【正文】 工水產(chǎn)品 c) 提取 稱取 100mL離心管中，加入 200μL混合內標標準溶液，依次加入 1mL鹽酸羥胺、 2mL 對 甲苯磺酸、 2mL 乙酸銨緩沖溶液和 40mL乙腈，勻漿2min(10000r/min)，離心 3min(3000r/min)，將上清液轉移到 250mL分液漏斗中，用 20mL乙腈重復提取殘渣一次，合并上清液。依次用 3mL 2%（ v/v）甲酸溶液、 3mL乙腈淋洗陽離子交換柱，棄去流出液。 氘代隱色孔雀石綠 m/z 337/322（定量離子）。 高效液相色譜法 原理 ? 試樣中的殘留物用乙腈 乙酸鹽緩沖混合液提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷層并濃縮，經(jīng)酸性氧化鋁柱凈化后，高效液相色譜 PbO2柱后衍生測定，外標法定量。把上清液轉移至裝有 10 mL 水和 2 mL 二甘醇的 100 mL離心管中。 ? 將酸性氧化鋁柱安裝在固相萃取裝置上，將梨形瓶中的溶液轉移到柱上，再用乙腈洗滌瓶兩次，每次 mL, 把洗滌液依次通過柱，控制流速不超過 ，收集全部流出液， 45℃ 旋轉蒸發(fā)至近干，殘液準確用 mL乙腈溶解，過 濾膜，濾液供液相色譜測定。 e) 檢測波長： 618 nm(孔雀石綠 )。標準工作溶液和樣液中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫或隱色結晶紫響應值均應在儀器檢測線性范圍內。酒精可用加熱法除去，二氧化碳可用振搖法或超聲法除去，淀粉吸附的色素可用洗脫法將色素洗下來。 （ 1）薄層色譜法（定性） ? 是目前國家標準方法 GB/T 色素的吸附與解吸附方法。通過其吸收光譜可判斷為何種色素。 （ 3） HPLC法 ? HPLC法測定合成色素具有方法靈敏、重現(xiàn)性好、準確度高等特點，已成為色素分析的主要方法。 ? 食品中的主要有機酸為乙酸、乳酸、丁二酸、檸檬酸、酒石酸、蘋果酸等。滴定法和 pH酸度計一般用于食品中總酸度的測定。 （ 2）高效液相色譜法 HPLC分析有機酸不僅簡便快速，而且選擇性好，準確度高。為了使有機酸盡可能地以分子形式存在，一般使用酸性流動相來抑制有機酸的離解。 ? 用 RPHPLC分析食品中有機酸時，最常遇到的問題就是來自食品中其它有機物質的干擾。亞硫酸及其鹽類毒性較小，人少量攝取時，在體內迅速氧化成硫酸鹽排出體外。 食品漂白劑 ? 亞硫酸鹽這類化合物不適用于動物性食品，以免產(chǎn)生不愉快的氣味。 （ 1）滴定法 滴定法的測定原理是：樣品用 1mol/L鹽酸或2mol/L磷酸酸化后加熱回流，同時樣液通氮保護防止亞硫酸鹽的氧化，亞硫酸鹽迅速轉化為 SO2, SO2隨水汽導入 3％ H2O2吸收液中，被氧化成H2SO4，然后用標準堿液進行滴定。 靈敏度高，選擇性好，但吸收液毒性較大。由于 HSO3化學性質不如 SO3穩(wěn)定，因此在測定時提高溶液 pH值使 HSO3變成 SO3 ，或在 pH值為27范圍內， HSO3與甲醛反應生成穩(wěn)定的羥甲基磺酸鹽（ HOCH2SO3)。我國規(guī)定過氧化苯甲酰在面粉中的最大添加量為 60mg/kg。依據(jù)苯甲酸鈉在 225nm處的吸光值與標準曲線比較，可較準確地測得其含量。樣品中過氧化苯甲酰和苯甲酸可用乙醚提取，由于過氧化苯甲酰和苯甲酸的理化性質差別較大，因此同時測定比較困難，可采用兩種流動相對它們進行分別測定。 ? 有些抗氧化劑可能與其所產(chǎn)生的過氧化物結合，形成氫過氧化物，使油脂氧化過程中斷，而本身則形成抗氧化劑自由基。常用的合成抗氧化劑有： ? BHA：加熱后效果保持性好，它是目前國際上廣泛使用的抗氧化劑之一。 ? PG： 對熱比較穩(wěn)定。 合成抗氧化劑的檢測 樣品處理 測定抗氧化劑的樣品處理并不容易，特別是在低含量時，從復雜基體中提取時，其它干擾組分同時被提取出來。 ? 采用蒸汽蒸餾法提取油脂樣品中的 BHA和 BHT，可除去大量干擾物質，餾出物冷凝后導入丁醇溶液中，然后導入氣相色譜中。 例： Page等建立了脂肪和油脂中 GA、 THBP、TBHQ、 NDGA、 BHA、 BHT等的 HPLC測定方法。對固體樣品如薯片、蜜餞等，樣品需要重復提取兩次，對干酪、谷物食品、糕點等食品提取一次便可以。取 10g樣品，分別加 25ml正己烷、 5ml水和 75ml乙腈，均質，離心，過濾。 （ 2）液相色譜法 HPLC分析抗氧化劑適用范圍很廣。脂肪通常溶解于正己烷或石油醚中，用乙腈或甲醇水溶液可以把抗氧化劑抽提出來。毒性較低。 ? BHT： 穩(wěn)定性較高，耐熱性好，是目前國際上特別是在水產(chǎn)加工方面廣泛應用的廉價抗氧化劑。 ? 抗氧化劑有天然物質和化學合成物質兩大類。 抗氧化劑的作用機理有多種可能： ? 有的抗氧化劑是由于本身極易被氧化，首先與氧反應，從而保護了食品，如抗壞血酸。 FID檢測器，最低檢出量為 。 （ 1）分光光度法 在酸性條件下，采用鐵粉將過氧化苯甲酰還原為苯甲酸。加入過氧化苯甲酰后，在破壞類胡蘿卜素等色素的同時起到增白的作用，還可以防霉變。 采用頂空進樣技術，可直接測定酒類樣品中游離 SO2。 （ 2）鹽酸副玫瑰苯胺比色法 原理：二氧化硫被四氯汞鈉吸收液吸收后，形成一種穩(wěn)定的配合物，再與甲醛及鹽酸副玫瑰苯胺作用生成紫紅色物質，其顏色深淺與二氧化硫含量成正比，通過比色可以計算出樣品中二氧化硫的含量。 ? 經(jīng)常用于白糖、餅干、粉絲、葡萄酒、果脯、蜜餞等產(chǎn)品中。慢性影響可引起頭痛，對肝臟有一定損害，使紅血球血紅蛋白減少。隨著 ODS柱的研究開發(fā)，今后在有機酸和其它有機物的同時分離方面還將有進一步的研究和應用。有時為了改善峰的形狀，在流動相中加入適量的有機溶劑，如甲醇。 RPHPLC一般使用弱極性 ODS固定相和極性比 ODS固定相要強的流動相。 （ 1）氣相色譜法 氣相色譜分析有機酸時，需要衍生化后再進行測定，這是因為： ①有機酸的沸點較高，不容易氣化；②有機酸具有極強的吸附性、極性和較強的反應活性，在進樣器內襯管、柱管和檢測器連接處，都容易被吸附，形成嚴重的拖尾峰，難以準確定量。因此有機酸的定性與定量分析不僅對食品營養(yǎng)學研究意義重大，而且在食品生產(chǎn)過程的質量管理中也必不可少。 ? 采用具有二極管陣列檢測器的 HPLC可以通過比較各峰的保留時間和紫外可見吸收光譜與標準品的是否相同來定性，通過峰面積來定量。檸檬黃。 ? 將跑出來的色素斑點與標準品進行對照， Rf相同的為同一色素。 3. 反復用檸檬酸酸化的 pH為 4的熱水清洗吸附物，以除去水溶性雜質。在上述色譜條件下，孔雀石綠、結晶紫、隱色孔雀石綠和隱色結晶紫的保留時間約為 、 、 、。 f) 進樣量： 50 μL。 b) 流動相：乙腈和乙酸銨緩沖溶液 ； c) 流速： mL/min。 2. 凈化 ? 在離心管中加入 15 mL 二氯甲烷 ,振蕩 10 s， 3 000 r/min離心 10 min， 將二氯甲烷層轉移至 100 mL的梨形瓶中，再用 5 mL乙腈、 10 mL 二氯甲烷重復上述操作一次，合并二氯甲烷層于 100 mL梨形瓶中。加入 5g酸性氧化鋁，再次震蕩 30