【正文】 漓為主證，兼息微唇紺，脈微欲絕或不能觸及，血壓下降，尿少，與臨床“陽(yáng)脫證”的表現(xiàn)相近似的動(dòng)物模型如：感染性休克晚期、失血休克晚期及心源性休克模型等。 (7)其他類型休克：燒傷、疼痛、胰島素休克、微循環(huán)障礙、彌漫性血管內(nèi)凝血等動(dòng)物模型，亦可適當(dāng)選用。 (5)過(guò)敏性休克模型：用抗原物質(zhì)致敏動(dòng)物后，注入相同的抗原，就可引起急劇的休克反應(yīng)。 (3)心源性休克模型：用理化等有害刺激，損傷心肌，造成局部心肌壞死；結(jié)扎冠狀動(dòng)脈的主要分支，造成心肌缺血性梗死；將塑料微球注入到冠狀動(dòng)脈內(nèi)，造成冠狀功脈栓塞；在心導(dǎo)管上附上不銹鋼電極，插入到冠狀動(dòng)脈，通以弱電流，造成冠狀動(dòng)脈血栓及心肌缺血性栓塞等造成心源性休克動(dòng)物模型。休克是一種急性循環(huán)功能不全綜合征，是有效血液循環(huán)不足，使全身組織和重要臟器的血液灌注不足，導(dǎo)致組織缺血缺氧，微循環(huán)淤滯，代謝索亂和臟器功能障礙等一系列改變。陽(yáng)脫證治療以回陽(yáng)救逆固脫為主；陰脫征治療以益氣養(yǎng)陰固脫為主。脫證為陰陽(yáng)氣血衰竭的危重證候，厥證由輕轉(zhuǎn)重致脫，脫證早期可為厥，厥脫不同于單純的厥證或脫證，是由厥至脫，厥脫并見的臨床綜合病證，以手足厥冷，大汗淋漓，脈微欲絕，神志煩躁，淡漠或昏迷為臨床表現(xiàn)。 注意事項(xiàng)：此法特異性較差，大腦比心肌對(duì)缺氧更為敏感，很多有中樞抑制的藥物或刺激性約物腹腔注入可減少動(dòng)物活動(dòng)，降低機(jī)體耗氧量，也能延長(zhǎng)存活時(shí)間，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。將小鼠放入瓶后，將徐有凡士林的瓶蓋蓋緊，記錄時(shí)間，觀察各組動(dòng)物存活時(shí)間。實(shí)驗(yàn)時(shí)，每份樣本檢測(cè) 2～ 3次，取其均值。 (2)氧電極測(cè)定心肌耗氧率的方法：氧電極怯測(cè)定系利用氧在極化電壓下溶解的氧被還原而產(chǎn)生電流。 方法：健康成年犬，戊巴比妥鈉 (30mg／ kg)靜脈麻醉．開胸手術(shù)同前，從頸外靜脈插冠狀靜脈竇，同時(shí)頸總動(dòng)脈插管。兩者升高說(shuō)明心肌缺氧。 4，其他 心肌代謝除氧的攝取利用外，尚包括碳水化合物，脂肪、蛋白質(zhì)等方面。③體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞耐缺氧實(shí)驗(yàn)，利用體外的人或動(dòng)物心肌細(xì)胞，模擬臨床缺血性心臟病形成缺氧缺糖性損傷的細(xì)胞病理模型，用于研究藥物對(duì)心肌細(xì)胞缺氧能力的影響．與前述方法結(jié)合。 3 心肌耐缺氧實(shí)驗(yàn) 增加心肌供血 (供氧 )或減少能量 (氧 )消耗，維持能量 氧 )代謝平衡，可提高心肌耐缺氧能力，國(guó)內(nèi)常用耐缺氧實(shí)驗(yàn)綜合評(píng)價(jià) — 些藥物的作用。方法簡(jiǎn)便，結(jié)果穩(wěn)定。能選擇性增加心膜下氧張力的藥物或措施，對(duì)缺血性心肌都有保護(hù)作用。 1．直接測(cè)定 ①心肌耗氧星測(cè)定，在電磁流量汁測(cè)定冠脈血鼓的同叫反復(fù)多次測(cè)定動(dòng)脈血及冠狀靜脈竇血氧量。 (八 )心肌氧代謝實(shí)驗(yàn) 在心肌代謝中，氧的供需占有重要地位，供氧不足，耗氧增加是缺血性心臟病的主要矛盾。冠脈血管阻力受血管張力影響，受心肌緊張度對(duì)心血管支持力的影響。同叫可測(cè)定心肌耗氧星及其他生化指標(biāo)的變化。 方法：雄性大鼠，體重 200250g，腹腔注射 0． 6％戊巴比罷鈉 45mg／ kg麻醉．仰位固定，分離 — 側(cè)股靜脈，注入肝素 125u，剪開胸．暴露心臟，動(dòng)脈第 — 支頭臂動(dòng)脈發(fā)出處近端橫斷，速將心臟投入 4C灌流液，沖洗冠狀動(dòng)脈中的殘留血液，將心臟移至 lallgendoff灌流裝置 F端，以 Krebs— Henseleit液灌流。汁算心肌區(qū)域性血流量。 (4)心肌區(qū)域血流量測(cè)定：放射微粒法測(cè)定心肌區(qū)域血流量的原理是利用放射性素標(biāo)記的微粒注入左心房，循環(huán)的微粒幾乎全部組織固定，故微粒流人每個(gè)器官的量 (以放射性表示 )與該器官血流成正比。以每個(gè)心臟放射性占注入總放射性的分?jǐn)?shù)為指標(biāo)，觀察小鼠心肌攝取 Rb量的多少。銣與鉀為同族元素，理化性質(zhì)相似，均可通過(guò)血流進(jìn)入心肌胞，血流越大，撮取量越多。利用冠狀靜脈竇插管直接抽血測(cè)定血氧含量，計(jì)算出心肌耗氧量及氧攝取率。實(shí)驗(yàn)開始，阻斷須總動(dòng)脈向冠脈左前支的灌流。分離頸總動(dòng)脈插管，與冠脈插管相連形成旁路，灌注前降支遠(yuǎn)端。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取下心臟稱重，以 1／ 3心重作為冠脈旋支血流供血區(qū)域，計(jì)算每 100g心肌每 lmin血流量。冠脈流量測(cè)定分兩種：即整體冠脈流量的測(cè)定和離體冠脈流量的測(cè)定。分離主動(dòng)脈根部、冠狀動(dòng)脈及相應(yīng)電磁換能器、心尖部插管等是手術(shù)成功的關(guān)鍵。公式算其他血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)：心搏出量、耗氧指數(shù)、心臟指數(shù)、冠脈阻力外周阻力及氧利用率等。放置相應(yīng)直徑電磁量計(jì)探頭，分別測(cè)量冠脈 血流量及心出量。 (六 )心臟血流動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn) 1．原理 心肌缺血往往伴隨心臟血流動(dòng)力學(xué)改變，人部分治療缺血性心臟病的有效藥 物均可改善血流動(dòng)力學(xué)而發(fā)揮作用。心臟病理學(xué) 改變。 (2)方法：健康犬，體重 lo— 20kg，戊巴比妥鈉 30mg／ kg注射麻酢，自右側(cè)股動(dòng)脈插入導(dǎo) 管至左冠脈主干，以麥角新堿 ／ kg于生理鹽水， lmin內(nèi)拄入，可形 成冠脈痙攣及心肌缺血。比較各心電圖和病理變化，以判斷藥效。經(jīng)心電圖檢查，棄去心電圖有異常改變或心律失常。 家兔缺血模型：健康家兔，體重 2— 3kg，在清醒或麻醉狀態(tài)下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄胸前導(dǎo)聯(lián)或 D導(dǎo)聯(lián)心電圖，耳靜脈 30s注入垂休后葉素 2． 5u／ kg，心肌缺血的心電變化急劇，不便判斷藥效，亦可改用靜脈滴注法，即在 l0min內(nèi)恒速滴人上述劑量的垂體后葉素，心電圖變化可持續(xù)到 15— 30min，除上述缺血性心電圖變化外，偶有竇性心律失常、室性早搏、室性心動(dòng)過(guò)速等心律失常發(fā)生。注射后即刻、 5s、 10s、 15s及 30s、 lmin、 2min及 5min，重復(fù)記錄心電圖 (記錄時(shí)間可據(jù)示波器所示異常情況決定 )。目前常用垂體后葉素在整體動(dòng)物 (犬、小型豬、兔、豚鼠，大鼠 )或離體心臟上造成冠脈痙攣心肌缺血模型，或用兒茶酚胺類藥物引起心肌缺血的方法，以評(píng)價(jià)抗心肌缺血藥物的療效。 局限性：①技術(shù)設(shè)備要求高。 上述觀測(cè)指標(biāo)綜合選用，以判斷心肌細(xì)胞損傷程度及藥物保護(hù)作用。在掃描或透射電鏡下觀察超微結(jié)構(gòu)的變化。②缺氧：將無(wú)糖 Hanks液或無(wú)糖培養(yǎng)基預(yù)先用純氮?dú)?(％ )飽和15min；實(shí)驗(yàn)時(shí)換人這種缺氧缺糖液或培養(yǎng)基，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)再充人氮?dú)?1l/min)30s．以置換瓶?jī)?nèi)空氣，然后塞緊瓶塞。加入等量冷培養(yǎng)基以終止消化，離 10min(2022r／ min)，棄上清，再加入適量培養(yǎng)基于離心管內(nèi)的細(xì)胞沉淀中，混勻，離心，棄上清以洗殘存的胰蛋白酶，加入 15％ Eagle培養(yǎng)基，制成細(xì)胞懸液。 (四 )體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞缺血樣損傷模型 1．原理 通常應(yīng)用 Wistar種大鼠乳鼠進(jìn)行原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)，用缺氧缺糖形成缺血樣損傷。 3 觀察指標(biāo) ①心表面電圖，記錄復(fù)灌后 5min出現(xiàn)的室性早搏 PVC個(gè)數(shù)對(duì)數(shù)值lgPVC及室速與室顫總時(shí)對(duì)數(shù)值。將兩電極分別于主動(dòng)脈及左心室壁，記錄心表面電圖。 2 方法 (1)在體心臟心肌缺血再灌注損傷模型：實(shí)驗(yàn)可用多種動(dòng)物如，犬、小型豬、貓和大鼠等。操作者嚴(yán)格訓(xùn)練．操作熟練，手術(shù)時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，部分結(jié)扎冠狀動(dòng)脈后 ECG無(wú)改變者需剔除。 (3)梗死面積估算：處死動(dòng)物，取心臟橫切數(shù)片，測(cè)梗死面積，方法同前，但誤差較大。 2．方法 取體重 200— 250g雄性大鼠，乙醚吸入或戊巴比妥鈉腹腔麻醉，仰臥固定，氣管插管，在胸骨側(cè)作 2cm的縱切口，近胸骨側(cè)剪斷第三第四肋軟骨，打開胸腔，聯(lián)接呼吸機(jī) (通氣量 2ml／ l00g， 50次／ min)。 (4)實(shí)驗(yàn)可注射給藥，但口服中藥消化道給藥，消化道灌胃給藥或十二指腸給藥，灌胃時(shí)，注意動(dòng)物提前 8— 12h禁食。 (3)實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制心外膜電極的位置、壓力，心臟表面的溫度、濕度及位置。如需了解藥物與氧自由基的關(guān)系，可測(cè)定超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)作為氧自由基產(chǎn)生和清除的觀測(cè)指標(biāo)。然后將 5片心肌置硝基四氮唑藍(lán) (N— BT)染液中，震搖染色 15min后取出，正常心肌染為暗藍(lán)色，梗死區(qū)心肌則小著色或淺黃色，用求積儀或落點(diǎn)求積法或電腦圖像分析法測(cè)量每片心肌兩面的梗死區(qū)和非梗死區(qū)，計(jì)算出每片心肌總面積、總重量；缺血區(qū)和梗死面積和重量；計(jì)算缺血區(qū)占心室百分比，梗死區(qū)占心空白分比，及梗死區(qū)占缺血區(qū)百分比，以評(píng)價(jià)藥物的療效。電極用浸泡生理鹽水的燭芯棉線或細(xì)毛筆尖等柔軟材料探查電極，聯(lián)于心電圖胸前導(dǎo)聯(lián)描記，用普通心電圖機(jī)或多導(dǎo)生理記錄儀記錄。 (6)缺血再灌注創(chuàng)傷：在心肌缺血一定時(shí)間造成心肌損傷后，冉供血一定時(shí)間，加重心肌損傷而形成再灌注損傷，觀察藥物的保護(hù)作用。關(guān)閉胸腔后，塑料環(huán)吸收組織水分膨脹，環(huán)外殼系硬質(zhì)材料做成，限制環(huán)的外展，結(jié)果壓迫冠狀動(dòng)脈，形成心肌缺血。 2．方法 健康成年犬或小豬 (現(xiàn)我國(guó)已培育出實(shí)驗(yàn)用“中國(guó)實(shí)驗(yàn)小型豬” )，雌雄兼用，體重 10— 15kg，經(jīng)戊巴比妥鈉 (30mg/kg)靜脈麻醉，手術(shù)臺(tái)固定，分離氣骨并插管，連接電動(dòng)呼吸機(jī)，調(diào)節(jié)潮氣量 300— 600wi，動(dòng)脈氧分壓維持在 12— 13kPa(90100mmHg)，血 pH在正常范圍；左側(cè)第四肋間開胸，暴露心臟，剪開心包，做心包床；分離冠狀動(dòng)脈左前降支中段 (一般相當(dāng)廠第三分支根部 )，可用以下兒種方法阻斷冠狀動(dòng)脈，形成心肌缺血： (1)冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法：在冠脈分離處穿 3— 4號(hào)處線以備結(jié)扎，或用動(dòng)脈夾阻斷，一般用于急性心肌缺血實(shí)驗(yàn)。西藥作用明確，療效肯定，尤其是一些經(jīng)典藥品，可檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法可靠性。因此，測(cè)定血液黏度、血漿纖維蛋白原含量、血細(xì)胞比容、紅細(xì)胞沉降、血小板黏附和聚集等血液流變學(xué)指標(biāo)，對(duì)評(píng)價(jià)藥物的作用有重要意義。對(duì)血栓形成的影響和溶栓作用應(yīng)為評(píng)價(jià)治療心肌缺血藥物藥效的輔助指標(biāo)。藥物對(duì)動(dòng)物血小板聚集性的影響可作為藥效學(xué)研究的輔助指標(biāo)。 (2)貓、鼠等其他動(dòng)物心功能及血流動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)：觀察指標(biāo)應(yīng)包括心電圖、心率，動(dòng)脈血壓、心輸出量、左室內(nèi)壓、左室內(nèi)壓最大上升速率、中心靜脈壓、左室別血的張力指數(shù)、左室作功指數(shù)、心臟指數(shù)、左室舒張未期壓等?？筛鶕?jù)所試藥物功能、主治和作用特點(diǎn)選用上述形態(tài)、電生理、生化、放免、核示蹤、熒光等觀測(cè)指標(biāo)與方法，可以定位、定性、定量的觀測(cè)缺血心肌的動(dòng)態(tài)變化及藥物影響，較為準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)藥效。⑤冠脈血流量、冠脈返流量及返流壓的測(cè)定。 (3)缺血區(qū)測(cè)定指標(biāo)：①染料及熒光素法，通過(guò)從冠脈注入染料或熒光素，然后進(jìn)行肌切片觀察心臟血流灌注情況，從而計(jì)算無(wú)染料(或熒光 )的面積 (即缺血面積 )，如合并應(yīng)用 N— BT做活體雙重染色法可計(jì)算梗死面積與缺血面積的比值。④電子顯微鏡觀察細(xì)胞膜、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、細(xì)胞核及染色質(zhì)等心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。 2．觀察指標(biāo) (1)直接測(cè)定心肌梗死范圍：①大體標(biāo)本活體染色法，以定量組織學(xué) (N—BI39。 (4)體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞缺血樣損傷模型：控制心肌細(xì)胞的供氧和培養(yǎng)基中的含糖量，形成“缺血樣損傷”模型。應(yīng)明確研究的思路，作用的途徑，選擇適宜的主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)方法及必要的觀測(cè)指標(biāo)，進(jìn)行止確的分析判斷，以求得科學(xué)的結(jié)論。其共同特點(diǎn)是由于心肌供血不足所致氧的供需矛盾而發(fā)生的一系列病理生理改變及證候。基本病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)。病位以心腎為主。 缺血性心臟病可由不同病因引起，最常見的原因是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈血栓及冠狀動(dòng)脈痙攣。但由于缺血性心肌發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，防治的途徑，方法及藥物類型亦較復(fù)雜。 (3)離體實(shí)驗(yàn)心肌缺血模型：結(jié)扎離體心臟冠狀動(dòng)脈法、離體心臟低氧或無(wú)氧灌流法。其余均為急性心肌缺血模型，可作藥物作用機(jī)制分析研究。③病理切片熒光照相法，利用四環(huán)素能與心肌壞死細(xì)胞中的鈣整合的特性，在切片上進(jìn)行熒光照相，以測(cè)定梗死面積。③核示蹤法，將肘心肌壞死有親和力的物質(zhì)進(jìn)行核索標(biāo)記來(lái)觀察梗死情況，常用的有锝 — 四環(huán)素和锝 — 焦磷酸亞錫。④心表面熒光法，用表面熒光照相來(lái)分析缺血 K情況。 3．方法學(xué)評(píng)價(jià) 以上各項(xiàng)試驗(yàn)方法中，以阻斷動(dòng)物的冠狀動(dòng)脈所致之局限性心肌缺血是目前國(guó)內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的方法，通過(guò)狹窄或完全閉塞冠狀動(dòng)脈，使其供應(yīng)區(qū)的血流減少或缺無(wú)，造成心肌缺血，心肌因缺血、缺氧而發(fā)生代謝紊亂，以致發(fā)生凝固性壞死，其發(fā)病過(guò)程和機(jī)制與臨床相似，與中醫(yī)理論“瘀血證”有一定聯(lián)系，較為合理、實(shí)用。動(dòng)脈血壓、冠脈流量，冠脈阻力、心輸出量、心肌收縮力、左室做功、左室內(nèi)壓、左室內(nèi)壓最大上升速率、心搏出量、心臟指數(shù)、心搏指數(shù)、總外周阻力等，并可同時(shí)測(cè)定心肌耗氧量、氧利用率、耗氧指數(shù)等。 (三 )其他試驗(yàn) 1．血小板聚集性試驗(yàn) 血小板聚集性增強(qiáng)是造成血液循環(huán)障礙導(dǎo)致心肌缺血發(fā)生的重要原因之一。 2．血栓形成及溶栓試驗(yàn) 冠狀動(dòng)脈血栓形成是直接導(dǎo)致心肌缺血因素之一。 3．血液流變學(xué)試驗(yàn) 心肌缺血發(fā)生前后，常伴有血液流變學(xué)改變。 (四 )陽(yáng)性對(duì)照藥 陽(yáng)性對(duì)照藥既可選擇西藥，也可選中藥。 三、動(dòng)物模型建立方法 (一 )犬或小型豬心肌缺血及心肌梗死模型 1．原理 通過(guò)縮窄或完全閉塞冠狀動(dòng)脈，減少或停止供應(yīng)區(qū)的血流，形成心肌缺血、缺氧而發(fā)生代謝紊亂，以致發(fā)生心肌壞死。 (4)Ameroid縮窄環(huán)法：為形成