植物組織培養(yǎng)-wenkub
2023-02-04 04:56:47 本頁面
【正文】 的離體自 20世紀 60年代逐漸得到廣泛應用。 種質(zhì)資源的離體保存是對離體培養(yǎng)的小植株、器官、組織、細胞或原生質(zhì)體等材料，采用限制生長、延緩或停止其生長的處理使之保存，在需要時可以重新恢復其生長，并再生植株的方法。 1949年 Polge發(fā)現(xiàn)甘油具有保存特性，標志著低溫生物學的形成； 1980年 開始進行玻璃化保存，開展超低溫保存研究。因此采取適當?shù)姆椒▽⑸锊牧辖抵脸蜏?，即可使生命活動固定在某一階段而不衰老死亡。不論是微生物、動物細胞、植物細胞還是體外培養(yǎng)的器官都可以進行凍存，并在適當條件下復蘇。 如果將細胞懸浮在溶液中，隨著溫度的降低，細胞外部的水分會首先結(jié)冰，從而使得未結(jié)冰的溶液中電解質(zhì)濃度升高。但是如果在溶液中加入冷凍保護劑，則可保護細胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷。而且不同的冷凍保護劑其冷凍保護效果也不一樣。 (2) 預處理。 (6) 保存后的化凍：一般在 37— 40 ℃ 溫水浴中快速化凍。 (9) 遺傳性狀的分析：如植株的形態(tài)特征、生長發(fā)育狀況、染色體、同工酶及抗逆性等。 (2)預培養(yǎng)，增加培養(yǎng)基中的糖濃度，提高滲透壓；或在預培養(yǎng)基中加入誘導抗寒力的物質(zhì)或冰凍保護劑，如脫落酸 (ABA)，山梨糖醇、脯氨酸及二甲基亞砜 (DMSO)等。 但作為冰凍保護劑的物質(zhì)應該具備以下特性： （ 1）易溶于水； （ 2）在適當濃度下對細胞無毒； （ 3） 化凍后容易從組織細胞中去除。 植物體內(nèi)的水分在降溫冰凍過程中， 從 10℃ 到 140℃ 是冰晶形成和增長的危險溫度區(qū)， 在 140℃ 以下，冰晶不再增生。 以每分鐘 0. 110℃ 的降溫速度 (一般 1— 2℃ ／分較好 )。 第一步是用慢速降溫法從 0℃ 降到一定的預凍溫度，使細胞達到適當?shù)谋Ｗo性脫水； 第二步，投入液氮中迅速冰凍。 因此要使植物種質(zhì)的超低溫保存獲得成功，不僅要求有一個合適的降溫冰凍程序，而且還要求采取合適的化凍方法，以避免在化凍過程中產(chǎn)生細胞內(nèi)的次生結(jié)冰，并應防止在化凍吸水過程中水的滲透沖擊對細胞膜體系的破壞。 6．光照對恢復生長的影響 黑暗條件下有利于超低溫保存培養(yǎng)物的恢復生長。存在停滯期。 4)同工酶譜的分析。保存后的材料表現(xiàn)出較高的存活率。 (3)以 1℃ ／分的降溫速度從 0℃ 降到 10℃ ，輕輕搖動試管，使試管內(nèi)的溶液結(jié)冰。 (5)化凍后，用 含 3％蔗糖的液體培養(yǎng)基洗滌 3次， 為減輕和避免滲透沖擊的傷害，培養(yǎng)液應逐步加入。 此外，在化凍洗滌后，可采 TTC法和 FDA熒光染色法 觀測細胞的活力和存活率 。 (3)萌發(fā) 生長 4— 5天后，在無菌條件下切取莖尖的分生組織， ，第 1對葉原基。 (6)將莖尖分生組織 轉(zhuǎn)移到在冰浴中預冷的具有 1m1液體 B5培養(yǎng)基的離心管 中。 (11)吸去混合液，并用 B 5培養(yǎng)基洗滌 4次。 Sakai(1990)和 Yamada(1991)建立了一種莖尖分生組織的超低溫保存簡便方法，該技術的關鍵是， 在冰凍前，用高濃度的冰凍保護劑使保存材料脫水，以致不需要慢速程序降溫，從室溫直接浸入液氯， 即可獲得很高的存活率。在含 0。 (6)化凍后，倒出保護劑， 將材料放入含 moI／ L蔗糖的 B5培養(yǎng)基中， 25℃ 10分鐘。 該方法也適用于愈傷組織及懸浮培養(yǎng)細胞。 :13:1904:13Feb232Feb23 1故人江海別，幾度隔山川。 2023年 2月 上午 4時 13分 :13February 2, 2023 1行動出成果，工作出財富。 04:13:190
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