吸光光度法ppt課件-免費(fèi)閱讀
【正文】 C1λAλ測量測量六六 . 具體應(yīng)用具體應(yīng)用1）選擇 顯色反應(yīng)2） 選擇顯色劑3）優(yōu)化顯色反應(yīng)條件4）選擇檢測波長5）選擇合適的濃度6）選擇參比溶液7）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線8）樣品測定吸收曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線55 多組分含量的測定多組分含量的測定多組分樣品的吸收曲線有三種情況多組分樣品的吸收曲線有三種情況I. 各組分吸收曲線的 λmax互不干擾在各自的 λmax處 ,按單組分的測定方法進(jìn)行測定Aλ1=ελ1 b caAλ2=ελ2 b cb六六 . 具體應(yīng)用具體應(yīng)用56 II. a組分的 λ1處， b組分無干擾，但 b組 分的測量 λ2處， a組分有吸收Aλ1=ελ1cab Aλ2=ελ2cab+ελ2cbbIII. 各組分吸收曲線的 λmax互有干擾Aλ1=ελ1cab +ελ1cbbAλ2=ελ2cab +ελ2cbb六六 . 具體應(yīng)用具體應(yīng)用573. 高含量的組分測定高含量的組分測定 —— 示差法示差法 ：：普通分光光度法普通分光光度法 : 適宜于測定微量組分適宜于測定微量組分示差分光光度法示差分光光度法 :要求要求 :a. 入射光強(qiáng)度較大入射光強(qiáng)度較大b. 參比溶液參比溶液 —— 選用濃度稍低于被測溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液選用濃度稍低于被測溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液可用于測定高含量組分可用于測定高含量組分六六 . 具體應(yīng)用具體應(yīng)用58原理原理 : 設(shè)被測液濃度為設(shè)被測液濃度為 cx ， 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為cs，并，并 cx＞＞ cs 。l 如圖選 500nm波長測定，靈敏度雖有所下降，卻消除了干擾，提高了測定的準(zhǔn)確度和選擇性。可構(gòu)成多通道并行工作，同時檢測全部波長的信號，然后，對二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到的是時間、光強(qiáng)度和波長的三維譜圖。2)溶液以膠體、乳濁、懸浮狀態(tài)存在時，有反射、散射作用二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理27例例 :(橙色橙色 ) (黃色黃色 )λmax=450nmA總總包括離解、締合、生成新物質(zhì)、形成異構(gòu)體使原物質(zhì)濃度改變吸光度值變化 產(chǎn)生偏離pH ， 平衡平衡 移移 , c. 溶液內(nèi)部的化學(xué)變化溶液內(nèi)部的化學(xué)變化二二 . 吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理28目視比色法目視比色法C1 C 2 C 3 C 4 C 5[Fe(SCN)n]3n配制一組標(biāo)準(zhǔn)濃度系列配制一組標(biāo)準(zhǔn)濃度系列C x三三 . 儀器和方法儀器和方法29分光光度法分光光度法 :儀器儀器 —— 分光光度計分光光度計基本組成：基本組成：光源 單色器 樣品室 顯示器檢測器三三 . 儀器和方法儀器和方法30＊＊ 光源光源 (鎢燈、氫燈、氘燈）鎢燈、氫燈、氘燈）能發(fā)射紫外光區(qū)或可見光譜區(qū)的連續(xù)光譜；足夠的輻射強(qiáng)度、穩(wěn)定性較好、使用壽命較長基本要求基本要求 :常用的光源常用的光源 :可見光區(qū)可見光區(qū) : 鎢燈鎢燈 (輻射波長為輻射波長為 320nm~2500nm)紫外區(qū)紫外區(qū) : 氫燈、氘燈氫燈、氘燈 (輻射波長為輻射波長為 185nm~400nm)三三 . 儀器和方法儀器和方法31＊＊ 單色器單色器作用作用 :將光源發(fā)射的復(fù)合光分解成單色光的光學(xué)系統(tǒng)1. 濾光片濾光片 光電比色計的單色器光電比色計的單色器選擇的原則 ： 濾光片 最易通過的光是 有色溶液 最易吸收的光組成： 由有色玻璃制成作用： 只允許和它 顏色相同 的光通過，得 到的是近似的單色光互補(bǔ)色（濾光片、棱鏡或光柵）（濾光片、棱鏡或光柵）三三 . 儀器和方法儀器和方法32組成組成 :入射狹縫：入射狹縫： 光源的光由此進(jìn)入單色器準(zhǔn)光裝置：準(zhǔn)光裝置： 透鏡或反射鏡透鏡或反射鏡 使入射光成為平行光束聚焦裝置：聚焦裝置： 將分光后的單色光聚焦至出射狹縫 （（ 透鏡或凹面鏡）透鏡或凹面鏡）色散元件：色散元件： 將復(fù)合光分解成單色光2. 棱鏡或光柵棱鏡或光柵分光光度計的單色器分光光度計的單色器由 棱鏡棱鏡 或 光柵光柵 等色散元件及狹縫和透鏡等組成三三 . 儀器和方法儀器和方法33入射狹縫：光源的光由此進(jìn)入單色器準(zhǔn)光裝置： 透鏡或反射鏡 使入射光成為平行光束聚焦裝置： (透鏡或凹面鏡） 將分光后的單色光聚焦至出射狹縫色散元件：將復(fù)合光分解成單色光34光柵和棱鏡分光原理光柵分光棱鏡分光平面玻璃或金屬片：刻有大量平行等寬、等距狹縫 (刻線 )光柵的每條刻線都產(chǎn)生衍射作用，衍射光互相干涉產(chǎn)生干涉條紋。故朗伯 比耳定律 只適用于稀
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