《吸光光度法》ppt課件-全文預覽
【正文】 . 方法評價二二 .吸光光度法原理吸光光度法原理1. 物質對光的選擇性吸收2. 光的吸收定律(1) LambertBeer定律 (2) 吸光度光度法(3) 偏離光吸收定律的原因三三 . 儀器和方法儀器和方法 四四 . 顯色反應和顯色條件的選擇顯色反應和顯色條件的選擇五五 .測定條件的選擇測定條件的選擇六六 .具體應用具體應用 3一一 . 概述概述陽光棱鏡連續(xù)光譜物質不連續(xù)光譜吸光光度法 :基于 物質對光的選擇性吸收 而建立的分析方法由兩種或兩種以上波長的光所組成復合光分類分類 ：吸光光度分析法根據物質所吸收光的：吸光光度分析法根據物質所吸收光的波長范圍不同，分為紫外、可見及紅外分光波長范圍不同，分為紫外、可見及紅外分光光度法。通過比較顏色深淺，測定物質的濃度通過比較顏色深淺，測定物質的濃度方法分類和比較方法分類和比較105 ~ 106 mol?L1 105 ~ 108 mol?L1比色分析法比色分析法 分光光度法分光光度法測定下限測定下限相對誤差相對誤差 5% ~ 10% 2% ~ 5%適用于分析半微量和微量的物質適用于分析半微量和微量的物質深深一一 . 概述概述5方法的評價方法的評價適用面廣快速、 簡便分析有色、無色、淺色物溶液狀態(tài)、均質固態(tài)樣品靈敏度高： 濃度下限達濃度下限達 105~108 mol（ 1）同一物質對不同波長光的吸收程度不同，吸光度最大處對應的波長稱為最大吸收波長 λmax。 注意注意 :（ 1） 物質不吸光， I=Io ， A=0 物質吸收部分光， I＜ Io， A＞ 0（ 2） A具有加和性， A總 =A1+A2+…… +A n（ 3）入射光的 λ： 可見光 , 紫外光 , 紅外光（ 4）光吸收定律的應用條件 稀溶液稀溶液 入射光為單色光入射光為單色光二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理14（ 5）也可以用透射光強度（透射率 T% ） 表示T %的含義：物質不吸收光 I=Io ， T% =100%物質吸收部分光， I＜ Io ， T% ＜ 100%物質吸收光 ， T% ， 物質的濃度 。 在溫度和波長等條件一定時， ε僅與吸收物質本身的性質有關，與待測物濃度無關；可做 定型鑒定參數(shù)（ 3）同一吸收物質在不同波長下的 ε值是不同的。（ 6） ε在數(shù)值上等于濃度為 1 mol 解：解：二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理19 物質對光的選擇性吸收物質對光的選擇性吸收 光吸收定律光吸收定律 Lambert Beer定律定律 ———— 光吸收定律光吸收定律 稀溶液稀溶液 入射光為單色光入射光為單色光A=abc = ?cb=Kcb20步驟步驟配制一組濃度系列的標準溶液（ ci）儀器測量 一組相應的吸光度值（ Ai）制圖（ ci 為 橫坐標， Ai 為縱坐標） 工作曲線(1)(2) 配制樣品儀器測量相同條件Axcx查圖得出 cxAc二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理22按光吸收定律 :Io Io1Io2I1I2I試樣 若 入射光包含 λ1和 λ2二種波長光 , 當照射試樣后二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理23討論討論 :當為純單色光時，當為純單色光時，A總總 =ελ1cb當單色光不純時，當單色光不純時， λ1=λ2 ελ1=ελ2A總總 ∝∝ c 線性破壞結論：結論： 單色光純度越差，線性越差單色光純度越差，線性越差λ1=λ2 ελ1=ελ2二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理24減少單色光不純引起偏差方法 ——— 在 ?max處測量 選用譜帶 a的復合光進行測量，得到右圖的工作曲線， A與 c基本呈直線關系。故朗伯 比耳定律 只適用于稀溶液 。L1)時才基本符合。2)溶液以膠體、乳濁、懸浮狀態(tài)存在時，有反射、散射作用二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理27例例 :(橙色橙色 ) (黃色黃色 )λmax=450nmA總總包括離解、締合、生成新物質、形成異構體使原物質濃度改變吸光度值變化 產生偏離pH ， 平衡平衡 移移 , c. 溶液內部的化學變化溶液內部的化學變化二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理28目視比色法目視比色法C1 C 2 C 3 C 4 C 5[Fe(SCN)n]3n配制一組標準濃度系列配制一組標準濃度系列C x三三
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1