【正文】 , 建立了免疫熒光檢測技術 ,但該方法需昂貴設備 ,結果易受主觀影響 ,難以在常規(guī)工作中應用。禽流感的臨診癥狀變化很大 ,臨床診斷常難以定性 ,必須進行實驗室病原學、血清學和分子生物學診斷。臨床資料顯示：戊肝多見于中老年，有 % ALT 先恢復正常，爾后黃疸消退；甲肝以青壯年多見，有 %患者黃疸先消退，爾后谷丙轉氨酶 (ALT)恢復正 常。 （摘自：中華醫(yī)學檢驗雜志 2020年 7月第 24卷第 4期） 盧龍縣戊性肝炎流行特征調查 蔡芳 為了解本地區(qū)戊型肝炎 (HE)流行特征， 1994年 5月至 1995年 4月對 1 57例散發(fā)性肝炎病人和 57例急性暴發(fā)流行的肝炎病人進行戊性肝炎的病原和流行病學調查。而酶聯免疫法采用酶作為標記物，通過 顯色強度反映待測物質的濃度，由于許多因素影響酶和底物的活性，因而試劑的穩(wěn)定性、靈敏度略顯不足。電化學發(fā)光采用磁性微珠包被技術，由于磁珠體積小，可以吸附更多的抗原或抗體，同時磁珠的核心是鐵，在磁場中很快下沉，因此容易進行洗滌和固相載體分離。見表 討 論： 電化學發(fā)光免疫法檢測結果的穩(wěn)定性、靈敏度、精密度均優(yōu)于酶聯免疫法。 結 果： 線性：電化學發(fā)光法在 ，酶聯法在，可見電化學發(fā)光法檢測范圍更寬，更能充分滿足臨床要求。為進一步了解電化學發(fā)光免疫法的特點，本文應用電化學發(fā)光免疫法與酶聯免疫法對比檢測 165 份臨床血清標本的 AFP含量， 對數據進行統(tǒng)計分析和比較。在本報道所列舉的6例血清中 ,有 3例 HBeAg假陽性 ,而另 2例 HBsAg假陰性 ,說明體內仍有 HBV復制。 討論 ： 乙型肝 炎是危害人類健康最嚴重的傳染病之一 ,而我國乙肝患者眾多 ,預防和治療負擔都很重 ,怎樣才能盡早盡快地發(fā)現 HBV感染或攜帶者 ,是廣大臨床實驗工作者應予關心的問題。由于包被試劑的純度及工藝流程等的影響 ,試劑盒本身允許有一定的假陽性 (1%～ 2%)存在 ,導致實驗有誤差。在正常狀況下 ,HBeAg的產生晚于 HBsAg而消失較早。經檢測 ,在這 6例血清中 ,有 2例 RF陽性。 分析： 筆者通過查閱文獻 ,及時對 6例患者的臨床資料綜合分析 ,認為以下因素可能是導致這一現象的主要原因 : 檢測方法不夠靈敏 ,HBV的檢測方法眾多 ,而近年來的臨床實驗室較普遍地采用 ELISA法 ,該方法要求血清中必須含一定量的 病毒顆粒 ,才可能顯示陽性結果 ,其靈敏度與 RIA相比 ,僅是 1/20,而現代發(fā)展起來的分子生物學方法 ,對病毒的敏感性更是提高了數百倍。 HBeAg陽性的臨床意義： 作為急性乙型肝炎輔助診斷和預防的重要指標 。而我們在用 ELISA法檢測 HBV五項血清學標記物時 ,發(fā)現 6例 HBsAg陰性而 HBeAg陽性的血清?？迫A試劑。但該方法簡便 ,不需特殊設備 ,實驗耗時較短；成本較低 ,可有效降低患者的經濟負擔 ,減輕肉體痛苦 ,三份不同標本用同一載體 (GIFA紙片 )一次檢測即可得出 3種肝炎病毒的感 染狀況。 方法： 采用膠體金作為免疫示蹤物 ,標記羊抗人 IgG單克隆抗體 ,將相應的病毒抗原 HAVAg、HBcAg及 HCVAg包被在硝酸纖維素薄膜表面 ,標本中所含抗體與相應的抗原結合后 ,加入金標記抗體 ,即可在薄膜表面形成肉眼可見的紅色斑點。 假如可以排除動物較后期感染慢病毒和排除不同種系在一定的時間內交叉感染，免疫缺陷病毒與靈長目長期協同演化的設想是有意義的，除了在各猿類種系演化的假說之外，可以肯定免１７ 疫缺陷病毒也有一個長期演化過程，否則我們不可能今日在羊、馬和貓也找到免疫缺陷病毒，至于如何傳播給人類的，從譜系分析尚不能得出解釋。迄今僅在黑猩猩中發(fā)現一種免疫缺陷病毒，而亞洲猿猴、馬來猩猩、長臂猿和獼猴則無，經對大猩猩調查，也末得出有免疫缺陷病毒感染 的最后結論。目前所建立的試驗，用引物可識別 HIV— 1的 A至 F亞型，有時也可顯示與 HIV— 2核酸的共同反應性，一般 HIV— O核酸不能用 PCR法檢出，因此， PCR對 HIV— O不能識別，反之，如用特異性引物，可特異的擴增出 HIVO核酸片段，作出診斷，作 HIV— O PCR推薦選用 Cam5和 Cam3引物，可取得很好的結果?？?HIV— O與 B亞型的反應性有的極差，可用二種方法，１６ 一是再與 HIV— O作免疫印跡試驗，其 優(yōu)點是抗原具有同一性。對診斷更為重要的是那些未識別出來的含抗 HIV— O血清，按抗原夾心法建立起的試劑，對抗 HIV— O識別 甚差，原則上必須有兩個位點，才能顯示所要求的反應性。當用原病毒材料制備試劑盒時，交叉反應特別高。在歐洲迄今很少報道 HIV— O病例，病人多與中非有關。 流行病學：加蓬的初步血清學調查報告其流行率為 3％，喀麥隆的 HIV感染中占 5％。其次，間接法采用稀釋血清加樣，降低了樣品的 HTLV特異性抗體濃度，而夾心法采用原 (或半 )倍血清加樣，提高了檢出率，增大了靈敏度。結果發(fā)現全部試劑的敏感度均可達到 100%，但 3種間接法試劑均出現了多份假陽性，陽性預測值僅在 30%左右，而北京的雙抗原夾 心法試劑則未發(fā)現假陽性。 表 1 四種 ELISA試劑盒檢測抗 HTLV結果比較 北京 上海 Genelabs UBI ＋ － 合計 ＋ － 合計 ＋ － 合計 ＋ 4 0 4 4 0 4 4 0 4 １４ － 11 782 793 4 789 793 5 788 793 合計 15 782 797 8 789 797 9 788 797 24份 ELISA抗 HTLV陽性的標本經 Western blot（ WB）確證， 4份共同陽性的標本為抗 HTLVⅠ陽性，蛋白印跡帶型表現為： 2條 ENV帶（ GD21和 rgp462Ⅰ）及 GAG帶 (p19和 /或 p24)陽性，其它20份標本都無 HTLV特異反應帶出現。其中只有 4份標本四種試劑的檢測結果都為陽性，除北京試劑外，其它三種間接酶免法試劑各出現 4份、 5份、 11份互不相同的陽性標本。 抗體確證試驗 以 Genelabs公司的 HTLVⅠ /Ⅱ 4 種 ELISA試劑陽性血清的 Western blot（ WB）確證。因此，在我國獻 血者中開展 HTLV感染的篩查已成為一個迫切需要認真考慮的問題，其中尤以篩查試劑的選擇最為重要。 解決方法：對現有的標記系統(tǒng)，包被系統(tǒng)以 及緩沖系統(tǒng)進行調整。 綜上述， H5禽流感病毒的檢測方法各有利弊。其敏感度同病毒的分離鑒定相當，有時高于用雞胚進行的病毒分離。1984年美國賓西法尼亞州爆發(fā)禽流感時 Skeeles將 IFT首次用于 AIV的檢測。 RTPCR診斷技術經試驗表明，可應用于對所有亞型禽流感感染的早期快速診斷，具有敏感、特異、快速的特點；另外，為特異、快速地檢出可引起高致病力禽流感大爆發(fā)的 H5或 H7亞型禽流感病毒的感染，通過對比禽流感病毒血凝素基因保守序列，設計了特異性引物 ,建立了對臨床病料或雞胚接種物中 H5和 H7亞型禽流感病毒進行快速分型檢測 RTPCR診斷技術；此外， H5和 H7亞 型禽流感病毒分子分型診斷技術在特異地檢出 H5或 H7亞型禽流感病毒感染的同 時，還可根據應用特定引物經 RTPCR擴增出的 H5和 H7包括裂解位點在內的 HA基因片段，經測序推導出的氨基酸序列來判斷 H5或 H7亞型禽流感病毒的致１２ 病性高低，在為我國禽流感尤其是高致病力禽流感的防制提供先進、有效的早期快速診斷技術和監(jiān)測手段的同時，也為高致病力禽流感防制 爭取到極為寶貴的快速反應時間。當標本 中不含流感病毒抗體或不是 H5型流感病毒抗體，不會抑制酶標單抗與抗原的反應。當標本中不含流感病毒抗原或不是 H5型流感病毒時，底物不會顯色。 我們開發(fā)了兩種試劑，分別是檢測 H5型的抗原和抗體，可用于禽流感的初篩。不過，世界衛(wèi)生組織警告，如果病毒變異，后果將非常嚴重。 人類對禽流感普遍易感，老年人和兒童都有可能感染禽流感。有研究提示，它在糞便中能夠存活 105天，在羽毛中能存活 18天。 在野外條件下，禽流感病毒常從病禽的鼻腔分泌物和糞便中排出，病毒受到這些有機物的保護極大地增加了抗滅活能力。 Knipe, eds, Raven Press, 1990, ) １０ 禽流感病毒是囊膜病毒，對去污劑等脂溶劑比較敏感。禽流感病毒感染引發(fā)的疾病可能是不明顯的或是溫和的一過性的綜合征，甚至是 100%發(fā)病率和 /或死亡率的疾病。脂質位于病毒的膜內，大部分為磷脂，還有少量的膽固醇和糖脂。 禽流感病毒一般為球形，直徑為 80～ 120納米，但也常有同樣直徑的絲狀形態(tài)，長短不一。高致病性禽流感因其傳播快、危害大，被世界動物衛(wèi)生組織（ OIE）列為 A 類疾病，我國將其列為一類動物疫病 一、 病毒結構 禽流感病毒基因組由 8個負鏈的單鏈 RNA片段組成。 (摘自：國外醫(yī)學臨床生物化學與檢驗學分冊 2020年 1月第 25卷第 1期， P7778，高豐厚綜述，鄭佐婭審校。 不可逆變性的 AFP： AFP有天然狀態(tài)、短暫的去折疊狀態(tài)、 MGF狀態(tài)、變性狀態(tài)。蔗糖能夠穩(wěn)定 AFP的天然狀態(tài)。 AFP蛋白的構像穩(wěn)定相對較高，這是由于 AFP含有大量的二硫鍵，同時天然配體也加強了 AFP 的穩(wěn)定性。 只有充分了解其結構，才能合理解釋其功能并指導我們的實際工作。 AFP蛋白結構非常復雜 ,功能極其多樣。它不是自我作古、數典忘祖的、因而也不是爆炸式的罵倒一切的與充滿敵意的、而是尊重歷史、尊重前賢、尊重不同的學問與思路，接受一切合理的新舊成果與對同行對大眾充滿友善的。作為學生，應該是日有長進、為學日益的。我把人生當作一個學習的過程，它不是空虛的頹廢的幻滅的無意義的，而是有為的有關注有興趣有成就有意義的。它絕對不是獨斷與專橫、順我者昌、逆我者亡的，而是如切如磋、如琢如磨、春風化雨、惠我良多的。血清 AFP水平變化是胚胎發(fā)育異常病和成人幾種病理狀態(tài)的標志物。因此 ,有必要總結 AFP的結構、構像特征 ,探討其功能與構像之間的關系。在免疫應答中，主要表現為抑制母體對胚胎發(fā)育的免疫應答以及腫瘤患者對腫瘤的免疫應答。在部分變性狀態(tài)下與相應的單克隆抗體有較高的親和活性。它在體內僅占總循環(huán) AFP的 %或更少 ,但在胎兒缺陷性疾病中和 AFP的雌激 素結合的形式中， MGF增加。另一種可能的解釋是非天然狀態(tài) AFP相互結合形成二聚體，使配體不能與 AFP相互作用。世界各地的高致病性禽流感主要由 H5 和 H7 亞型禽流感病毒引起，是人畜共患病，不僅能給養(yǎng)禽業(yè)帶來毀滅性打擊，還嚴重影響人類健康?，F在已經獲得了包括 H H5和 H7在內的幾個禽流感病毒亞型 HA基因的全部序列以及所有 14個血凝素基因的部分序列。 禽流感病毒粒子大約由 ～ 的 RNA， 70%～ 75%的蛋白質， 20%～ 24%的脂質和 5%～ 8%的碳水化合物組成。 如圖 1 ９ H5N1型抗原的結構 二、 禽流感病毒的致病力及毒力 禽流感病毒致病力的變化范圍很大 。 三、 禽流感病毒對理化因素的抵抗力 HA trimer. (From Fields Virology, 2nd ed, Fields amp。病毒可在加熱、極端的 pH、非等滲和干燥的條件下失活。 四、禽流感的預防 (一 ) 禽流感病毒在一定條件下可以存活較長時間。 （ 3）候鳥：從韓國飛到日本越冬的候鳥有 14種之多，候鳥糞便污染水，可以引起禽流感 。世界衛(wèi)生組織及越南專家都 強調，目前還沒有證據顯示該病毒可以由人類傳染給人類。 五、禽流感的病原學檢測 快速診斷 金標法 原理：膠 體金的方法是利用免疫示蹤技術的原理，將抗體或抗原包被在硝基纖維素膜上，１１ 用抗體或抗原標記膠體金利用層吸作用，如為陽性則發(fā)生免疫共沉淀而沉積在膜上而顯色。當裂解的 H5型流感病毒HA抗原加到微孔后，預包被的單克隆抗體能將其捕獲，隨后加入的酶標單抗也能與其結 合，而后通過酶催化底物顯色程度判斷結果。本試劑盒中微孔條上一次包被單克隆抗體，二次包被 H5型病毒裂解液，加入血清標本和酶標單抗后，標本中的特異性抗體與酶標單抗競爭結合酶標板上的抗原，如果加入的血清標本能明顯抑制酶標單抗與抗原的結合，則表明標本中含流感病毒 H5型 HA抗原的特異性抗體。目前，我國通過設計合成 AIV核蛋白（ NP）基因特異的引物，建立了可以直接從臨床病料的感染組織中檢測所有亞型禽流感病毒的。 IFT早在 1961年就開始用于人類流感的快速診斷。 IFT用于診斷具有快速、簡便、敏感性好的特點，而且費用較低。但對抗原制備要求較高，需用非離子型去污劑對純化的病毒粒子進行裂解。 目前存在的問題：對于咽拭樣品的特異性不好（約 91%），有待提高。 20世紀 80年代我國呂聯煌等在福建省沿海地區(qū)１３ 發(fā)現了一個 HTLVI流行區(qū)，隨后廣東、新疆及其它一些地區(qū)都相繼發(fā)現了多例 HTLVI感染和HTLVI相關神經系統(tǒng)疾病患者。其中僅北京試劑為雙抗原夾心法，其余均為間接法試劑。