植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)報(bào)告(文件)
【正文】 mL、貯備液II、Ⅲ、Ⅳ各5 mL；2) 溶化瓊脂：用粗天平分別稱(chēng)取5g瓊脂、15g蔗糖放入500 mL搪瓷缸中，加入蒸餾水400 mL，用用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體呈半透明狀。 溶化的培養(yǎng)基應(yīng)該趁熱分裝。每500 mL培養(yǎng)基，可分裝10～15瓶。將裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶直立于金屬小筐中，再放入高壓蒸氣滅菌鍋內(nèi)。3) 待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋。3. 其他滅菌1) 不耐熱的物質(zhì)將采用過(guò)濾滅菌 如赤霉素、玉米素、脫落酸、尿素和某些維生素等。方法：甲醛、高錳酸鉀熏蒸。高錳酸鉀是一種氧化劑，當(dāng)它與一部分甲醛作用時(shí)，由氧化反應(yīng)產(chǎn)生的熱可使其余的甲醛揮發(fā)為氣體。取與甲醛等量的氨水，倒在另一個(gè)燒杯里，迅速放入熏蒸室內(nèi)，使甲醛和氨水發(fā)生中和反應(yīng)，以消除甲醛味，減少對(duì)人體的刺激作用。用70－75％的酒精拭擦臺(tái)面并消毒雙手。金屬器械不能過(guò)度灼燒，以防退火。3) 培養(yǎng)瓶貼上標(biāo)簽，做好標(biāo)記，然后放到光照培養(yǎng)箱中或培養(yǎng)室培養(yǎng)架上進(jìn)行培養(yǎng)，條件為20003000LX，26177。3. 接種及培養(yǎng)（同無(wú)菌苗的建立）一瓶接種2~3個(gè)莖段，直接插入培養(yǎng)基中，形態(tài)學(xué)上端朝上；4. 剔除長(zhǎng)菌嚴(yán)重的培養(yǎng)瓶，其余繼續(xù)培養(yǎng)5. 觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)結(jié)果：組別材料染菌率枯死率存活率二菊花莖（1）0100%075%酒精15s升汞：15min月季莖（2）100%（2）月季花（2）第一周50%（1）第二周100%（2）女貞莖（4）0100%（1長(zhǎng)愈傷組織、3無(wú)變化）香樟（1）100%（有愈傷）杜鵑（1）100%波斯菊莖（1）100%（略長(zhǎng)根，第二周長(zhǎng)菌）第一周(206/4/29)材料月季花月季莖結(jié)果綻開(kāi)，無(wú)根花苞長(zhǎng)真菌，無(wú)根長(zhǎng)真菌，無(wú)根葉稍長(zhǎng)，無(wú)根，未染菌材料菊花莖香樟結(jié)果褐化，無(wú)根無(wú)根有白色菌點(diǎn)？or愈傷組織？材料杜鵑波斯菊莖結(jié)果無(wú)根，幾乎無(wú)變化長(zhǎng)勢(shì)旺盛，略微生根材料女貞莖結(jié)果無(wú)變化，無(wú)根第二周(2016/5/6)其余材料均無(wú)明顯變化材料月季花波斯菊結(jié)果開(kāi)始枯萎，無(wú)根波斯菊開(kāi)始長(zhǎng)菌，黃色細(xì)菌，菌落光滑稍長(zhǎng)根，但不明顯綜合對(duì)比不同濃度NAA對(duì)波斯菊生根的影響(2016/5/6)NAA濃度 低 —————————— 高實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：較高濃度NAA誘導(dǎo)長(zhǎng)根效果更好。4) 溶化瓊脂需要注意的是，在加熱瓊脂、制備培養(yǎng)基的過(guò)程中，操作者千萬(wàn)不能離開(kāi)，否則沸騰的瓊脂外溢，就需要重新稱(chēng)量、制備。每瓶放置外植體的數(shù)量，應(yīng)該根據(jù)培養(yǎng)瓶瓶的大小來(lái)確定，一般放置胡蘿卜46塊。5. 無(wú)菌操作培養(yǎng)時(shí)：1) 進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機(jī)會(huì)。同樣，培養(yǎng)液在未用前，不要過(guò)早開(kāi)瓶；用過(guò)之后如不再重復(fù)使用，應(yīng)立即封閉瓶口直立可增加落菌機(jī)會(huì)。6) 工作中不能面向操作區(qū)講話(huà)或咳嗽，以免唾沫把細(xì)菌或支原體帶入工作臺(tái)面發(fā)生污染。3) 為拿取方便，工作臺(tái)面上的用品要有合理的布局，原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央。3. 接種用的酒精燈，火焰不要調(diào)得太高，接種時(shí)應(yīng)靠近酒精燈火焰操作，接種的速度要快。但要注意大燒杯底的外表面不能沾水，否則加熱時(shí)燒杯容易炸裂，使溶液外溢，造成燙傷。3. 接種及培養(yǎng)（同無(wú)菌苗的建立）4. 剔除長(zhǎng)菌嚴(yán)重的培養(yǎng)瓶，其余繼續(xù)培養(yǎng)5. 觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)結(jié)果：組別材料染菌率枯死率存活率長(zhǎng)芽率二波斯菊第三周有染菌%%100%75%酒精15s升汞：15min番茄100%第一周（2016/5/20）材料波斯菊結(jié)果有部分死亡，未死亡的均已生芽，長(zhǎng)勢(shì)好該培養(yǎng)基適宜用于誘導(dǎo)波斯菊生芽材料番茄結(jié)果無(wú)生芽趨勢(shì)，但是可能要長(zhǎng)愈傷組織該培養(yǎng)基濃度不適宜誘導(dǎo)番茄生芽第二周(2016/5/27)材料波斯菊結(jié)果莖段生芽長(zhǎng)勢(shì)良好
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