【正文】 漓為主證，兼息微唇紺，脈微欲絕或不能觸及，血壓下降，尿少，與臨床“陽脫證”的表現(xiàn)相近似的動物模型如：感染性休克晚期、失血休克晚期及心源性休克模型等。 (7)其他類型休克：燒傷、疼痛、胰島素休克、微循環(huán)障礙、彌漫性血管內(nèi)凝血等動物模型，亦可適當選用。 (5)過敏性休克模型：用抗原物質致敏動物后，注入相同的抗原，就可引起急劇的休克反應。 (3)心源性休克模型：用理化等有害刺激，損傷心肌，造成局部心肌壞死；結扎冠狀動脈的主要分支，造成心肌缺血性梗死；將塑料微球注入到冠狀動脈內(nèi)，造成冠狀功脈栓塞；在心導管上附上不銹鋼電極，插入到冠狀動脈，通以弱電流，造成冠狀動脈血栓及心肌缺血性栓塞等造成心源性休克動物模型。休克是一種急性循環(huán)功能不全綜合征，是有效血液循環(huán)不足，使全身組織和重要臟器的血液灌注不足，導致組織缺血缺氧，微循環(huán)淤滯，代謝索亂和臟器功能障礙等一系列改變。陽脫證治療以回陽救逆固脫為主；陰脫征治療以益氣養(yǎng)陰固脫為主。脫證為陰陽氣血衰竭的危重證候，厥證由輕轉重致脫，脫證早期可為厥，厥脫不同于單純的厥證或脫證，是由厥至脫，厥脫并見的臨床綜合病證，以手足厥冷，大汗淋漓，脈微欲絕，神志煩躁，淡漠或昏迷為臨床表現(xiàn)。 注意事項：此法特異性較差，大腦比心肌對缺氧更為敏感，很多有中樞抑制的藥物或刺激性約物腹腔注入可減少動物活動，降低機體耗氧量，也能延長存活時間，出現(xiàn)假陽性結果。將小鼠放入瓶后，將徐有凡士林的瓶蓋蓋緊，記錄時間，觀察各組動物存活時間。實驗時，每份樣本檢測 2～ 3次，取其均值。 (2)氧電極測定心肌耗氧率的方法：氧電極怯測定系利用氧在極化電壓下溶解的氧被還原而產(chǎn)生電流。 方法：健康成年犬，戊巴比妥鈉 (30mg／ kg)靜脈麻醉．開胸手術同前，從頸外靜脈插冠狀靜脈竇，同時頸總動脈插管。兩者升高說明心肌缺氧。 4，其他 心肌代謝除氧的攝取利用外，尚包括碳水化合物，脂肪、蛋白質等方面。③體外培養(yǎng)心肌細胞耐缺氧實驗，利用體外的人或動物心肌細胞，模擬臨床缺血性心臟病形成缺氧缺糖性損傷的細胞病理模型，用于研究藥物對心肌細胞缺氧能力的影響．與前述方法結合。 3 心肌耐缺氧實驗 增加心肌供血 (供氧 )或減少能量 (氧 )消耗，維持能量 氧 )代謝平衡，可提高心肌耐缺氧能力，國內(nèi)常用耐缺氧實驗綜合評價 — 些藥物的作用。方法簡便，結果穩(wěn)定。能選擇性增加心膜下氧張力的藥物或措施，對缺血性心肌都有保護作用。 1．直接測定 ①心肌耗氧星測定，在電磁流量汁測定冠脈血鼓的同叫反復多次測定動脈血及冠狀靜脈竇血氧量。 (八 )心肌氧代謝實驗 在心肌代謝中，氧的供需占有重要地位，供氧不足，耗氧增加是缺血性心臟病的主要矛盾。冠脈血管阻力受血管張力影響，受心肌緊張度對心血管支持力的影響。同叫可測定心肌耗氧星及其他生化指標的變化。 方法：雄性大鼠，體重 200250g，腹腔注射 0． 6％戊巴比罷鈉 45mg／ kg麻醉．仰位固定，分離 — 側股靜脈，注入肝素 125u，剪開胸．暴露心臟，動脈第 — 支頭臂動脈發(fā)出處近端橫斷，速將心臟投入 4C灌流液，沖洗冠狀動脈中的殘留血液，將心臟移至 lallgendoff灌流裝置 F端，以 Krebs— Henseleit液灌流。汁算心肌區(qū)域性血流量。 (4)心肌區(qū)域血流量測定：放射微粒法測定心肌區(qū)域血流量的原理是利用放射性素標記的微粒注入左心房，循環(huán)的微粒幾乎全部組織固定，故微粒流人每個器官的量 (以放射性表示 )與該器官血流成正比。以每個心臟放射性占注入總放射性的分數(shù)為指標，觀察小鼠心肌攝取 Rb量的多少。銣與鉀為同族元素，理化性質相似，均可通過血流進入心肌胞，血流越大，撮取量越多。利用冠狀靜脈竇插管直接抽血測定血氧含量，計算出心肌耗氧量及氧攝取率。實驗開始，阻斷須總動脈向冠脈左前支的灌流。分離頸總動脈插管，與冠脈插管相連形成旁路，灌注前降支遠端。實驗結束后，取下心臟稱重，以 1／ 3心重作為冠脈旋支血流供血區(qū)域，計算每 100g心肌每 lmin血流量。冠脈流量測定分兩種：即整體冠脈流量的測定和離體冠脈流量的測定。分離主動脈根部、冠狀動脈及相應電磁換能器、心尖部插管等是手術成功的關鍵。公式算其他血流動力學指標：心搏出量、耗氧指數(shù)、心臟指數(shù)、冠脈阻力外周阻力及氧利用率等。放置相應直徑電磁量計探頭，分別測量冠脈 血流量及心出量。 (六 )心臟血流動力學實驗 1．原理 心肌缺血往往伴隨心臟血流動力學改變，人部分治療缺血性心臟病的有效藥 物均可改善血流動力學而發(fā)揮作用。心臟病理學 改變。 (2)方法：健康犬，體重 lo— 20kg，戊巴比妥鈉 30mg／ kg注射麻酢，自右側股動脈插入導 管至左冠脈主干，以麥角新堿 ／ kg于生理鹽水， lmin內(nèi)拄入，可形 成冠脈痙攣及心肌缺血。比較各心電圖和病理變化，以判斷藥效。經(jīng)心電圖檢查，棄去心電圖有異常改變或心律失常。 家兔缺血模型：健康家兔，體重 2— 3kg，在清醒或麻醉狀態(tài)下進行實驗，記錄胸前導聯(lián)或 D導聯(lián)心電圖，耳靜脈 30s注入垂休后葉素 2． 5u／ kg，心肌缺血的心電變化急劇，不便判斷藥效，亦可改用靜脈滴注法，即在 l0min內(nèi)恒速滴人上述劑量的垂體后葉素，心電圖變化可持續(xù)到 15— 30min，除上述缺血性心電圖變化外，偶有竇性心律失常、室性早搏、室性心動過速等心律失常發(fā)生。注射后即刻、 5s、 10s、 15s及 30s、 lmin、 2min及 5min，重復記錄心電圖 (記錄時間可據(jù)示波器所示異常情況決定 )。目前常用垂體后葉素在整體動物 (犬、小型豬、兔、豚鼠，大鼠 )或離體心臟上造成冠脈痙攣心肌缺血模型，或用兒茶酚胺類藥物引起心肌缺血的方法，以評價抗心肌缺血藥物的療效。 局限性：①技術設備要求高。 上述觀測指標綜合選用，以判斷心肌細胞損傷程度及藥物保護作用。在掃描或透射電鏡下觀察超微結構的變化。②缺氧：將無糖 Hanks液或無糖培養(yǎng)基預先用純氮氣 (％ )飽和15min；實驗時換人這種缺氧缺糖液或培養(yǎng)基，培養(yǎng)瓶內(nèi)再充人氮氣(1l/min)30s．以置換瓶內(nèi)空氣，然后塞緊瓶塞。加入等量冷培養(yǎng)基以終止消化，離 10min(2022r／ min)，棄上清，再加入適量培養(yǎng)基于離心管內(nèi)的細胞沉淀中，混勻，離心，棄上清以洗殘存的胰蛋白酶，加入 15％ Eagle培養(yǎng)基，制成細胞懸液。 (四 )體外培養(yǎng)心肌細胞缺血樣損傷模型 1．原理 通常應用 Wistar種大鼠乳鼠進行原代心肌細胞培養(yǎng)，用缺氧缺糖形成缺血樣損傷。 3 觀察指標 ①心表面電圖，記錄復灌后 5min出現(xiàn)的室性早搏 PVC個數(shù)對數(shù)值lgPVC及室速與室顫總時對數(shù)值。將兩電極分別于主動脈及左心室壁，記錄心表面電圖。 2 方法 (1)在體心臟心肌缺血再灌注損傷模型：實驗可用多種動物如，犬、小型豬、貓和大鼠等。操作者嚴格訓練．操作熟練，手術時間不宜過長，部分結扎冠狀動脈后 ECG無改變者需剔除。 (3)梗死面積估算：處死動物，取心臟橫切數(shù)片，測梗死面積，方法同前，但誤差較大。 2．方法 取體重 200— 250g雄性大鼠，乙醚吸入或戊巴比妥鈉腹腔麻醉，仰臥固定，氣管插管，在胸骨側作 2cm的縱切口，近胸骨側剪斷第三第四肋軟骨，打開胸腔，聯(lián)接呼吸機 (通氣量 2ml／ l00g， 50次／ min)。 (4)實驗可注射給藥，但口服中藥消化道給藥，消化道灌胃給藥或十二指腸給藥，灌胃時，注意動物提前 8— 12h禁食。 (3)實驗時應嚴格控制心外膜電極的位置、壓力，心臟表面的溫度、濕度及位置。如需了解藥物與氧自由基的關系，可測定超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)作為氧自由基產(chǎn)生和清除的觀測指標。然后將 5片心肌置硝基四氮唑藍 (N— BT)染液中，震搖染色 15min后取出，正常心肌染為暗藍色，梗死區(qū)心肌則小著色或淺黃色，用求積儀或落點求積法或電腦圖像分析法測量每片心肌兩面的梗死區(qū)和非梗死區(qū)，計算出每片心肌總面積、總重量；缺血區(qū)和梗死面積和重量；計算缺血區(qū)占心室百分比，梗死區(qū)占心空白分比，及梗死區(qū)占缺血區(qū)百分比，以評價藥物的療效。電極用浸泡生理鹽水的燭芯棉線或細毛筆尖等柔軟材料探查電極，聯(lián)于心電圖胸前導聯(lián)描記，用普通心電圖機或多導生理記錄儀記錄。 (6)缺血再灌注創(chuàng)傷：在心肌缺血一定時間造成心肌損傷后，冉供血一定時間，加重心肌損傷而形成再灌注損傷，觀察藥物的保護作用。關閉胸腔后，塑料環(huán)吸收組織水分膨脹，環(huán)外殼系硬質材料做成，限制環(huán)的外展，結果壓迫冠狀動脈，形成心肌缺血。 2．方法 健康成年犬或小豬 (現(xiàn)我國已培育出實驗用“中國實驗小型豬” )，雌雄兼用，體重 10— 15kg，經(jīng)戊巴比妥鈉 (30mg/kg)靜脈麻醉，手術臺固定，分離氣骨并插管，連接電動呼吸機，調(diào)節(jié)潮氣量 300— 600wi，動脈氧分壓維持在 12— 13kPa(90100mmHg)，血 pH在正常范圍；左側第四肋間開胸，暴露心臟，剪開心包，做心包床；分離冠狀動脈左前降支中段 (一般相當廠第三分支根部 )，可用以下兒種方法阻斷冠狀動脈，形成心肌缺血： (1)冠狀動脈結扎法：在冠脈分離處穿 3— 4號處線以備結扎，或用動脈夾阻斷，一般用于急性心肌缺血實驗。西藥作用明確，療效肯定，尤其是一些經(jīng)典藥品，可檢驗實驗方法可靠性。因此，測定血液黏度、血漿纖維蛋白原含量、血細胞比容、紅細胞沉降、血小板黏附和聚集等血液流變學指標，對評價藥物的作用有重要意義。對血栓形成的影響和溶栓作用應為評價治療心肌缺血藥物藥效的輔助指標。藥物對動物血小板聚集性的影響可作為藥效學研究的輔助指標。 (2)貓、鼠等其他動物心功能及血流動力學試驗：觀察指標應包括心電圖、心率，動脈血壓、心輸出量、左室內(nèi)壓、左室內(nèi)壓最大上升速率、中心靜脈壓、左室別血的張力指數(shù)、左室作功指數(shù)、心臟指數(shù)、左室舒張未期壓等?？筛鶕?jù)所試藥物功能、主治和作用特點選用上述形態(tài)、電生理、生化、放免、核示蹤、熒光等觀測指標與方法，可以定位、定性、定量的觀測缺血心肌的動態(tài)變化及藥物影響，較為準確的評價藥效。⑤冠脈血流量、冠脈返流量及返流壓的測定。 (3)缺血區(qū)測定指標：①染料及熒光素法，通過從冠脈注入染料或熒光素，然后進行肌切片觀察心臟血流灌注情況，從而計算無染料(或熒光 )的面積 (即缺血面積 )，如合并應用 N— BT做活體雙重染色法可計算梗死面積與缺血面積的比值。④電子顯微鏡觀察細胞膜、線粒體、內(nèi)質網(wǎng)、細胞核及染色質等心肌細胞超微結構的改變。 2．觀察指標 (1)直接測定心肌梗死范圍：①大體標本活體染色法，以定量組織學 (N—BI39。 (4)體外培養(yǎng)心肌細胞缺血樣損傷模型：控制心肌細胞的供氧和培養(yǎng)基中的含糖量，形成“缺血樣損傷”模型。應明確研究的思路，作用的途徑，選擇適宜的主要藥效學實驗方法及必要的觀測指標，進行止確的分析判斷，以求得科學的結論。其共同特點是由于心肌供血不足所致氧的供需矛盾而發(fā)生的一系列病理生理改變及證候。基本病機為本虛標實。病位以心腎為主。 缺血性心臟病可由不同病因引起，最常見的原因是冠狀動脈粥樣硬化、冠狀動脈血栓及冠狀動脈痙攣。但由于缺血性心肌發(fā)病機制復雜，防治的途徑，方法及藥物類型亦較復雜。 (3)離體實驗心肌缺血模型：結扎離體心臟冠狀動脈法、離體心臟低氧或無氧灌流法。其余均為急性心肌缺血模型，可作藥物作用機制分析研究。③病理切片熒光照相法，利用四環(huán)素能與心肌壞死細胞中的鈣整合的特性，在切片上進行熒光照相，以測定梗死面積。③核示蹤法，將肘心肌壞死有親和力的物質進行核索標記來觀察梗死情況，常用的有锝 — 四環(huán)素和锝 — 焦磷酸亞錫。④心表面熒光法，用表面熒光照相來分析缺血 K情況。 3．方法學評價 以上各項試驗方法中，以阻斷動物的冠狀動脈所致之局限性心肌缺血是目前國內(nèi)外應用最廣泛的方法，通過狹窄或完全閉塞冠狀動脈，使其供應區(qū)的血流減少或缺無，造成心肌缺血，心肌因缺血、缺氧而發(fā)生代謝紊亂，以致發(fā)生凝固性壞死，其發(fā)病過程和機制與臨床相似，與中醫(yī)理論“瘀血證”有一定聯(lián)系，較為合理、實用。動脈血壓、冠脈流量，冠脈阻力、心輸出量、心肌收縮力、左室做功、左室內(nèi)壓、左室內(nèi)壓最大上升速率、心搏出量、心臟指數(shù)、心搏指數(shù)、總外周阻力等，并可同時測定心肌耗氧量、氧利用率、耗氧指數(shù)等。 (三 )其他試驗 1．血小板聚集性試驗 血小板聚集性增強是造成血液循環(huán)障礙導致心肌缺血發(fā)生的重要原因之一。 2．血栓形成及溶栓試驗 冠狀動脈血栓形成是直接導致心肌缺血因素之一。 3．血液流變學試驗 心肌缺血發(fā)生前后，常伴有血液流變學改變。 (四 )陽性對照藥 陽性對照藥既可選擇西藥，也可選中藥。 三、動物模型建立方法 (一 )犬或小型豬心肌缺血及心肌梗死模型 1．原理 通過縮窄或完全閉塞冠狀動脈，減少或停止供應區(qū)的血流，形成心肌缺血、缺氧而發(fā)生代謝紊亂，以致發(fā)生心肌壞死。 (4)Ameroid縮窄環(huán)法：為形成