【正文】 胃蛋白酶提取率也高于在醋酸中的。溫度是否導(dǎo)致膠原蛋白降解后面討論。 魚皮膠原蛋白在醋酸＋酶溶液中的溶解性0%20%40%60%80%100%0 10 20 30 40 50 60 70時(shí) 間 （ h）膠原蛋白溶解率（％）圖 210 在不同溫度條件下醋酸加酶提取膠原蛋白溶解率隨時(shí)間變化曲線，◆：4 ℃，■：20 ℃，▲：30 ℃Figure210 Change curves of acid+pepsin soluble collagen dissolve rate on different temperatures by time，◆：4 ℃，■：20 ℃，▲：30 ℃圖 2－10 顯示了草魚皮在不同溫度醋酸＋胃蛋白酶溶液中溶解率隨時(shí)間變化曲線可以看出，在 4 ℃，在 mol/L 的醋酸＋胃蛋白酶溶液中提取 64 小時(shí)，草魚皮膠原蛋白溶解了 65％左右。 膠原蛋白提取條件研究 魚皮膠原蛋白在醋酸溶液中溶解性0%20%40%60%80%100%0 10 20 30 40 50 60 70時(shí) 間 （ h）膠原蛋白溶解率（％）圖 29 在不同溫度條件下醋酸提取膠原蛋白溶解率隨時(shí)間變化曲線◆：4 ℃，■：20 ℃，▲：30 ℃Figure29 Change curves of acid soluble collagen dissolve rate on different temperatures by time ◆：4 ℃，■：20 ℃，▲：30 ℃在不同溫度條件下，草魚皮在醋酸溶液中有良好的膨脹性能，這是膠原蛋白溶解的中間狀態(tài)。 mol/L－ mol/L 氫氧化鈉能夠有效的去除魚皮中的非膠原蛋白，但是氫氧化鈉濃度越高，有可能導(dǎo)致高分子量鍵的斷裂，同時(shí)可能導(dǎo)致膠原蛋白的降解在堿性預(yù)處理溶液中。在含 1％雙氧水 mol/L 的氫氧化鈉溶液中，魚皮浮在溶液表面，黑色素逐漸退去，最終少量魚皮上殘留黑色素。1% SDS 緩沖液中，過(guò)夜在 5000 轉(zhuǎn)/分離心 5 分鐘?；亓鹘Y(jié)束后，趁熱加入 150 g 硫酸鋰，50 mL 蒸餾水及數(shù)滴液溴，再繼續(xù)開(kāi)口沸騰 15 分鐘，驅(qū)除過(guò)量的溴，冷卻后溶液呈黃色。加入顯色劑 2 mL，搖勻，塞上塞子于 60 ℃試管加熱器(或恒溫水浴)中保溫 20 min 后取出，迅速冷卻，在波長(zhǎng) 558177。通過(guò) SDSPAGE 電泳測(cè)定提取液中蛋白質(zhì)亞基組成。 主要試劑胃蛋白酶(活性 8002500 u/mg) 美國(guó) Sigma 公司 牛血清白蛋白 武漢中健科技發(fā)展有限公司羥脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)品 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司β巰基乙醇 德國(guó) Merck 公司十二烷基硫酸鈉(SDS) 德國(guó) Merck 公司Tris 堿 德國(guó) Merck 公司丙烯酰胺 德國(guó) Merck 公司甲叉雙丙烯酰胺 德國(guó) Merck 公司溴酚藍(lán) 上海試劑三廠考馬斯亮藍(lán) R－250 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司過(guò)硫酸銨 Amresco 分裝第二章 草魚皮提取膠原蛋白工藝條件研究9醋酸（AR） 廣東汕頭市化學(xué)試劑公司鹽酸 廣東汕頭市化學(xué)試劑公司高氯酸 上海試劑三廠 氯胺 T 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 主要儀器722S 分光光度計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司聚丙烯酰胺垂直電泳裝置 南京科寶儀器公司復(fù)日 FR980 生物電泳圖像分析系統(tǒng) 上海復(fù)日生物公司 方法 預(yù)處理對(duì)草魚皮的脫色效果及脫雜蛋白情況 不同堿濃度處理取 3 g 魚皮樣品，分別加入 200 mL 含 1％過(guò)氧化氫、濃度分別為 0 mol/L、 mol/L、 mol/L、 mol/L、 mol/L 氫氧化鈉溶液，在 20 ℃條件下脫色 24 小時(shí)，比較脫色效果，并采用福林酚法測(cè)定溶液中的蛋白質(zhì)含量。近年來(lái)廣泛用于紙塑無(wú)菌包裝材料在包裝前的殺菌作用。同時(shí)在信仰伊斯蘭教、回教等人群的食品中，來(lái)源于牲畜的膠原蛋白的應(yīng)用受到限制，還由于瘋牛病、口蹄疫等傳染性疾病的發(fā)生和流行，使人們對(duì)來(lái)源于牲畜的膠原蛋白的安全性發(fā)生了懷疑，這些因素有力地促進(jìn)了對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物膠原蛋白的研究和開(kāi)發(fā)。 食品的涂層材料近年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)將明膠用于食品涂層上具有很多好處，如：避免食品氧化，抑制褐變反應(yīng)，防止食品吸潮及僵硬，使食品表面有光澤，作為穩(wěn)定劑，防止產(chǎn)品干縮變形，具有保鮮作用，明膠溶液可在果蔬表面形成皮膜，能保證食品的新鮮度和天然風(fēng)味，防止食品腐敗，延長(zhǎng)食品的保存期，提高揮發(fā)性食品成分的保存性，調(diào)整溶解性等。在日本，膠原食品被厚生省作為健康食品草魚皮膠原蛋白的制備及性質(zhì)研究6推向市場(chǎng)，膠原蛋白及其降解產(chǎn)物被作為眾多功能性食品的原料，已大量地應(yīng)用于食品工業(yè)，如膠原多肽、水解氨基酸口服液及飲料等保健食品。此外，膠原的一些獨(dú)特的品質(zhì)使得它在許多食品中用作功能物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)成分具有其它替代材料無(wú)可比擬的優(yōu)越性：(1)膠原大分子的螺旋結(jié)構(gòu)和存在結(jié)晶區(qū)使其具有一定的熱穩(wěn)定性；(2)膠原天然的緊密的纖維結(jié)構(gòu)使膠原材料顯示出很強(qiáng)的韌性和強(qiáng)度，適用于薄膜材料的制備；(3)由于膠原分子鏈上含有大量的親水基團(tuán)，所以與水結(jié)合的能力很強(qiáng)，這一性質(zhì)使膠原在食品中可以用作填充劑和凝膠；(4)膠原在酸性和堿性介質(zhì)中膨脹，這一性質(zhì)也應(yīng)用于制備膠原基材料的處理工藝中 [50，5355] 。利用蛋白酶處理的優(yōu)點(diǎn)，就在于蛋白酶可以選擇性的切除非螺旋的端肽而溶解出膠原分子。稀酸可以破壞醛亞胺型分子間的交聯(lián)，但不能破壞較為穩(wěn)定的酮亞胺型的交聯(lián)。這些微纖維有組織的排列成光纖，在它的末端可以形成大的纖維團(tuán)。形成羥基化殘基于糖連接， 糖組分是膠原分子形成三螺旋結(jié)構(gòu)不可缺少的 [3032]，這兩種亞氨基酸（大約 23%的殘基）穩(wěn)定著三螺旋的結(jié)構(gòu)，由于他們脂環(huán)家族性質(zhì)，他們使 a 鏈變的僵硬，形成氫鍵限制了旋轉(zhuǎn)[3335]。[α1(V)]3。2 膠原蛋白的類型及分布膠原蛋白可以說(shuō)是脊椎動(dòng)物體內(nèi)最豐富的蛋白質(zhì)，它們分子組成特征是若干個(gè)GlyXY 序列重復(fù)和由三條多肽鏈構(gòu)成的獨(dú)特的三螺旋結(jié)構(gòu)，至今，有 42 種不同的多肽鏈被鑒定，它被 41 種基因所編碼并組成 27 種獨(dú)特的膠原類型 [1214]。因此在應(yīng)用方面亦有極大差異。 characterisation。 At 20 176。但是 SDSPAGE 電泳顯示，在 30 ℃條件下，不論醋酸溶液或醋酸加酶溶液提取的膠原蛋白都發(fā)生了變性，膠原蛋白肽鏈發(fā)生了降解，在 4 ℃和 20 ℃提取的膠原蛋白三螺旋結(jié)構(gòu)保持完整，具有完整生物學(xué)活性。提取關(guān)鍵參數(shù)—溫度對(duì)膠原蛋白提取率及性質(zhì)的影響；酸溶性膠原蛋白和酶溶性膠原蛋白的性質(zhì)區(qū)別；草魚皮和豬皮中Ⅰ型膠原蛋白和Ⅲ型膠原蛋白純化及電泳鑒定。作者簽名：　　 　 　　 日　 期：　　 　 　　 草魚皮膠原蛋白的制備及性質(zhì)研究ii學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的研究成果。學(xué)位論文作者（需親筆）簽名： 年 月 日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書 本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作 者 簽 名：　　 　 　　 日　 期：　　 　 　　 指導(dǎo)教師簽名：　　 　 　　 日 　　期：　　 　 　　 使用授權(quán)說(shuō)明本人完全了解 大學(xué)關(guān)于收集、保存、使用 畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的規(guī)定，即：按照學(xué)校要求提交畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）的印刷本和電子版，并提供目錄檢索與閱覽服務(wù)；學(xué)?？梢圆捎糜坝　⒖s印、數(shù)字化或其它復(fù)制手段保存論文；在不以贏利為目的前提下，學(xué)校可以公布論文的部分或全部?jī)?nèi)容。作者簽名： 日期： 年 月 日導(dǎo)師簽名： 日期： 年 月 日目 錄iii目錄摘 要 ..............................................................IABSTRACT ..............................................................III第一章 文獻(xiàn)綜述 .........................................................11 膠原蛋白的概念 .........................................................12 膠原蛋白的類型及分布 ...................................................13 膠原蛋白的結(jié)構(gòu)及特性 ...................................................24 膠原蛋白的提取方法 .....................................................45 膠原蛋白及其降解產(chǎn)物在食品工業(yè)中的應(yīng)用 .................................5 功能性食品和保健品 ...................................................5 肉制品改良劑 .........................................................6 食品包裝材料 .........................................................6 食品的涂層材料 .......................................................6 在其它方面的應(yīng)用 .....................................................66 本研究的主要內(nèi)容及意義 .................................................7第二章 草魚皮提取膠原蛋白工藝條件研究 ...................................81 材料和方法 ............................................................8 材料 .................................................................8 草魚皮原材料 .......................................................8 主要試劑 ...........................................................8 主要儀器 ...........................................................9 方法 .................................................................9 預(yù)處理對(duì)草魚皮的脫色效果及脫雜蛋白情況 .............................9 預(yù)處理對(duì)膠原蛋白的溶解性的影響 .....................................9 預(yù)處理的脫脂效果與常規(guī)脫脂效果比較 ................................10 膠原蛋白提取條件研究 ..............................................10 羥脯氨酸含量測(cè)定 ..................................................11 福林酚法測(cè)定蛋白質(zhì)含量 ............................................11草魚皮膠原蛋白的制備及性質(zhì)研究iv SDSPAGE 電泳分析 .................................................122 結(jié)果和分析 ............................................................12 預(yù)處理的脫色效果 ....................................................12 預(yù)處理的脫雜蛋白效果 ................................................13 預(yù)處理對(duì)膠原蛋白溶解性的影響 ............................