【正文】 nsoluble collagen, The denaturation temperature of ASC and PSC from grass carp was ℃and ℃, respectively, about 3 ℃ lower than that of the porcine skin collagen(37 ℃). These results suggest that grass carp skin has potential application in the functional food, healthcare, cosmetic, and pharmaceutical industries. 5. Under the condition of pH , different salt concentrations fraction precipitate collagens from grass carp skin and pig III collagen were pletely precipitated at mol/L salt concentration ,at this time the majority of type I collagen dissolved in the solution, in the final were precipitated at mol/L salt concentration. the samples purifying from varying salt concentration , analyzed by SDSPAGE containing urea. It can make distinction between the electrophoresis mobility of α1（I）and α1（III）which used be the same. SDSPAGE showed that grass carp skin samples without α1 （III）, however the pigskin 摘 要Vcontains α1（III）. but purity of type III collagen protein is not high, only about 20%. Type I collagen reached electrophoresis purity. Conclusion: grass carp skin contains only type I collagen without protein III collagen, Pigskin main contain type I collagen protein also contain a small amount of type III collagen . KEY WORDS: Collagen。 Purifying type I and type III collagens from Grass carp skin and pig skin and electrophoresis identification. 1. Different concentrations of hydrogen peroxide and sodium hydroxide treatment grass carp skin, can also play a role on bleaching, removing noncollagen and defatted. the higher the concentration of sodium hydroxide, the faster shedding pigment. Concentration of hydrogen peroxide had no significant effect on bleaching. In mol/L the sodium hydroxide solution containing 1% hydrogen peroxide, skin floating in surface of the solution, pigment gradual withdrawal, unable to see melanin turn to yellow。在醋酸溶液或醋酸加酶溶液中，溫度越高，提取率越高。涉密論文按學(xué)校規(guī)定處理。對本研究提供過幫助和做出過貢獻(xiàn)的個人或集體，均已在文中作了明確的說明并表示了謝意。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人授權(quán)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。1．不同濃度雙氧水和氫氧化鈉溶液處理草魚皮，可以同時起到脫色、脫雜蛋白以及脫脂作用，氫氧化鈉濃度越高，脫色速度越快，反應(yīng)也越劇烈，雙氧水濃度對膠原蛋白脫色無明顯影響，在 mol/L 的氫氧化鈉溶液含 1％雙氧水中只需 6 小時就可以完全脫去色素，在 mol/L 的氫氧化鈉含 1％雙氧水溶液中，魚皮浮在溶液表面色素漸退，無法看到黑色素體轉(zhuǎn)變?yōu)榈S色； mol/L－ mol/L 氫氧化鈉能夠有效的去除魚皮中的非膠原蛋白，但是氫氧化鈉濃度越高，可能導(dǎo)致膠原蛋白的降解在預(yù)處理溶液中；在 20 ℃條件下，含 1％H 202 有效脫去脂肪，脫脂率約為 70％。4．從草魚皮中提取的酸溶性膠原蛋白和酶溶性膠原蛋白，紫外光譜分析，最大吸收峰都接近 223 nm 處；SDSPAGE 電泳圖譜顯示：酸溶性膠原蛋白含有較多β、γ 和多聚體，平均分子量高于酶溶性膠原蛋白，草魚皮 ASC 和 PSC 熱變性溫度分別為 ℃、 ℃，只比豬皮的熱變性溫度(37 ℃)低 3 ℃左右。C conditions, mol/L NaOH solution containing 1% H202 can effectively remove fat, defatted rate about 70%.2. The treatment of different concentrations of hydrogen peroxide and sodium hydroxide, have an impact on the Characterizations of collagen. At 20 176。 type I collagen。而明膠制備過程的高溫破壞，導(dǎo)致膠原蛋白原有的三股螺旋體結(jié)構(gòu)無法保持完整，使得分子量呈現(xiàn)不規(guī)則分布，所以僅能運用于低價位的食品材料，也用在皮膚保養(yǎng)方面，是一種皮膚營養(yǎng)劑 [3]。表格 11草魚皮膠原蛋白的制備及性質(zhì)研究2提供了脊椎動物主要膠原類型的鏈的組成，分子組成和以及組織分布 [1517]。α1(V) α2(V) α3(V)廣泛分布：骨，皮膚，角膜，胎盤，等3 膠原蛋白的結(jié)構(gòu)及特性膠原蛋白的結(jié)構(gòu)類似繩索，由無數(shù)根膠原蛋白微纖維所組合而成 [20，21] ，每條微纖維是膠原蛋白的基本單位，稱為原膠原蛋白分子，由三條多肽鏈纏繞形成右手三螺旋。Ⅰ型膠原蛋白二級結(jié)構(gòu)通過 x 射線分析，a 鏈組成左手螺旋，每圈上升 nm有 殘基 [3638]。膠原蛋白光纖的抗拉強(qiáng)度可高達(dá) 5－10 公斤/毫米平方，因此它提供了結(jié)締組織所需的張力、抗拉強(qiáng)度等 [49]。因此，稀酸溶液不適合從酮亞胺交聯(lián)鍵較為豐富的組織，例如骨、軟骨或來自于年代較老動物的組織都較難溶解在稀酸中，一般利用稀酸溶液提取膠原的流程是先將組織在較低溫度下研磨粉碎，再用中性鹽溶液清洗，除去可溶性蛋白和多糖，然后在低的離子強(qiáng)度條件下提取膠原。在一定條件下可以將端肽切除，同時保留了膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu)，所得膠原被稱為原膠原，它具有比較溫和的免疫反應(yīng)特性。膠原蛋白在食品行業(yè)中的應(yīng)用主要包括以下幾類。為保證有效的生理功能，用作保健制品原料的膠原蛋白要有一定程度的降解 [60]。 在其它方面的應(yīng)用膠原蛋白的水解產(chǎn)品明膠可以代替?zhèn)鹘y(tǒng)的魚膠作為啤酒、果酒、果汁、黃酒和第一章 文獻(xiàn)綜述7白酒等的澄清劑。本文首先研究了草魚皮的預(yù)處理工藝條件，采用氫氧化鈉中添加雙氧水可以同時起到脫色、脫雜蛋白、脫脂肪的作用，以及對膠原蛋白的溶解性的影響?，F(xiàn)日本僅限用于青魚子漂白，然后用過氧化氫酶使其分解。 不同 H2O2濃度處理取 3 g 魚皮樣品，分別加入 200 mL 分別含 0%、%、1%、2%、3％過氧化氫的 mol/L 氫氧化鈉溶液，在 20℃條件下脫色 24 小時，比較脫色效果，并采用福林酚法測定溶液中的蛋白質(zhì)含量。表 22 在不同溫度下提取酸溶性和酸＋酶溶性膠原蛋白設(shè)計Table22 Design of extraction of acid and acid+pepsin soluble collagens on different temperatures 溫度(℃) 醋酸濃度(mol/L) 胃蛋白酶(g) 提取時間（h）1 4 無 642 4 64第二章 草魚皮提取膠原蛋白工藝條件研究113 20 無 644 20 645 30 無 646 30 64 羥脯氨酸含量測定標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：標(biāo)準(zhǔn)儲備液 500 μg/mL：稱取 mg/L()羥脯氨酸用少量水溶解，加一滴 6 mol/L 鹽酸，定容至 100 mL 容量瓶中。2 nm 處測定吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算濃度。定容至 1000 mL，使用前稀釋 1 倍。上清液與 2樣品緩沖混合( mol/L Tris，4% SDS，20%甘油，2% β巰基乙醇， %溴酚籃)混合。魚皮在含有 1％雙氧水氫氧化鈉濃度 mol/L－ mol/L溶液中，魚皮上的黑色素體很快轉(zhuǎn)變?yōu)榈S色，6 個小時以后淡黃色的色素體逐漸溶表 23 不同濃度氫氧化鈉脫色效果Table 23 Effects of removing pigment on different NaOH concentrations氫氧化鈉濃度( mol/L) 3 小時脫色情況 6 小時脫色情況 24 小時脫色情況1 0 無變化 無變化 無變化2 無現(xiàn)象 黑色素逐漸褪去呈 淡灰色 魚皮形態(tài)保持原狀，黑色素褪去少數(shù)魚皮上有黑色素殘留，溶液淡黑3 魚皮上黑色素轉(zhuǎn) 變?yōu)闇\黃色 約有 70％黃色褪去 魚皮呈潔白半透明，溶液為黃色第二章 草魚皮提取膠原蛋白工藝條件研究134 魚皮上黑色素轉(zhuǎn) 變?yōu)辄S色 約有 80％黃色褪去 魚皮呈潔白半透明，溶液為黃色5 魚皮上黑色素轉(zhuǎn) 變?yōu)辄S色 約有 90％黃色褪去，溶液為淡黃色 魚皮呈潔白半透明，溶液為黃色由表 23 不同濃度氫氧化鈉脫色效果可以看出：在 20 ℃條件下，含有 1％ H2O2的不同濃度的氫氧化鈉溶液中，在中性條件下，雙氧水無脫色效果。所以，在 20 ℃，選擇低濃度氫氧化鈉去脫雜蛋白，同時對膠原蛋白性質(zhì)影響也最小。由圖 2－9 草魚皮在不同溫度醋酸溶液中溶解率隨時間變化曲線可以看出：在 4 ℃，在 mol/L 的醋酸溶液中提取 64 小時，草魚皮膠原蛋白溶解了35％左右。在相同的時間里，20 ℃和 30 ℃溶解了 87％左右。 膠原蛋白肽鏈組成草魚皮膠原蛋白的制備及性質(zhì)研究18圖 211 在 4 ℃條件下醋酸和醋酸＋酶提取膠原蛋白的 SDSPAGE 電泳圖，醋酸提取膠原蛋白(AS)：B，6 小時，C，12 小時，D，24 小時，E，36 小時，F(xiàn)，48 小時，醋酸加酶提取膠原蛋白(PS)：b，6 小時，c，12 小時，d，24 小時，e，36 小時，f，48 小時Figure212 SDS polyacrylamide gel electrophoresis of acid and acid+pepsin soluble collagens at condition of temperature 4 ℃，acid soluble collagen(AS)：B，6h，C，12 h，D，24 h，E，36 h，F(xiàn)，48 h，acid+pepsin soluble collagen(PS)：b，6 h，c，12 h，d，24 h，e，36 h，f，48 h圖 212 在 20 ℃條件下醋酸和醋酸＋酶提取膠原蛋白的 SDSPAGE 電泳圖，醋酸提取膠原蛋白(AS)：B，6 小時，C，12 小時，D，24 小時，E，36 小時，F(xiàn)，48 小時，醋酸加酶提取膠原蛋白(PS)：b，6 小時，c，12 小時，d，24 小時，e，36 小時，f，48 小時Figure212 SDS polyacrylamide gel electrophoresis of acid and acid+pepsin soluble collagens at condition of temperature 20 ℃， acid soluble collagen(AS)： B，6 第二章 草魚皮提取膠原蛋白工藝條件研究19h，C，12 h，D，24 h，E，36 h，F(xiàn)，48 h，acid+pepsin soluble collagen(PS)：b，6 h，c，12 h，d，24 h，e，36 h，f，48 h圖 213 在 30 ℃條件下醋酸和醋酸＋酶提取膠原蛋白的 SDSPAGE 電泳圖，醋酸提取膠原蛋白(AS)：M，marker，C，12 小時，D，24 小時，E，36 小時，F(xiàn)，48 小時