhì)，如口感好、多汁，提高產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量，而且無不良?xì)馕?。因此，膠原蛋白是生產(chǎn)補(bǔ)鈣及減肥、美容護(hù)膚、延緩衰老類保健食品的理想原料。 功能性食品和保健品經(jīng)常食用含膠原蛋白豐富的食品，能有效地增加皮膚組織細(xì)胞的儲水能力，增強(qiáng)和維持肌膚良好的彈性，強(qiáng)化肌膚的韌性，延緩肌體的衰老 [5658]。明膠和膠原多肽作為膠原蛋白的降解產(chǎn)物，同樣具有很多優(yōu)良的性能。一般提取的條件：胃蛋白酶和組織干重比為1：10， mol/L 醋酸溶液。目前，應(yīng)用堿法提取膠原蛋白的較少。堿法：利用強(qiáng)堿和強(qiáng)堿鹽溶液(如 10%的氫氧化鈉和 10%硫酸鈉)可以將結(jié)締組織中不溶性膠原溶解出來，與不溶性膠原結(jié)合在一起的脂肪被皂化，非螺旋的端肽被切除，膠原纖維瓦解，最終所得膠原的大小和分子質(zhì)量，取決于處理時(shí)間以及堿的濃度。但對于大多數(shù)動(dòng)物組織來說，中性鹽溶解膠原的含量極低，甚至沒有，因此采用中性鹽溶劑提取膠原的方法不適合大規(guī)模提取膠原。如使皮膚富有彈性。在膠原蛋白的四級結(jié)構(gòu)中三螺旋交錯(cuò)縱向排列，三螺旋鏈交錯(cuò) 67 nm 在隨后的鏈后有一個(gè) 40 nm 的缺口 [4648]。三級結(jié)構(gòu)被認(rèn)為是原膠原蛋白的基本單位 [3941]。它占膠原蛋白氨基酸組成中大約 10%，在有其他蛋白質(zhì)存在的情況下，所以可根據(jù)羥脯氨酸的含量來測定膠原蛋白或膠原降解產(chǎn)品含量 [29]。膠原蛋白的微纖維結(jié)構(gòu)如圖 11 所示：第一章 文獻(xiàn)綜述3圖 11Ⅰ膠原蛋白的結(jié)構(gòu)Figure11 Structure of typeⅠcollagen在Ⅰ型膠原蛋白一級結(jié)構(gòu)中，每條鏈含有超過 1000 個(gè)氨基酸，氨基酸以獨(dú)特的三螺旋排列，甘氨酸它在序列每第三個(gè)位置出現(xiàn)，在緊密的三螺旋鏈中間留下很小的空間給殘基 [2224]，在重復(fù)的 GlyXY 單元的非甘氨酸位置中，大約 35%位置被脯氨酸代替，幾乎全部在 X 位置，而 4羥脯氨酸主要在 Y 位置 [2527]。α3(IV) α4(IV) α5(IV)。不同的膠原蛋白類型在組織內(nèi)的分布表明了其顯著的多樣性和范圍。膠原小分子肽廣泛應(yīng)用在保健食品以及化妝品中 [1]，也有產(chǎn)品直接用明膠酶解獲得，但得到得小分子肽分布不均一 [5，911] 。市場價(jià)格和膠原蛋白相差甚遠(yuǎn)。明膠是膠原蛋白的局部水解產(chǎn)物 [1]，膠原蛋白和明膠最大的不同，就在于其分子結(jié)構(gòu)的差異。 type III collagen 第一章 文獻(xiàn)綜述1第一章 文獻(xiàn)綜述1 膠原蛋白的概念膠原蛋白，英文學(xué)名叫 Collagen，是一種纖維蛋白，分子量約為 300kda，它是動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)最特殊者，它以三股螺旋體結(jié)構(gòu)聚合而成的膠原纖維存在于脊椎動(dòng)物體結(jié)締組織中，扮演結(jié)合組織、連結(jié)器官的重要角色。 SDS–PAGE showed that acidsoluble collagen protein contain more β, γ and polymer. Molecular weight of acidsoluble collagen higher than it of pepsinsoluble collagen, The denaturation temperature of ASC and PSC from grass carp was ℃and ℃, respectively, about 3 ℃ lower than that of the porcine skin collagen(37 ℃). These results suggest that grass carp skin has potential application in the functional food, healthcare, cosmetic, and pharmaceutical industries. 5. Under the condition of pH , different salt concentrations fraction precipitate collagens from grass carp skin and pig III collagen were pletely precipitated at mol/L salt concentration ,at this time the majority of type I collagen dissolved in the solution, in the final were precipitated at mol/L salt concentration. the samples purifying from varying salt concentration , analyzed by SDSPAGE containing urea. It can make distinction between the electrophoresis mobility of α1（I）and α1（III）which used be the same. SDSPAGE showed that grass carp skin samples without α1 （III）, however the pigskin 摘 要Vcontains α1（III）. but purity of type III collagen protein is not high, only about 20%. Type I collagen reached electrophoresis purity. Conclusion: grass carp skin contains only type I collagen without protein III collagen, Pigskin main contain type I collagen protein also contain a small amount of type III collagen . KEY WORDS: Collagen。C, 1% hydrogen peroxide, sodium hydroxide concentration solution, leaching treatment 24 hours later, have great impact on the Characterizations of collagen, even in the acid+ enzyme xtracted 48 hours, Extraction rate only 8%. In the conditions of mol/L NaOH or 4 ℃ for 草魚皮膠原蛋白的制備及性質(zhì)研究IVdealing with collagen, have less impact on the collagen extraction rate, so it can only choose lower concentrations of sodium hydroxide or low temperature skin. 3. Key parameter temperature of extraction of collagen and pepsin have great impact on the extraction rate. At 4 ℃ in the acetic acid + pepsin solution extraction rate more than double extraction rate in acetic acid, At 20 ℃ and 30 ℃, the extraction rate of solution containing pepsin is far higher than that of acetic acid. The higher the temperature, the higher collagen extraction rate. However, SDSPAGE showed that peptide chain of collagen extracted at 30 176。 Purifying type I and type III collagens from Grass carp skin and pig skin and electrophoresis identification. 1. Different concentrations of hydrogen peroxide and sodium hydroxide treatment grass carp skin, can also play a role on bleaching, removing noncollagen and defatted. the higher the concentration of sodium hydroxide, the faster shedding pigment. Concentration of hydrogen peroxide had no significant effect on bleaching. In mol/L the sodium hydroxide solution containing 1% hydrogen peroxide, skin floating in surface of the solution, pigment gradual withdrawal, unable to see melanin turn to yellow。表明草魚皮膠原蛋白在功能食品、醫(yī)藥、化妝品、制藥等方面有潛在的應(yīng)用。在醋酸溶液或醋酸加酶溶液中，溫度越高，提取率越高。2．在含 1％雙氧水不同濃度氫氧化鈉處理魚皮以后，對魚皮膠原蛋白性質(zhì)產(chǎn)生了影響。涉密論文按學(xué)校規(guī)定處理。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。對本研究提供過幫助和做出過貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均已在文中作了明確的說明并表示了謝意。保密□，在 年解密后適用本授權(quán)書。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。本人授權(quán)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。盡我所知，除文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，不包含其他人或組織已經(jīng)發(fā)表或公布過的研究成果，也不包含我為獲得 及其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或?qū)W歷而使用過的材料。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。本人授權(quán)　　 　 　 大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。1．不同濃度雙氧水和氫氧化鈉溶液處理草魚皮，可以同時(shí)起到脫色、脫雜蛋白以及脫脂作用，氫氧化鈉濃度越高，脫色速度越快，反應(yīng)也越劇烈，雙氧水濃度對膠原蛋白脫色無明顯影響，在 mol/L 的氫氧化鈉溶液含 1％雙氧水中只需 6 小時(shí)就可以完全脫去色素，在 mol/L 的氫氧化鈉含 1％雙氧水溶液中，魚皮浮在溶液表面色素漸退，無法看到黑色素體轉(zhuǎn)變?yōu)榈S色； mol/L－ mol/L 氫氧化鈉能夠有效的去除魚皮中的非膠原蛋白，但是氫氧化鈉濃度越高，可能導(dǎo)致膠原蛋白的降解在預(yù)處理溶液中；在 20 ℃條件下，含 1％H 202 有效脫去脂肪，脫脂率約為 70％。3．溫度和是否加酶對膠原蛋白提取率影響很大。4．從草魚皮中提取的酸溶性膠原蛋白和酶溶性膠原蛋白，紫外光譜分析，最大吸收峰都接近 223 nm 處；SDSPAGE 電泳圖譜顯示：酸溶性膠原蛋白含有較多β、γ 和多聚體，平均分子量高于酶溶性膠原蛋白，草魚皮 ASC 和 PSC 熱變性溫度分別為 ℃、 ℃，只比豬皮的熱變性溫度(37 ℃)低 3 ℃左右。關(guān)鍵詞：膠原蛋白；草魚皮；性質(zhì)；Ⅰ型膠原蛋白；Ⅲ型膠原蛋白摘 要IIIRESEARCH ON PREPARATION AND CHAR