馬鈴薯m病毒重組cp抗血清的制備畢業(yè)論文-全文預(yù)覽
【正文】 0mL 冰醋酸 100ml PBS 配制： KH2PO4 Na2HPO4 NaCl 8g KCl 加去離子水 800mL，攪拌溶解，加入濃鹽酸調(diào) pH 至 ，最后定容到 1L。 5 1 材料與方法 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)菌株 重組菌 BL21(pET22bPVM)由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建并保存。 本研究的具體的研究內(nèi)容是： 1）誘導(dǎo)重組菌 BL21(pET22bMCP)中 PVMCP基因的表達(dá)。但目前未見馬鈴薯重組 CP抗血清（抗體）用于大量樣品 ELISA檢測(cè)的報(bào)道，也未見重組 CP多克隆抗體用于組裝 ELISA檢測(cè)試劑盒的報(bào)道，相關(guān)的研究有待深入。 由于病毒粒子制備的困難，導(dǎo)致國產(chǎn)馬鈴薯病毒抗血清非常缺乏，明顯影響了其應(yīng)用。在經(jīng)典的方法中，馬鈴薯病毒抗血清制備的抗原是提純病毒粒子。 ELISA 用于檢測(cè)馬鈴薯病毒始于 Caspe對(duì)馬鈴薯卷葉病毒 (PLRV)的檢測(cè)，認(rèn)為用 ELISA 技術(shù)進(jìn)行 PLRV 的常規(guī)鑒定是可行的 [7]。 生產(chǎn)上適合于對(duì)大量樣品進(jìn)行的檢測(cè)的主要方法是酶聯(lián)免疫吸附（ ELISA）法。 植物病毒檢測(cè)方法可以歸納為三大類：生物實(shí)驗(yàn)法，基于核酸的分子檢測(cè)方法及免疫學(xué)（血清學(xué)）方法 [6]。 目前為止，防治馬鈴薯病毒，減少其危害的最有效途徑是使用無毒種薯。 馬鈴薯 M病毒 ( Potato virus M, PVM )是香石竹潛隱病毒屬（ Carlavirus）成員，它的基因組為正單鏈 RNA病毒 [4]。另外，采用常規(guī)的雜交育種方法改良馬鈴薯品種效率低，過程復(fù)雜而且所花費(fèi)的時(shí)間很長。 導(dǎo)致這種局面的重要原因之一就是病毒積累引起的種薯退化，這在很大程度上限制了馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展 [1]。 rebinant CP。 本研究利用重組 CP 制備出 了 PVM 高 滴度 的抗血清，為進(jìn)行 PVM 的 ELISA 檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)也為 PVM 的ELISA 試劑盒的組裝與應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。 青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 題 目： 馬鈴薯 M 病毒重組 CP抗血清的制備 姓 名： 學(xué) 院： 生 命 科 學(xué) 學(xué) 院 專 業(yè)： 生 物 技 術(shù) 班 級(jí)： 2020 級(jí) 3 班 學(xué) 號(hào)： 20203581 指導(dǎo)教師： 郭 寶 太（教授） 完成時(shí)間 ： 2020 年 6 月 15 日 目錄 摘要 ..................................................... 1 Abstract. ................................................. 2 引言 ..................................................... 3 1 材料與方法 .............................................. 5 實(shí)驗(yàn)材料 ................................................................................................................. 5 實(shí)驗(yàn)菌株 ............................................................................................................... 5 主要試劑 與 儀器 ................................................................................................... 5 培養(yǎng)基 .................................................................................................................. 5 主要試劑配 方 ....................................................................................................... 5 方法 .......................................................................................................................... 8 PVMCP 基因原核表達(dá)的誘導(dǎo)與鑒定 ............................................................... 8 菌體總蛋白的提取和包涵體的溶解 ................................................................... 8 PVM 重組 CP 的純化 .......................................................................................... 9 純化蛋白的 SDSPAGE 檢測(cè) ............................................................................. 9 蛋白的透析、濃縮與定量 ................................................................................... 9 PVM 重組 CP 抗血清的制備 .............................................................................. 9 PVM 的 ELISA 測(cè)定 .......................................................................................... 10 2 結(jié)果與分析 ............................................. 10 目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)與純化 ................................................................................ 10 蛋白的透析、濃縮與定量 .................................................................................... 11 抗血清 效價(jià) 的測(cè)定 ............................................................................................... 12 PVM 的 ELISA 測(cè)定 ..............................................................
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