《吸光光度法》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 . 方法評(píng)價(jià)二二 .吸光光度法原理吸光光度法原理1. 物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收2. 光的吸收定律(1) LambertBeer定律 (2) 吸光度光度法(3) 偏離光吸收定律的原因三三 . 儀器和方法儀器和方法 四四 . 顯色反應(yīng)和顯色條件的選擇顯色反應(yīng)和顯色條件的選擇五五 .測定條件的選擇測定條件的選擇六六 .具體應(yīng)用具體應(yīng)用 3一一 . 概述概述陽光棱鏡連續(xù)光譜物質(zhì)不連續(xù)光譜吸光光度法 :基于 物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收 而建立的分析方法由兩種或兩種以上波長的光所組成復(fù)合光分類分類 ：吸光光度分析法根據(jù)物質(zhì)所吸收光的：吸光光度分析法根據(jù)物質(zhì)所吸收光的波長范圍不同，分為紫外、可見及紅外分光波長范圍不同，分為紫外、可見及紅外分光光度法。通過比較顏色深淺，測定物質(zhì)的濃度通過比較顏色深淺，測定物質(zhì)的濃度方法分類和比較方法分類和比較105 ~ 106 mol?L1 105 ~ 108 mol?L1比色分析法比色分析法 分光光度法分光光度法測定下限測定下限相對(duì)誤差相對(duì)誤差 5% ~ 10% 2% ~ 5%適用于分析半微量和微量的物質(zhì)適用于分析半微量和微量的物質(zhì)深深一一 . 概述概述5方法的評(píng)價(jià)方法的評(píng)價(jià)適用面廣快速、 簡便分析有色、無色、淺色物溶液狀態(tài)、均質(zhì)固態(tài)樣品靈敏度高： 濃度下限達(dá)濃度下限達(dá) 105~108 mol（ 1）同一物質(zhì)對(duì)不同波長光的吸收程度不同，吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長稱為最大吸收波長 λmax。 注意注意 :（ 1） 物質(zhì)不吸光， I=Io ， A=0 物質(zhì)吸收部分光， I＜ Io， A＞ 0（ 2） A具有加和性， A總 =A1+A2+…… +A n（ 3）入射光的 λ： 可見光 , 紫外光 , 紅外光（ 4）光吸收定律的應(yīng)用條件 稀溶液稀溶液 入射光為單色光入射光為單色光二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理14（ 5）也可以用透射光強(qiáng)度（透射率 T% ） 表示T %的含義：物質(zhì)不吸收光 I=Io ， T% =100%物質(zhì)吸收部分光， I＜ Io ， T% ＜ 100%物質(zhì)吸收光 ， T% ， 物質(zhì)的濃度 。 在溫度和波長等條件一定時(shí)， ε僅與吸收物質(zhì)本身的性質(zhì)有關(guān)，與待測物濃度無關(guān)；可做 定型鑒定參數(shù)（ 3）同一吸收物質(zhì)在不同波長下的 ε值是不同的。（ 6） ε在數(shù)值上等于濃度為 1 mol 解：解：二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理19 物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收 光吸收定律光吸收定律 Lambert Beer定律定律 ———— 光吸收定律光吸收定律 稀溶液稀溶液 入射光為單色光入射光為單色光A=abc = ?cb=Kcb20步驟步驟配制一組濃度系列的標(biāo)準(zhǔn)溶液（ ci）儀器測量 一組相應(yīng)的吸光度值（ Ai）制圖（ ci 為 橫坐標(biāo)， Ai 為縱坐標(biāo)） 工作曲線(1)(2) 配制樣品儀器測量相同條件Axcx查圖得出 cxAc二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理22按光吸收定律 :Io Io1Io2I1I2I試樣 若 入射光包含 λ1和 λ2二種波長光 , 當(dāng)照射試樣后二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理23討論討論 :當(dāng)為純單色光時(shí)，當(dāng)為純單色光時(shí)，A總總 =ελ1cb當(dāng)單色光不純時(shí)，當(dāng)單色光不純時(shí)， λ1=λ2 ελ1=ελ2A總總 ∝∝ c 線性破壞結(jié)論：結(jié)論： 單色光純度越差，線性越差單色光純度越差，線性越差λ1=λ2 ελ1=ελ2二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理24減少單色光不純引起偏差方法 ——— 在 ?max處測量 選用譜帶 a的復(fù)合光進(jìn)行測量，得到右圖的工作曲線， A與 c基本呈直線關(guān)系。故朗伯 比耳定律 只適用于稀溶液 。L1)時(shí)才基本符合。2)溶液以膠體、乳濁、懸浮狀態(tài)存在時(shí)，有反射、散射作用二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理27例例 :(橙色橙色 ) (黃色黃色 )λmax=450nmA總總包括離解、締合、生成新物質(zhì)、形成異構(gòu)體使原物質(zhì)濃度改變吸光度值變化 產(chǎn)生偏離pH ， 平衡平衡 移移 , c. 溶液內(nèi)部的化學(xué)變化溶液內(nèi)部的化學(xué)變化二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理28目視比色法目視比色法C1 C 2 C 3 C 4 C 5[Fe(SCN)n]3n配制一組標(biāo)準(zhǔn)濃度系列配制一組標(biāo)準(zhǔn)濃度系列C x三三
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