植物組織培養(yǎng)(文件)
【正文】 4:13:1904:132/2/2023 4:13:19 AM 1成功就是日復(fù)一日那一點(diǎn)點(diǎn)小小努力的積累。 2023年 2月 2日星期四 上午 4時(shí) 13分 19秒 04:13: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 , February 2, 2023 閱讀一切好書(shū)如同和過(guò)去最杰出的人談話。勝人者有力，自勝者強(qiáng)。 2023年 2月 2日星期四 4時(shí) 13分 19秒 04:13:192 February 2023 1一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。 2023年 2月 2日星期四 上午 4時(shí) 13分 19秒 04:13: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過(guò)于提升自我。 :13:1904:13Feb232Feb23 1越是無(wú)能的人，越喜歡挑剔別人的錯(cuò)兒。 2023年 2月 2日星期四 4時(shí) 13分 19秒 04:13:192 February 2023 1空山新雨后，天氣晚來(lái)秋。 04:13:1904:13:1904:13Thursday, February 2, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 上午 4時(shí) 13分 19秒 上午 4時(shí) 13分 04:13: 沒(méi)有失敗，只有暫時(shí)停止成功！。 :13:1904:13:19February 2, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國(guó)見(jiàn)青山。 , February 2, 2023 雨中黃葉樹(shù)，燈下白頭人。 1天后，再轉(zhuǎn)移到新鮮的同樣培養(yǎng)基濾紙上， 25 ℃ 、 l 4小時(shí)光照下培養(yǎng)。 (4)直接浸入液氮保存。 (2)在含 1． 2 mo1／ L 山梨糖醇的 B5培養(yǎng)基上 4℃ 預(yù)培養(yǎng) 2天。 3周后可分化成苗。 (9)在液氮中貯存 — 定時(shí)期后， 取出材料在 27℃ 水浴中迅速化凍 。 (4)將切取的 莖尖分生組織接種于固體 B5培養(yǎng)基上，內(nèi)含／ L BA及 5%DMSO，光照 16小時(shí)，溫度 20℃ ／ 15℃預(yù)培養(yǎng) 48小時(shí)。 (9)植株 形態(tài)特征、生長(zhǎng)發(fā)育及遺傳性狀 的觀察和分析． 莖尖超低溫保存植物種類： 八、 芽及莖尖分生組織的超低溫保存 2. 莖尖分生組織的超低溫保存程序： （ 1） 種子消毒滅菌 ，種子經(jīng) 70％酒精迅速漂洗， 10％漂白粉溶液消毒 20分鐘，無(wú)菌水洗滌 4次． (2)在 無(wú)菌條件下播種 于具潤(rùn)濕濾紙的滅菌培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)。先置于黑暗條件下培養(yǎng) 15— 30天，然后轉(zhuǎn)移到光照下培養(yǎng)。然后以同樣降溫進(jìn)度降到 30℃ － 40℃ ，停留 2小時(shí)，然后浸入液氮中。 (2)將盛有材料的試管 插入冰浴中 ， 待溫度平衡后， 加入0℃ 預(yù)冷的冰凍保護(hù)劑 (10％ DMSO + mo1／ L 山梨糖醇 )，使保護(hù)劑稍淹過(guò)保存材料。 6)抗逆性的分析。 2)后代的形態(tài)特征及生長(zhǎng)發(fā)育狀況。 2. 2．顯示細(xì)胞存活率的二醋酸酯熒光素 (FDA)染色法，反映酯酶的脫脂化作用，或采用中性紅染色法。因?yàn)槌蜏乇鶅霾牧匣瘍鰰r(shí)，再次結(jié)冰的危險(xiǎn)溫度區(qū)域大約是 —50℃ 至 — 10℃ 。保存材料經(jīng)冰凍保護(hù)劑在 0℃ 預(yù)處理后，逐步通過(guò)這些溫度，樣品在每級(jí)溫度 上停留一定時(shí)間 (4— 6分鐘 )，然后浸入液氮。在這種降溫速度下，可以使細(xì)胞內(nèi)的水分有充足的時(shí)間不斷流到細(xì)胞外結(jié)冰，從而使細(xì)胞內(nèi)的水分減少到最低限度，達(dá)到良好的脫水效應(yīng)，避免細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰。 (2)慢速冰凍法：通常成熟的植物細(xì)胞都具有大的液泡，含有大量水分。 4．降溫冰凍方法 (1) 快速冰凍法：將材料從 0℃ ，或者其他預(yù)處理溫度 (如木本植物的冬芽在 3℃ 一 10℃ 預(yù)處理 20天 )直接投入液氮。 3．冰凍保護(hù)劑 迄今，已經(jīng)報(bào)道了多種類型的冰凍保護(hù)劑。 2．預(yù)處理 目的： A. 增加細(xì)胞分裂和同
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