【正文】 ?? （ c） ? ? ? ?樣品的重量堿體積％＝棕櫚酸游離脂肪酸 ?? 商用油脂的取樣和分析 2. 游離脂肪酸的含量通常以酸值表示，而不是以百分比表示。 4. 使用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液進(jìn)行滴定，劇烈搖動(dòng)直到第一縷不變的粉色出現(xiàn)。 100 aFFA 游離脂肪酸； N，當(dāng)量濃度 步驟 1. 稱(chēng)重以前，樣品必須充分混合和完全液化；但是，加熱溫度不能超過(guò)樣品的熔點(diǎn)， 10℃。 50 ～ 177。 3. 氫氧化鈉溶液 — 進(jìn)行了準(zhǔn)確的標(biāo)定。 范圍：適用于所有的未提純植物油和精制植物油、船用照明油和動(dòng)物油脂。將數(shù)據(jù)代入計(jì)算式，得到磷的含量，然后乘以稀釋因子（如果按照文中描述的步驟進(jìn)行，稀釋因子為 10）。 2. 磷含量高的樣品的吸光度可能也會(huì)＞ 。采用安全的方法處理廢棄物和廢液。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，可以使老鼠的肺部和肝部發(fā)生癌變。與水混合時(shí)要特別小心，因?yàn)榉懦龅拇罅繜崃靠梢砸鸨ㄐ缘臑R散。因此應(yīng)妥善保存堿液，以避免上述情況的發(fā)生。穿戴厚的橡皮手套和面罩以避免直接接觸濃堿液。吞食和吸入可以引起中毒，可以引起眼睛和皮膚的極度不適。上述操作溶液中的磷含量分別為 、 、 、 、 、 和 。 13. 按照步驟 1～ 12，配置一個(gè)不含試劑的溶液，油的含量不變。 5℃，稀釋至量瓶滿(mǎn)刻度，然后充分混合（注解 2）。 10. 蓋上塞子，翻轉(zhuǎn)量瓶 3～ 4 次。滴加濃鹽酸 ，直至氧化鋅沉淀剛好被溶解，然后再滴加 2滴。用大約 5mL 熱蒸餾水清洗表面皿內(nèi)側(cè)和坩堝，使用洗滌瓶清洗，細(xì)水流。將坩堝取出，冷卻至室溫。 ，倒入石英 玻璃坩堝。 1mL 該溶液中含有 1mg的磷。用蒸餾水稀釋至 500mL，充分混合，靜置 24 小時(shí)后使用。 6. 硫酸肼－試劑級(jí)別（注解，警告）。 2. 氧化鋅－工業(yè)級(jí)，或試劑級(jí)別。 商用油脂的取樣和分析 11. 分光光度計(jì)－最少能滿(mǎn)足 AOCS Official Method Cc 13c50 的要求，能夠測(cè)量650nm 波長(zhǎng)（入射光）下的吸光度，可重復(fù)性為 ％。 7. 洗滌瓶－容量為 1 升，加熱水使用。 3. 電熱板－變阻控制。 P20～ P21 磷 定義：該方法是在氧化鋅的作用下，將樣品灰化，轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色的磷鉬酸混合物，然后通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定磷，或相應(yīng)磷酸鹽的含量。過(guò)去的經(jīng)驗(yàn)表明，在甘油三酯分解的最后一階段，從炭化轉(zhuǎn)移到霧化時(shí)，樣品會(huì)突然放出大量煙霧，從而使測(cè)定值產(chǎn)生一定的誤差，背景校正器可以解決這一問(wèn)題。 編號(hào)注解 1. 碘值降至 65～ 70 時(shí)， C16和 C18脂肪酸甘油三酯的含量為 10％（重量 /體積）的 MIBK溶液很容易制備。稀釋時(shí)，將酸倒入水中，除非另有說(shuō)明。在空氣中的 TLV是 50ppm。 注解 甲基異丙酮（ MIBK），易燃，容易導(dǎo)致火災(zāi)。 6. 選擇配套的入射燈（表 1）和條件，重復(fù)步驟 3～ 5，對(duì)樣品一一進(jìn)行分析。 （ b） 如果樣品中金屬含量過(guò)低（注解 3），可以成倍地增加樣品注入次數(shù)。平均吸光度作為Y 軸，濃度（μ g）為 X 軸，繪制重要金屬的濃度曲線(xiàn)。 元素 波長(zhǎng)， nm Fe Cu Ni Mn Cr 4. 做出一條至少含有 5 個(gè)點(diǎn)的曲線(xiàn)，記下重要的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的吸光度。打開(kāi)裝置和背景校正器，將空心陰極燈的輸入電流調(diào)到推薦值，將單色儀的波長(zhǎng)設(shè)為推薦值（表 1）。 ，倒入容量為 10mL的量瓶中，用適當(dāng)?shù)娜軇w系【（ a）～（ e）】進(jìn)行稀釋?zhuān)亮科繚M(mǎn)刻度，混合（注解 1）。用 MIBK 稀釋?zhuān)亮科繚M(mǎn)刻度，充分混合。用 MIBK 稀釋?zhuān)亮科繚M(mǎn)刻度，充分混合。至少6 個(gè)月內(nèi)，該標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備溶液的性質(zhì)保持穩(wěn)定。冷卻至室溫。 2C 的溫度下，攪拌，保存。快速稱(chēng)量 的樣品，倒入容量為 25mL 的燒杯中，加入 5mL 的二甲苯和 5mL 的 2乙基己酸，在電熱板上緩慢加熱，不回流，偶爾攪拌，直到樣品溶解。在 20177。 3. 鐵標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備 溶液， 100μ g/mL－ 110℃下，將大約 1個(gè)小時(shí)。將溶液轉(zhuǎn)入到一個(gè)容量為 100mL 的量瓶中，用 5 份 10mL 的 MIBK 溶液沖洗燒杯，洗液倒入量瓶中，稀釋溶液至量瓶滿(mǎn)刻度。至少 6個(gè)月內(nèi)，該標(biāo)準(zhǔn)樣品儲(chǔ)備溶液的性質(zhì)保持穩(wěn)定。冷卻至室溫。 5. 2乙基己胺 — 實(shí)際級(jí)別。 試劑 1. 有機(jī)金屬化合物標(biāo)準(zhǔn)樣品 — （美國(guó)）國(guó)家檢測(cè)研究所（ NIST） Conostan（ Ponca City，OK），或者同類(lèi)試劑。 7. 移液管－帶刻度， 5mL、 10mL 和 20mL。 2. 真空干燥器－內(nèi)有適當(dāng)?shù)男迈r干燥劑（參見(jiàn) AOCS 說(shuō)明書(shū) H 987）。 范圍：該方法可以用來(lái)分析含有痕量金屬（以油溶性加合物 形式存在）的未提純植物油、精制植物油和動(dòng)物脂。 14. 應(yīng)該注意的是，當(dāng)比較不同實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定值時(shí)，要使用表 1中所列出的再現(xiàn)性數(shù)值（ R）。 圖 1 顯示生育酚和生育三烯酚流出順序的色譜圖（參考資料 6） 12. 如果使用熒光檢測(cè)器，而且只有α 生育酚標(biāo)準(zhǔn)樣品，則需要建立生育酚和α 生育酚標(biāo)準(zhǔn)樣品的關(guān)系式。 11. 如果無(wú)法購(gòu)買(mǎi)到這些生育酚標(biāo)準(zhǔn)樣品，可以使用麥胚芽油和豆油的混合物作為樣品，以獲得含有α 、和γ 生育酚的色譜圖。 9. 按照下式計(jì)算分辨率（ R）： ? ? ? ?? ?21 WW RdRdR ??? 式中： 1Rd ＝γ 生育酚的保留距離 2Rd ＝β 生育酚的保留距離 1W ＝ γ 生育酚的峰底寬度 2W ＝β 生育酚的峰底寬度 β 生育酚色譜峰的效率可能是 10， 000 板 /米。 7. 如果 HPLC 柱是新的，或者以前的使用情況不明時(shí)，使用甲醇清洗 10 分鐘，然后用二氯甲烷清洗，接著用正己烷，以大約 1mL/min 的流率對(duì)其清洗，直到使該色譜柱達(dá)到要求的狀態(tài)。例如， 292nm波長(zhǎng)（入射光）下（甲醇流動(dòng)相），α 生育酚的數(shù)值 E 取 76；即波長(zhǎng)為 292nm（入射光）時(shí)， 1μ g/mL 的α 生育酚溶液的吸光度為 。有多家供應(yīng)商可以提供α 生育酚標(biāo)準(zhǔn)樣品。使用正己烷（試劑 5）清洗燒瓶各側(cè)，將物質(zhì)定量地轉(zhuǎn)入容量為 50mL的量瓶中，然后添加正己烷至滿(mǎn)刻度。加入 3g無(wú)水硫酸鈉【注解 2，試劑（ g）】，緩慢攪拌使之溶于水中。劇烈搖動(dòng)漏斗 1分鐘，偶爾放氣減壓。將燒瓶放入溫度為 26℃的水浴中，劇烈搖動(dòng) 10分鐘。 （ f） 鹽酸－ 。 （ b） 乙 醇－絕對(duì) 99％純（見(jiàn)注解 警告）。應(yīng)在通風(fēng)良好的通風(fēng)櫥中使用。吸入和皮膚接觸可以抑止中樞神經(jīng)系統(tǒng)的活動(dòng)。甲醇有毒性，應(yīng)避免眼睛接觸，避免吸入蒸氣。正己烷蒸氣可以引起肺部不適和神經(jīng)中毒。然后將所得的數(shù)值進(jìn)行平均，得到的數(shù) 值不超出表 1 中給出的范圍。 2. 重復(fù)性－使用同一套裝置，在同樣的條件下，同一個(gè)實(shí)驗(yàn)員對(duì)一個(gè)試樣進(jìn)行兩次快速交替的測(cè)定。如果（ xmax－ xmin）＜ r（ r＝重復(fù)性數(shù)值，見(jiàn)表 1），那么 4次結(jié)果的平均值就是最終的結(jié)果。 計(jì)算 1. 樣品中α 生育酚的含量按下式計(jì)算，單位為μ g/g： mA DaC ? ??? 25 商用油脂的取樣和分析 式中： C ＝α 生育酚標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度（ /mL） A ＝α 生育酚標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜峰面積的平均值 a ＝試樣中的α 生育酚的色譜峰面積的平均值 m ＝采用試樣的質(zhì)量 D ＝稀釋因子 例如，將 25mL 試液稀釋至 1： 10，則稀釋因子取為 10 2. 使用從相應(yīng)生育酚 標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜峰中獲得的數(shù)據(jù)，以同樣的方法計(jì)算試樣中的β 、γ和δ 生育酚含量（見(jiàn)注解 12）。如果試液中存在生育三烯酚，并且需確定其數(shù)量，那么要記下其全部色譜峰的面積。 5. 使用 HPLC法測(cè)定試液中的生育酚含量－向分析柱中注入 20μ L 的混合生育酚標(biāo)準(zhǔn)樣品操作溶液，記下生育酚色譜峰的面積。 4. 試液的制備－準(zhǔn)確稱(chēng)量大約 2g準(zhǔn)備好的試樣（見(jiàn)注解 10），倒入容量為 25mL 的量瓶中。 3. 試樣的制備－在使用液態(tài)實(shí)驗(yàn)室樣品的情況下，應(yīng)通過(guò)均化作用制備試樣，但應(yīng)避免過(guò)濾。也就是，幾乎接近全部分離（注解 9）。 2. 工作參數(shù)的最優(yōu)化 — 如果需要（見(jiàn)注解 7），使分析柱（裝置 2）達(dá)到符合要求的情況。 296nm β 生育酚＝ 298nm γ 生育酚＝ 298nm δ 生育酚＝ (c) 混合生育酚標(biāo)準(zhǔn)樣品操作溶液 — 取適量的生育酚標(biāo)準(zhǔn) 樣品儲(chǔ)備溶液進(jìn)行混合，得到混合生育酚標(biāo)準(zhǔn)樣品操作溶液。向燒瓶中注入 10mL的甲醇（試劑 2），打旋，促使生育酚溶解。吸取 10mL 的溶液，注入到棕色圓底玻璃燒瓶中。 6. HPLC 的流動(dòng)相 — 正己烷中添加異丙醇（體積比， ： ）。 2. 甲醇（見(jiàn)注解，警告）。 3. 紫外線(xiàn)（ UV）分光儀 — 在設(shè)定波長(zhǎng)下，可以進(jìn)行吸光度的絕對(duì)測(cè)量。 裝置 注解－所有玻璃器皿應(yīng)該具有低的光化活度 1. HPLC 裝置－包括一個(gè)高壓泵，進(jìn)樣裝置、檢測(cè)器和圖表記錄儀（或記錄積分儀）。 范圍：油脂（或從含有生育酚酯的加工產(chǎn)物中獲得的不皂化物）溶于有機(jī)溶劑中，直接使用高效液相層析法分離出生育酚個(gè)體和生育三烯酚個(gè)體 。用水重復(fù)清洗萃取混合物，直到 洗出液呈中性為止，這樣就可以除去生成的脂肪酸鹽。例如，高能脂（用于喂養(yǎng)動(dòng)物）、原料油、妥爾油、和渣滓油等，與經(jīng)過(guò)了提純、漂白和除臭的油相比，它們被認(rèn)為會(huì)有一個(gè)較高的游離脂肪酸校正值。萃取物中不能含有不皂化物。如果使用分液漏斗，將下層的含水萃取層排入到另一個(gè)分液漏斗中，石油醚萃取層仍保留在第一個(gè)分液漏斗中。避免靜電。使用強(qiáng)腐蝕性的藥品時(shí)，例如氫氧化鉀，通常是向水中加入物質(zhì)的小顆粒，禁止相反的操作。在通風(fēng)櫥中加熱，或蒸發(fā)該溶液。 計(jì)算 1. 不皂化物 ? ?? ? 100g% ???? 樣品重量 CBA 式中： A ＝殘余物的重量 B ＝脂肪酸的重量 C ＝空白測(cè)定中試劑的重量 商用油脂的取樣和分析 精度 1. 無(wú)法得到以 AOCS（美國(guó)石油化學(xué)家協(xié)會(huì)） Official Method Ca 6a40 實(shí)際聯(lián)合研究為基礎(chǔ)的統(tǒng)計(jì)數(shù)字。 在計(jì)算不皂化物百分含量的式中，用“ B”代表通過(guò)該滴定得出的脂肪酸重量（注解 3）。在計(jì)算式中，以“ A”代表該數(shù)值。 7. 將石油醚萃取液轉(zhuǎn)入一個(gè)配衡燒杯中。每次萃取結(jié)束后，將含水乙醇層吸出。 4. 石油醚萃取物在容量為 500mL 的分液漏斗中混合。將筒中物質(zhì)冷卻至室溫（ 20～ 25℃），然后加入 50mL 石油醚。完全皂化是十分必要的。 步驟 1. 準(zhǔn)確稱(chēng)量 5g177。 3. 石油醚 — 參見(jiàn) AOCS 的說(shuō) 明書(shū) H2－ 41（注解，警告）。 4. 玻璃虹吸管 — 參見(jiàn)步驟 3 和注解 1。 裝置 1. 萃取筒 — 帶有刻度、玻璃塞。這些化合物包括：高脂肪醇、固 醇、顏料和碳?xì)浠衔铩Ｈ欢?，它可能無(wú)法溶解β 、γ 和δ 生育酚。在最后一次過(guò)濾時(shí)，將產(chǎn)品置于漏斗中干燥 1～ 2 小時(shí)。將粗制品融解在 800mL 乙醇中（需加熱）。加入 30L氯化硬脂酰（純度為 98＋％， Eastman化學(xué)藥品 No P2227，或同類(lèi)藥劑）。 編號(hào)注解 1. 誤差源 — 加熱失敗和充分混合樣品會(huì)產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)果。該藥品不易燃，但長(zhǎng)時(shí)間接觸火焰，或高溫會(huì)引起藥品燃燒。 三氯甲烷是一種已知 的致癌物質(zhì)。不慎吞食和吸入時(shí)可以造成中毒。 4. 表 1 中總結(jié)了聯(lián)合試驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)數(shù)字 注解 警告 Sylon BFT 是一種強(qiáng)硅烷化試劑，含有 1％的三甲基色氨酸和 99％的 2－三甲硅烷基三氟乙酰胺，在通風(fēng)良好的通風(fēng)櫥中使用。所有的試驗(yàn)由一個(gè)試 驗(yàn)員使用同一套裝置進(jìn)行。 精度 1. 準(zhǔn)確度 — 通過(guò)向 6 個(gè)除臭器餾出物樣品中摻加濃度已知的（ 12～ 72mg）α 生育酚來(lái)測(cè)定該試驗(yàn)的準(zhǔn)確度。充分混合。準(zhǔn)確稱(chēng)量 180～ 250mg的樣品，放入到容量為 50mL 的錐形燒瓶中。圖 1 是一個(gè)典型的毛細(xì)管色譜圖；圖 2， 3 是填充塔色譜圖。 (c) 將燒瓶輕微冷卻。 (g) 標(biāo)繪器記錄紙速為 1cm/min。 (c) 氦載氣流速近似為 2cc/分。β 、γ 和δ 生育酚的響應(yīng)因數(shù)同α 生育酚取同一個(gè)數(shù)值（注解 1）。商用油脂的取樣和分析 P01～ P04 除臭器餾出物中的總生育酚含量 定義：本方法使用毛細(xì)管氣相色譜儀測(cè)量除臭器餾出物中的總生育酚含量（參考資料 1） 范圍：適用于除臭器餾出物。十七烷硬脂酸鹽是內(nèi)標(biāo)物，α 生育酚是基準(zhǔn)物。 (b) 恒溫箱溫度程序， 140～ 300℃： 10c/min，該過(guò)程需時(shí) 6 分鐘； 300～ 320 攝氏度：5c/min，整個(gè)過(guò)程需時(shí) 10 分鐘。 (f) 檢測(cè)器溫度為 345℃。加熱 10 分鐘左右，至