【正文】 在相同的時(shí)間里，20 ℃和 30 ℃溶解了 87％左右。所以，在 20 ℃，選擇低濃度氫氧化鈉去脫雜蛋白，同時(shí)對膠原蛋白性質(zhì)影響也最小。上清液與 2樣品緩沖混合( mol/L Tris，4% SDS，20%甘油，2% β巰基乙醇， %溴酚籃)混合。2 nm 處測定吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算濃度。 不同 H2O2濃度處理取 3 g 魚皮樣品，分別加入 200 mL 分別含 0%、%、1%、2%、3％過氧化氫的 mol/L 氫氧化鈉溶液，在 20℃條件下脫色 24 小時(shí)，比較脫色效果，并采用福林酚法測定溶液中的蛋白質(zhì)含量。本文首先研究了草魚皮的預(yù)處理工藝條件，采用氫氧化鈉中添加雙氧水可以同時(shí)起到脫色、脫雜蛋白、脫脂肪的作用，以及對膠原蛋白的溶解性的影響。為保證有效的生理功能，用作保健制品原料的膠原蛋白要有一定程度的降解 [60]。在一定條件下可以將端肽切除，同時(shí)保留了膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu)，所得膠原被稱為原膠原，它具有比較溫和的免疫反應(yīng)特性。膠原蛋白光纖的抗拉強(qiáng)度可高達(dá) 5－10 公斤/毫米平方，因此它提供了結(jié)締組織所需的張力、抗拉強(qiáng)度等 [49]。α1(V) α2(V) α3(V)廣泛分布：骨，皮膚，角膜，胎盤，等3 膠原蛋白的結(jié)構(gòu)及特性膠原蛋白的結(jié)構(gòu)類似繩索，由無數(shù)根膠原蛋白微纖維所組合而成 [20，21] ，每條微纖維是膠原蛋白的基本單位，稱為原膠原蛋白分子，由三條多肽鏈纏繞形成右手三螺旋。而明膠制備過程的高溫破壞，導(dǎo)致膠原蛋白原有的三股螺旋體結(jié)構(gòu)無法保持完整，使得分子量呈現(xiàn)不規(guī)則分布，所以僅能運(yùn)用于低價(jià)位的食品材料，也用在皮膚保養(yǎng)方面，是一種皮膚營養(yǎng)劑 [3]。C conditions, mol/L NaOH solution containing 1% H202 can effectively remove fat, defatted rate about 70%.2. The treatment of different concentrations of hydrogen peroxide and sodium hydroxide, have an impact on the Characterizations of collagen. At 20 176。1．不同濃度雙氧水和氫氧化鈉溶液處理草魚皮，可以同時(shí)起到脫色、脫雜蛋白以及脫脂作用，氫氧化鈉濃度越高，脫色速度越快，反應(yīng)也越劇烈，雙氧水濃度對膠原蛋白脫色無明顯影響，在 mol/L 的氫氧化鈉溶液含 1％雙氧水中只需 6 小時(shí)就可以完全脫去色素，在 mol/L 的氫氧化鈉含 1％雙氧水溶液中，魚皮浮在溶液表面色素漸退，無法看到黑色素體轉(zhuǎn)變?yōu)榈S色； mol/L－ mol/L 氫氧化鈉能夠有效的去除魚皮中的非膠原蛋白，但是氫氧化鈉濃度越高，可能導(dǎo)致膠原蛋白的降解在預(yù)處理溶液中；在 20 ℃條件下，含 1％H 202 有效脫去脂肪，脫脂率約為 70％。本人授權(quán)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。對本研究提供過幫助和做出過貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均已在文中作了明確的說明并表示了謝意。在醋酸溶液或醋酸加酶溶液中，溫度越高，提取率越高。 SDS–PAGE showed that acidsoluble collagen protein contain more β, γ and polymer. Molecular weight of acidsoluble collagen higher than it of pepsinsoluble collagen, The denaturation temperature of ASC and PSC from grass carp was ℃and ℃, respectively, about 3 ℃ lower than that of the porcine skin collagen(37 ℃). These results suggest that grass carp skin has potential application in the functional food, healthcare, cosmetic, and pharmaceutical industries. 5. Under the condition of pH , different salt concentrations fraction precipitate collagens from grass carp skin and pig III collagen were pletely precipitated at mol/L salt concentration ,at this time the majority of type I collagen dissolved in the solution, in the final were precipitated at mol/L salt concentration. the samples purifying from varying salt concentration , analyzed by SDSPAGE containing urea. It can make distinction between the electrophoresis mobility of α1（I）and α1（III）which used be the same. SDSPAGE showed that grass carp skin samples without α1 （III）, however the pigskin 摘 要Vcontains α1（III）. but purity of type III collagen protein is not high, only about 20%. Type I collagen reached electrophoresis purity. Conclusion: grass carp skin contains only type I collagen without protein III collagen, Pigskin main contain type I collagen protein also contain a small amount of type III collagen . KEY WORDS: Collagen。膠原小分子肽廣泛應(yīng)用在保健食品以及化妝品中 [1]，也有產(chǎn)品直接用明膠酶解獲得，但得到得小分子肽分布不均一 [5，911] 。它占膠原蛋白氨基酸組成中大約 10%，在有其他蛋白質(zhì)存在的情況下，所以可根據(jù)羥脯氨酸的含量來測定膠原蛋白或膠原降解產(chǎn)品含量 [29]。但對于大多數(shù)動(dòng)物組織來說，中性鹽溶解膠原的含量極低，甚至沒有，因此采用中性鹽溶劑提取膠原的方法不適合大規(guī)模提取膠原。明膠和膠原多肽作為膠原蛋白的降解產(chǎn)物，同樣具有很多優(yōu)良的性能。陳潔 [65]等人用明膠制成的生物降解膜主要用于水果保鮮、肉類保鮮、食品包裝或直接食用。本研究充分利用水產(chǎn)加工的副產(chǎn)品，研制出高附加值，具有廣泛市場前景的潔白、無魚腥味、高純度的膠原蛋白。分別測定原始樣品以及上述 3 個(gè)樣品的水分含量和脂肪含量并計(jì)算脫脂率。該混和液只能保持 1 天。2 結(jié)果和分析 預(yù)處理的脫色效果 由表 23 不同濃度氫氧化鈉脫色效果可以看出：在 20 ℃條件下，含有 1％ H 2O2的不同濃度的氫氧化鈉溶液中，在中性條件下，雙氧水無脫色效果。第二章 草魚皮提取膠原蛋白工藝條件研究150%20%40%60%80%100%0 10 20 30 40 50 60時(shí) 間 (h)膠原蛋白溶解率（％）圖 27 不同脫色處理后對膠原蛋白溶解率的影響，不同脫色處理：◆：在 4 ℃， mol/L 的氫氧化鈉處理，■：在 4 ℃， mol/L NaOH 處理，▲：在 20 ℃，●：在 20 ℃， mol/L NaOH 處理Figure27 Effects to collagen rate after different treatments of taking off pigment，different treatments of taking off pigment: ◆：at 4 ℃，condition，■：at 4 ℃， mol/L NaOH condition，▲：at 20 ℃， mol/L NaOH condition，●：at 20 ℃， mol/L NaOH condition. 預(yù)處理的脫脂效果與常規(guī)脫脂效果比較0%10%20%30%40%50%60%70%80%常 規(guī) 脫 脂 處 理 1 處 理 2脫脂率（％）圖 28 脫脂效果比較，常規(guī)脫脂：10%正丁醇，處理 1： mol/L NaOH 含 1％ H202，處理2： mol/L NaOH 含 1％ H 202，均質(zhì)figure28 Comparison defatted effect，conventional defatted treatment：10% butyl 草魚皮膠原蛋白的制備及性質(zhì)研究16alcohol，treatment1: mol/L NaOH contain 1％ H202，treatment2: mol/L NaOH contain 1％ H 202 and homogenized常規(guī)脫脂的脫脂率約為 57％，脫色處理 1，在 20 ℃，含 1％H 202 mol/L NaOH 溶液中處理 24 小時(shí)脫脂率為約為 56％，脫色處理 2 是在處理 1 后再用食物攪拌機(jī)(Philips，HR2964)高速攪打 2 分鐘，脫脂率約為 70％，比常規(guī)脫脂和處理 1 約高 14％，均質(zhì)明顯提高了魚皮的脫脂率，同時(shí)還可以除去魚皮上殘留的色素。所以，溫度對加胃蛋白酶醋酸溶液提取膠原蛋白也有很大影響。在 4 ℃，隨著時(shí)間增加溶解率不斷上升。魚皮在含有 1％雙氧水氫氧化鈉濃度 mol/L－ mol/L溶液中，魚皮上的黑色素體很快轉(zhuǎn)變?yōu)榈S色，6 個(gè)小時(shí)以后淡黃色的色素體逐漸溶解在溶液中，溶液發(fā)黃，最后仍然還有少量魚皮上有淡黃色。再加入福林酚試劑乙各 mL，及時(shí)混勻，室溫下放置 30 分鐘，在 500 nm 測定吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算濃度。濃度分別為 ， μg/mL。弱堿可以有效地除去魚皮中的雜蛋白，與脂肪發(fā)生皂化發(fā)應(yīng)，去除魚皮中的腥味。在食品生產(chǎn)中，明膠可作為穩(wěn)定劑、乳化劑、攪打劑、發(fā)泡劑等用于糖果、冷凍食品和乳制品、罐頭食品等的生產(chǎn)。此外，膠原蛋白還能降低血甘油三酯和膽固醇，用于制作減肥降血脂食品。強(qiáng)堿鹽可以控制膠原的溶漲，并保護(hù)膠原天然的三股螺旋結(jié)構(gòu)。這種尺寸的比率使得溶液里的高粘度和高遷移率在電場中 [42].另外，在鏈氨基端和羧基端大約有 926 個(gè)氨基酸區(qū)域沒有和三螺旋合成一體.這些沒螺旋區(qū)域被認(rèn)為是端肽。皮膚、血管壁和各種軟組織或器官的間質(zhì)中同時(shí)含有Ⅰ型和Ⅲ型膠原，只是不同的器官中，這兩種膠原含量的比例不同，Ⅰ型膠原蛋白是生物體最豐富的膠原，占生物體膠原蛋白總量的 90%，也是用途最廣的膠原蛋白，我們通常所說的膠原蛋白指的是Ⅰ型膠原蛋白 [19]。例如：膠原蛋白即占皮膚組織中真皮層的 75％，可撐起皮膚外觀看起來緊致有彈性。純化得到不同鹽濃度的沉淀樣品，再用含尿素的 SDSPAGE 電泳分析，可以將電泳遷移率相同的α1（Ⅰ）和 α1（Ⅲ）區(qū)分開，電泳顯示，草魚皮樣品中不含 α1（Ⅲ），豬皮中含有 α1（Ⅲ），表明草魚皮僅含有Ⅰ型膠原蛋白，不含Ⅲ型膠原蛋白，豬皮主要含有Ⅰ型膠原蛋白同時(shí)也含少量的Ⅲ型膠原蛋白。作者簽名： 日期： 年 月 日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。 碩 士 學(xué) 位 論 文草魚皮膠原蛋白的制備及性質(zhì)研究分類號 Q512 學(xué) 號 2022108001 2原 創(chuàng) 性 聲 明 本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。5．在 pH 條件下，在不同鹽濃度下分別沉淀草魚皮和豬皮膠原蛋白，Ⅲ型膠原蛋白在 mol/L 鹽濃度（pH ）完全沉淀，此時(shí)絕大多數(shù)Ⅰ型膠原蛋白溶草魚皮膠原蛋白的制備及性質(zhì)研究II解在溶液中，最終在 mol/L 鹽濃度（pH ）的條件下沉淀。其約占脊椎動(dòng)物體內(nèi)所有蛋白質(zhì)的 30％，在骨骼與肌腱中含量高達(dá) 90％、皮膚組織含 50％以上，主要提供組織所需的強(qiáng)度（骨骼）及柔軟性（皮膚）。例如Ⅱ型膠原蛋白只存在于軟骨和玻璃質(zhì)中 [18]，Ⅳ型膠原只存在于晶狀體膜中，而纖維蛋白 I 和 V 膠原蛋白普遍純在各種組織中。三條多肽鏈纏繞形成右手三螺旋，每圈大約 nm，一個(gè)棒狀螺旋的平均分子量大約是 300 kDa，長度 300 nm，直徑 nm。同時(shí)強(qiáng)堿處理的膠原，則會(huì)產(chǎn)生 DL型氨基酸消旋混合物，有的 D 型氨基酸有毒，有的甚至有致癌作用，D型氨基酸還有可能抑制 L型氨基酸的吸收。同時(shí)，膠原蛋白可以作為補(bǔ)鈣成分用于保健食品，因?yàn)檠獫{中來自膠原蛋白的羥基脯氨酸是將血漿中的