基因工程部分復(fù)習(xí)(文件)
【正文】 有特定功能的分化細(xì)胞 （三）干細(xì)胞技術(shù)應(yīng)用 1 胚胎干細(xì)胞 2 造血干細(xì)胞 分布：骨髓、外周血和臍血 治療：白血病、再生障礙性貧血 3 間充質(zhì)干細(xì)胞（ MSC） 分布：成年后存于骨膜下和骨髓腔內(nèi) 治療：造血干細(xì)胞移植和異體 MSC構(gòu)建組織等 4 神經(jīng)及其他干細(xì)胞 分布：成體位于室管膜和室管腔 治療：恢復(fù)中樞神經(jīng)，如治療帕金森綜合癥 。 可分為： 胚胎干細(xì)胞：來自囊胚期的細(xì)胞團，屬于全能干細(xì)胞，每個細(xì)胞可以發(fā)育成為完整的個體。如：“具有人類心臟的豬” 培育更優(yōu)良性狀的轉(zhuǎn)基因動物。 利用動物產(chǎn)生有益蛋白：如利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，讓羊乳汁分泌人凝血因子、讓牛分泌人乳鐵蛋白和讓豬分泌人血紅蛋白。由這種胚胎發(fā)育而成嵌合體的轉(zhuǎn)基因動物，即其中有一部分組織來源于整合有外源基因的供體ES細(xì)胞。 （二）、轉(zhuǎn)基因動物構(gòu)建方法 1）顯微注射法：利用纖維操作技術(shù)系統(tǒng)和顯微注射技術(shù)將外源基因直接注入實驗動物的受精卵原核，使外源基因整合到動物基因組，再通過胚胎移植技術(shù)將整合有外源基因的受精卵移植到受體的子宮內(nèi)繼續(xù)發(fā)育，進而得到轉(zhuǎn)基因動物。其中包括長著人類心臟的綿羊、會吐蜘蛛絲的山羊、在夜晚身體會發(fā)光的豬、以及尺寸是普通奶牛三倍大的“施瓦辛格”奶牛。需要新的技術(shù) 1975年， Milstein和Kohler利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的分生的特征，將 B細(xì)胞與之融合 ,獲得了既能產(chǎn)生單一抗體又能體外無限生長的雜合細(xì)胞。 4）細(xì)胞融合途徑 ① 滅活病毒誘導(dǎo)：融合率較低，重復(fù)性不夠高 ② 化學(xué)誘導(dǎo)融合：用聚乙二醇（ PEG）介導(dǎo) ③ 電融合：將懸浮細(xì)胞在低壓交流電場（ 100～200v/cm）中聚集成串珠狀細(xì)胞群，或?qū)⑴囵B(yǎng)細(xì)胞形成單層接觸，然后加高壓電脈沖（ 1～, 脈沖寬 0～ 100μs），導(dǎo)致胞間細(xì)胞質(zhì)溝通，造成細(xì)胞融合。 B 培養(yǎng)方式： 實驗室：采用小搖瓶和小轉(zhuǎn)瓶形式 工業(yè)化生產(chǎn)（大規(guī)模培養(yǎng)）：通氣攪拌罐 （四）、動物細(xì)胞融合和單細(xì)胞克隆等技術(shù)簡介 1 細(xì)胞融合技術(shù) 1）、定義 細(xì)胞融合：兩個或多個細(xì)胞融合成一個雙核或多核細(xì)胞的現(xiàn)象 2）分類 同源融合細(xì)胞：基因型相同的細(xì)胞形成的融合細(xì)胞。 B 營養(yǎng)要求 開始的培養(yǎng)基主要是全血清培養(yǎng)基，但由于血清的缺陷，目前開發(fā)無血清培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)的主要方向。一旦原代細(xì)胞進行了傳代培養(yǎng)即成為細(xì)胞系。 獲得原代細(xì)胞是一系列細(xì)胞培養(yǎng)的第一步 獲得原代細(xì)胞的步驟： 解剖分離 培養(yǎng)液淋洗和切成碎片 再淋洗 酶法分離成單個細(xì)胞 離心分離后再培養(yǎng) B 連續(xù)化培養(yǎng) ? 大多數(shù)細(xì)胞系在有限的代數(shù)內(nèi)以不變的形式增殖，當(dāng)超過有限世代后，它們可能有兩種情況，一是
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