【正文】 ?? （ c） ? ? ? ?樣品的重量堿體積％＝棕櫚酸游離脂肪酸 ?? 商用油脂的取樣和分析 2. 游離脂肪酸的含量通常以酸值表示，而不是以百分比表示。 4. 使用標準氫氧化鈉溶液進行滴定，劇烈搖動直到第一縷不變的粉色出現(xiàn)。 100 aFFA 游離脂肪酸； N，當量濃度 步驟 1. 稱重以前，樣品必須充分混合和完全液化；但是，加熱溫度不能超過樣品的熔點， 10℃。 50 ～ 177。 3. 氫氧化鈉溶液 — 進行了準確的標定。 范圍：適用于所有的未提純植物油和精制植物油、船用照明油和動物油脂。將數(shù)據(jù)代入計算式，得到磷的含量，然后乘以稀釋因子（如果按照文中描述的步驟進行，稀釋因子為 10）。 2. 磷含量高的樣品的吸光度可能也會＞ 。采用安全的方法處理廢棄物和廢液。動物實驗中，可以使老鼠的肺部和肝部發(fā)生癌變。與水混合時要特別小心，因為放出的大量熱量可以引起爆炸性的濺散。因此應妥善保存堿液，以避免上述情況的發(fā)生。穿戴厚的橡皮手套和面罩以避免直接接觸濃堿液。吞食和吸入可以引起中毒，可以引起眼睛和皮膚的極度不適。上述操作溶液中的磷含量分別為 、 、 、 、 、 和 。 13. 按照步驟 1～ 12，配置一個不含試劑的溶液，油的含量不變。 5℃，稀釋至量瓶滿刻度，然后充分混合（注解 2）。 10. 蓋上塞子，翻轉量瓶 3～ 4 次。滴加濃鹽酸 ，直至氧化鋅沉淀剛好被溶解，然后再滴加 2滴。用大約 5mL 熱蒸餾水清洗表面皿內側和坩堝，使用洗滌瓶清洗，細水流。將坩堝取出，冷卻至室溫。 ，倒入石英 玻璃坩堝。 1mL 該溶液中含有 1mg的磷。用蒸餾水稀釋至 500mL，充分混合，靜置 24 小時后使用。 6. 硫酸肼－試劑級別（注解，警告）。 2. 氧化鋅－工業(yè)級，或試劑級別。 商用油脂的取樣和分析 11. 分光光度計－最少能滿足 AOCS Official Method Cc 13c50 的要求，能夠測量650nm 波長（入射光）下的吸光度，可重復性為 ％。 7. 洗滌瓶－容量為 1 升，加熱水使用。 3. 電熱板－變阻控制。 P20～ P21 磷 定義：該方法是在氧化鋅的作用下，將樣品灰化，轉變?yōu)樗{色的磷鉬酸混合物，然后通過分光光度計測定磷，或相應磷酸鹽的含量。過去的經(jīng)驗表明，在甘油三酯分解的最后一階段，從炭化轉移到霧化時，樣品會突然放出大量煙霧，從而使測定值產(chǎn)生一定的誤差，背景校正器可以解決這一問題。 編號注解 1. 碘值降至 65～ 70 時， C16和 C18脂肪酸甘油三酯的含量為 10％（重量 /體積）的 MIBK溶液很容易制備。稀釋時，將酸倒入水中，除非另有說明。在空氣中的 TLV是 50ppm。 注解 甲基異丙酮（ MIBK），易燃，容易導致火災。 6. 選擇配套的入射燈（表 1）和條件，重復步驟 3～ 5，對樣品一一進行分析。 （ b） 如果樣品中金屬含量過低（注解 3），可以成倍地增加樣品注入次數(shù)。平均吸光度作為Y 軸，濃度（μ g）為 X 軸，繪制重要金屬的濃度曲線。 元素 波長， nm Fe Cu Ni Mn Cr 4. 做出一條至少含有 5 個點的曲線，記下重要的標準曲線的吸光度。打開裝置和背景校正器，將空心陰極燈的輸入電流調到推薦值，將單色儀的波長設為推薦值（表 1）。 ，倒入容量為 10mL的量瓶中，用適當?shù)娜軇w系【（ a）～（ e）】進行稀釋，至量瓶滿刻度，混合（注解 1）。用 MIBK 稀釋，至量瓶滿刻度，充分混合。用 MIBK 稀釋，至量瓶滿刻度，充分混合。至少6 個月內，該標準樣品儲備溶液的性質保持穩(wěn)定。冷卻至室溫。 2C 的溫度下，攪拌，保存。快速稱量 的樣品，倒入容量為 25mL 的燒杯中，加入 5mL 的二甲苯和 5mL 的 2乙基己酸，在電熱板上緩慢加熱，不回流，偶爾攪拌，直到樣品溶解。在 20177。 3. 鐵標準樣品儲備 溶液， 100μ g/mL－ 110℃下，將大約 1個小時。將溶液轉入到一個容量為 100mL 的量瓶中，用 5 份 10mL 的 MIBK 溶液沖洗燒杯，洗液倒入量瓶中，稀釋溶液至量瓶滿刻度。至少 6個月內，該標準樣品儲備溶液的性質保持穩(wěn)定。冷卻至室溫。 5. 2乙基己胺 — 實際級別。 試劑 1. 有機金屬化合物標準樣品 — （美國）國家檢測研究所（ NIST） Conostan（ Ponca City，OK），或者同類試劑。 7. 移液管－帶刻度， 5mL、 10mL 和 20mL。 2. 真空干燥器－內有適當?shù)男迈r干燥劑（參見 AOCS 說明書 H 987）。 范圍：該方法可以用來分析含有痕量金屬（以油溶性加合物 形式存在）的未提純植物油、精制植物油和動物脂。 14. 應該注意的是，當比較不同實驗室的測定值時，要使用表 1中所列出的再現(xiàn)性數(shù)值（ R）。 圖 1 顯示生育酚和生育三烯酚流出順序的色譜圖（參考資料 6） 12. 如果使用熒光檢測器，而且只有α 生育酚標準樣品，則需要建立生育酚和α 生育酚標準樣品的關系式。 11. 如果無法購買到這些生育酚標準樣品，可以使用麥胚芽油和豆油的混合物作為樣品，以獲得含有α 、和γ 生育酚的色譜圖。 9. 按照下式計算分辨率（ R）： ? ? ? ?? ?21 WW RdRdR ??? 式中： 1Rd ＝γ 生育酚的保留距離 2Rd ＝β 生育酚的保留距離 1W ＝ γ 生育酚的峰底寬度 2W ＝β 生育酚的峰底寬度 β 生育酚色譜峰的效率可能是 10， 000 板 /米。 7. 如果 HPLC 柱是新的，或者以前的使用情況不明時，使用甲醇清洗 10 分鐘，然后用二氯甲烷清洗，接著用正己烷，以大約 1mL/min 的流率對其清洗，直到使該色譜柱達到要求的狀態(tài)。例如， 292nm波長（入射光）下（甲醇流動相），α 生育酚的數(shù)值 E 取 76；即波長為 292nm（入射光）時， 1μ g/mL 的α 生育酚溶液的吸光度為 。有多家供應商可以提供α 生育酚標準樣品。使用正己烷（試劑 5）清洗燒瓶各側，將物質定量地轉入容量為 50mL的量瓶中，然后添加正己烷至滿刻度。加入 3g無水硫酸鈉【注解 2，試劑（ g）】，緩慢攪拌使之溶于水中。劇烈搖動漏斗 1分鐘，偶爾放氣減壓。將燒瓶放入溫度為 26℃的水浴中，劇烈搖動 10分鐘。 （ f） 鹽酸－ 。 （ b） 乙 醇－絕對 99％純（見注解 警告）。應在通風良好的通風櫥中使用。吸入和皮膚接觸可以抑止中樞神經(jīng)系統(tǒng)的活動。甲醇有毒性，應避免眼睛接觸，避免吸入蒸氣。正己烷蒸氣可以引起肺部不適和神經(jīng)中毒。然后將所得的數(shù)值進行平均，得到的數(shù) 值不超出表 1 中給出的范圍。 2. 重復性－使用同一套裝置，在同樣的條件下，同一個實驗員對一個試樣進行兩次快速交替的測定。如果（ xmax－ xmin）＜ r（ r＝重復性數(shù)值，見表 1），那么 4次結果的平均值就是最終的結果。 計算 1. 樣品中α 生育酚的含量按下式計算，單位為μ g/g： mA DaC ? ??? 25 商用油脂的取樣和分析 式中： C ＝α 生育酚標準樣品的濃度（ /mL） A ＝α 生育酚標準樣品的色譜峰面積的平均值 a ＝試樣中的α 生育酚的色譜峰面積的平均值 m ＝采用試樣的質量 D ＝稀釋因子 例如，將 25mL 試液稀釋至 1： 10，則稀釋因子取為 10 2. 使用從相應生育酚 標準樣品色譜峰中獲得的數(shù)據(jù)，以同樣的方法計算試樣中的β 、γ和δ 生育酚含量（見注解 12）。如果試液中存在生育三烯酚，并且需確定其數(shù)量，那么要記下其全部色譜峰的面積。 5. 使用 HPLC法測定試液中的生育酚含量－向分析柱中注入 20μ L 的混合生育酚標準樣品操作溶液，記下生育酚色譜峰的面積。 4. 試液的制備－準確稱量大約 2g準備好的試樣（見注解 10），倒入容量為 25mL 的量瓶中。 3. 試樣的制備－在使用液態(tài)實驗室樣品的情況下，應通過均化作用制備試樣，但應避免過濾。也就是，幾乎接近全部分離（注解 9）。 2. 工作參數(shù)的最優(yōu)化 — 如果需要（見注解 7），使分析柱（裝置 2）達到符合要求的情況。 296nm β 生育酚＝ 298nm γ 生育酚＝ 298nm δ 生育酚＝ (c) 混合生育酚標準樣品操作溶液 — 取適量的生育酚標準 樣品儲備溶液進行混合，得到混合生育酚標準樣品操作溶液。向燒瓶中注入 10mL的甲醇（試劑 2），打旋，促使生育酚溶解。吸取 10mL 的溶液，注入到棕色圓底玻璃燒瓶中。 6. HPLC 的流動相 — 正己烷中添加異丙醇（體積比， ： ）。 2. 甲醇（見注解，警告）。 3. 紫外線（ UV）分光儀 — 在設定波長下，可以進行吸光度的絕對測量。 裝置 注解－所有玻璃器皿應該具有低的光化活度 1. HPLC 裝置－包括一個高壓泵，進樣裝置、檢測器和圖表記錄儀（或記錄積分儀）。 范圍：油脂（或從含有生育酚酯的加工產(chǎn)物中獲得的不皂化物）溶于有機溶劑中，直接使用高效液相層析法分離出生育酚個體和生育三烯酚個體 。用水重復清洗萃取混合物，直到 洗出液呈中性為止，這樣就可以除去生成的脂肪酸鹽。例如，高能脂（用于喂養(yǎng)動物）、原料油、妥爾油、和渣滓油等，與經(jīng)過了提純、漂白和除臭的油相比，它們被認為會有一個較高的游離脂肪酸校正值。萃取物中不能含有不皂化物。如果使用分液漏斗，將下層的含水萃取層排入到另一個分液漏斗中，石油醚萃取層仍保留在第一個分液漏斗中。避免靜電。使用強腐蝕性的藥品時，例如氫氧化鉀，通常是向水中加入物質的小顆粒，禁止相反的操作。在通風櫥中加熱，或蒸發(fā)該溶液。 計算 1. 不皂化物 ? ?? ? 100g% ???? 樣品重量 CBA 式中： A ＝殘余物的重量 B ＝脂肪酸的重量 C ＝空白測定中試劑的重量 商用油脂的取樣和分析 精度 1. 無法得到以 AOCS（美國石油化學家協(xié)會） Official Method Ca 6a40 實際聯(lián)合研究為基礎的統(tǒng)計數(shù)字。 在計算不皂化物百分含量的式中，用“ B”代表通過該滴定得出的脂肪酸重量（注解 3）。在計算式中，以“ A”代表該數(shù)值。 7. 將石油醚萃取液轉入一個配衡燒杯中。每次萃取結束后，將含水乙醇層吸出。 4. 石油醚萃取物在容量為 500mL 的分液漏斗中混合。將筒中物質冷卻至室溫（ 20～ 25℃），然后加入 50mL 石油醚。完全皂化是十分必要的。 步驟 1. 準確稱量 5g177。 3. 石油醚 — 參見 AOCS 的說 明書 H2－ 41（注解，警告）。 4. 玻璃虹吸管 — 參見步驟 3 和注解 1。 裝置 1. 萃取筒 — 帶有刻度、玻璃塞。這些化合物包括：高脂肪醇、固 醇、顏料和碳氫化合物。然而，它可能無法溶解β 、γ 和δ 生育酚。在最后一次過濾時，將產(chǎn)品置于漏斗中干燥 1～ 2 小時。將粗制品融解在 800mL 乙醇中（需加熱）。加入 30L氯化硬脂酰（純度為 98＋％， Eastman化學藥品 No P2227，或同類藥劑）。 編號注解 1. 誤差源 — 加熱失敗和充分混合樣品會產(chǎn)生錯誤的結果。該藥品不易燃，但長時間接觸火焰，或高溫會引起藥品燃燒。 三氯甲烷是一種已知 的致癌物質。不慎吞食和吸入時可以造成中毒。 4. 表 1 中總結了聯(lián)合試驗的統(tǒng)計數(shù)字 注解 警告 Sylon BFT 是一種強硅烷化試劑，含有 1％的三甲基色氨酸和 99％的 2－三甲硅烷基三氟乙酰胺，在通風良好的通風櫥中使用。所有的試驗由一個試 驗員使用同一套裝置進行。 精度 1. 準確度 — 通過向 6 個除臭器餾出物樣品中摻加濃度已知的（ 12～ 72mg）α 生育酚來測定該試驗的準確度。充分混合。準確稱量 180～ 250mg的樣品，放入到容量為 50mL 的錐形燒瓶中。圖 1 是一個典型的毛細管色譜圖；圖 2， 3 是填充塔色譜圖。 (c) 將燒瓶輕微冷卻。 (g) 標繪器記錄紙速為 1cm/min。 (c) 氦載氣流速近似為 2cc/分。β 、γ 和δ 生育酚的響應因數(shù)同α 生育酚取同一個數(shù)值（注解 1）。商用油脂的取樣和分析 P01～ P04 除臭器餾出物中的總生育酚含量 定義：本方法使用毛細管氣相色譜儀測量除臭器餾出物中的總生育酚含量（參考資料 1） 范圍：適用于除臭器餾出物。十七烷硬脂酸鹽是內標物，α 生育酚是基準物。 (b) 恒溫箱溫度程序， 140～ 300℃： 10c/min，該過程需時 6 分鐘； 300～ 320 攝氏度：5c/min，整個過程需時 10 分鐘。 (f) 檢測器溫度為 345℃。加熱 10 分鐘左右，至