《吸光光度法》ppt課件-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 . 儀器和方法儀器和方法29分光光度法分光光度法 :儀器儀器 —— 分光光度計(jì)分光光度計(jì)基本組成：基本組成：光源 單色器 樣品室 顯示器檢測(cè)器三三 . 儀器和方法儀器和方法30＊＊ 光源光源 (鎢燈、氫燈、氘燈）鎢燈、氫燈、氘燈）能發(fā)射紫外光區(qū)或可見(jiàn)光譜區(qū)的連續(xù)光譜；足夠的輻射強(qiáng)度、穩(wěn)定性較好、使用壽命較長(zhǎng)基本要求基本要求 :常用的光源常用的光源 :可見(jiàn)光區(qū)可見(jiàn)光區(qū) : 鎢燈鎢燈 (輻射波長(zhǎng)為輻射波長(zhǎng)為 320nm~2500nm)紫外區(qū)紫外區(qū) : 氫燈、氘燈氫燈、氘燈 (輻射波長(zhǎng)為輻射波長(zhǎng)為 185nm~400nm)三三 . 儀器和方法儀器和方法31＊＊ 單色器單色器作用作用 :將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光的光學(xué)系統(tǒng)1. 濾光片濾光片 光電比色計(jì)的單色器光電比色計(jì)的單色器選擇的原則 ： 濾光片 最易通過(guò)的光是 有色溶液 最易吸收的光組成： 由有色玻璃制成作用： 只允許和它 顏色相同 的光通過(guò)，得 到的是近似的單色光互補(bǔ)色（濾光片、棱鏡或光柵）（濾光片、棱鏡或光柵）三三 . 儀器和方法儀器和方法32組成組成 :入射狹縫：入射狹縫： 光源的光由此進(jìn)入單色器準(zhǔn)光裝置：準(zhǔn)光裝置： 透鏡或反射鏡透鏡或反射鏡 使入射光成為平行光束聚焦裝置：聚焦裝置： 將分光后的單色光聚焦至出射狹縫 （（ 透鏡或凹面鏡）透鏡或凹面鏡）色散元件：色散元件： 將復(fù)合光分解成單色光2. 棱鏡或光柵棱鏡或光柵分光光度計(jì)的單色器分光光度計(jì)的單色器由 棱鏡棱鏡 或 光柵光柵 等色散元件及狹縫和透鏡等組成三三 . 儀器和方法儀器和方法33入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器準(zhǔn)光裝置： 透鏡或反射鏡 使入射光成為平行光束聚焦裝置： (透鏡或凹面鏡） 將分光后的單色光聚焦至出射狹縫色散元件：將復(fù)合光分解成單色光34光柵和棱鏡分光原理光柵分光棱鏡分光平面玻璃或金屬片：刻有大量平行等寬、等距狹縫 (刻線 )光柵的每條刻線都產(chǎn)生衍射作用，衍射光互相干涉產(chǎn)生干涉條紋。單色器獲得單單色器獲得單色光的半寬度色光的半寬度：：棱鏡棱鏡 : 5~10nm光柵光柵 : 35＊＊ 樣品室樣品室用于放置各種類型的吸收池 (比色皿 )和相應(yīng)的池架附件（石英池和玻璃池）（石英池和玻璃池）三三 . 儀器和方法儀器和方法厚度 (光程 ): , 1, 2, 3, …cm石英或玻璃池，紫外區(qū)一定要用石英池36＊ 檢測(cè)系統(tǒng) 光電管或光電倍增管 將光強(qiáng)度轉(zhuǎn)換成電流來(lái)進(jìn)行測(cè)量?？蓸?gòu)成多通道并行工作，同時(shí)檢測(cè)全部波長(zhǎng)的信號(hào)，然后，對(duì)二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到的是時(shí)間、光強(qiáng)度和波長(zhǎng)的三維譜圖。 選擇適當(dāng)?shù)娘@色條件以避免干擾 用磺基水楊酸測(cè)定 Fe3+離子時(shí) ,Cu2+與試劑形成黃色絡(luò)合物 , 干擾測(cè)定，但如控制 pH在 ， Cu2+則不與試劑反應(yīng)。l 如圖選 500nm波長(zhǎng)測(cè)定，靈敏度雖有所下降，卻消除了干擾，提高了測(cè)定的準(zhǔn)確度和選擇性。的標(biāo)尺是對(duì)數(shù)標(biāo)尺，刻度不均勻）。C1λAλ測(cè)量測(cè)量六六 . 具體應(yīng)用具體應(yīng)用1）選擇 顯色反應(yīng)2） 選擇顯色劑3）優(yōu)化顯色反應(yīng)條件4）選擇檢測(cè)波長(zhǎng)5）選擇合適的濃度6）選擇參比溶液7）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線8）樣品測(cè)定吸收曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線55 多組分含量的測(cè)定多組分含量的測(cè)定多組分樣品的吸收曲線有三種情況多組分樣品的吸收曲線有三種情況I. 各組分吸收曲線的 λmax互不干擾在各自的 λmax處 ,按單組分的測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定Aλ1=ελ1 b caAλ2=ελ2 b cb六六 . 具體應(yīng)用具體應(yīng)用56 II. a組分的 λ1處， b組分無(wú)干擾，但 b組 分的測(cè)量 λ2處， a組分有吸收Aλ1=ελ1cab Aλ2=ελ2cab+ελ2cbbIII. 各組分吸收曲線的 λmax互有干擾Aλ1=ελ1cab +ελ1cbbAλ2=ελ2cab +ελ2cbb六六 . 具體應(yīng)用具體應(yīng)用573. 高含量的組分測(cè)定高含量的組分測(cè)定 —— 示差法示差法 ：：普通分光光度法普通分光光度法 : 適宜于測(cè)定微量組分適宜于測(cè)定微量組分示差分光光度法示差分光光度法 :要求要求 :a. 入射光強(qiáng)度較大入射光強(qiáng)度較大b. 參比溶液參比溶液 —— 選用濃度稍低于被測(cè)溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液選用濃度稍低于被測(cè)溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液可用于測(cè)定高含量組分可用于測(cè)定高含量組分六六 . 具體應(yīng)用具體應(yīng)用58原理原理 : 設(shè)被測(cè)液濃度為設(shè)被測(cè)液濃度為 cx ， 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為cs，并，并 cx＞＞
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