天然藥物有效成分提取分離技術(shù)(研)(文件)
【正文】 入已準(zhǔn)備好的硅膠柱上面，勿使硅膠柱面受到擾動(dòng)，否則將影響層析效果，所用樣品洗脫 劑要少，使樣品在硅膠柱上形成狹窄的原始譜帶。⑵樣品量與吸附劑比例 硅膠一般為1:100300；較難分離者有時(shí)甚至可達(dá)1:5001000；聚酰胺為1:2030。⑸干法上樣時(shí)，樣品一定要呈溶液狀態(tài)拌入吸附劑，如樣品沒(méi)有完全溶解，將混懸液拌入吸附劑，當(dāng)進(jìn)行柱層析時(shí)，顆粒狀樣品在洗脫劑作用下，逐步溶解后再經(jīng)柱層析移動(dòng)，用薄層層析檢查時(shí)，樣品完全沒(méi)有分離開(kāi)。分別命名為RP(reverse phase)RP8及RP18。國(guó)內(nèi)使用的單位也比較多。依據(jù)所用壓力大小不同，可以分為快速層析(5個(gè)大氣壓)，低壓液相層析(LPLC，小于5個(gè)大氣壓)，中壓液相層析(MPLC，520大氣壓)及高壓液相層析(HPLC，20個(gè)大氣壓)等。因而對(duì)這些物質(zhì)產(chǎn)生了吸附作用即氫鍵吸附。聚酰胺吸附強(qiáng)弱主要取決于各種化合物與之形成氫鍵締合的能力，要含水溶劑中大致有下列規(guī)律：⑴形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多，則吸附能力越強(qiáng)。如間苯二酚苯酚鄰苯二酚；對(duì)羥基苯甲酸鄰羥基苯甲酸。⑵柱層析時(shí)用含有氯仿作冼脫劑時(shí)，由于溶劑的比重大于1,無(wú)法裝柱。它是六十年代發(fā)展起來(lái)的一種分離分析技術(shù)，是利用分子篩分離物質(zhì)的一種方法。羥丙基葡聚糖凝膠(Sephadex LH20)為Sephadex G25經(jīng)羥丙基化處理后得到的產(chǎn)物。Sephadex LH20價(jià)格比較昂貴。即可實(shí)現(xiàn)物質(zhì)分離。陽(yáng)離子交換樹(shù)脂交鏈度36%；陰離子交換樹(shù)脂交鏈度23%。③堿性強(qiáng)弱不同的生物堿分離東茛菪堿；茛菪堿；小檗堿混合物水溶液通過(guò)銨（NH4+）型弱酸性樹(shù)脂。寧可累死在路上，也不能閑死在家里！寧可去碰壁，也不能面壁。能干的人，不在情緒上計(jì)較，只在做事上認(rèn)真；無(wú)能的人！不在做事上認(rèn)真，只在情緒上計(jì)較。什么是奮斗？奮斗就是每天很難，可一年一年卻越來(lái)越容易。因此，先用水洗下東茛菪堿；繼用氯化銨（NH4Cl）洗下茛菪堿；最后用碳酸鈉（Na2CO3）洗下小檗堿。②生物堿的分離可用強(qiáng)酸性樹(shù)脂從中草藥水浸液或稀乙醇提取液或乙醇提取部位的水溶部位直按交換生物堿，用氨水或氨性乙醇洗脫，所得部位，再及其它分離手段分離。離子交換樹(shù)脂的交鏈度對(duì)中藥化學(xué)成分的交換分離影響較大。離子交換層析⑴離子交換法系以離子交換樹(shù)脂作為固定相，以水或含水溶劑作為流動(dòng)相。不僅可在水中應(yīng)用，也可在極性有機(jī)溶劑或它們與水組成的混合溶劑中膨潤(rùn)使用。由于凝膠網(wǎng)孔半徑的限制，大分子將不能滲入凝膠顆粒內(nèi)部(即被排阻在凝膠粒子外部)，故在顆粒間隙移動(dòng)，并隨溶劑一起從柱底先行流出；小分子因可自由滲入并擴(kuò)散到疾膠顆粒內(nèi)部，故通過(guò)層析柱時(shí)阻力增大，流速變緩，將較晚流出。如常用的乙醇水；甲醇水；丙酮水等，當(dāng)含水量大于20%以上時(shí)，所用聚酰胺顆粒最好不要小于100目。如⑷與溶劑介質(zhì)有關(guān)，一般認(rèn)為，在水中形成氫鍵能力最強(qiáng)，在有機(jī)溶劑中較弱，大堿性溶劑最弱。⑵形成氫鍵的位置對(duì)吸附力有影響。芳香硝基化合物和醌類是其硝基和醌基與聚酰胺分子中酰胺鍵的游離氨基形成氫鍵。因此，既可分離水溶性物質(zhì)，又可分離脂溶性物質(zhì)?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)也有反相硅膠商品出售，也可直接按常壓柱層析操作使用。Lobar柱屬于低壓柱層析范疇(5個(gè)大氣壓)。柱層析的填料系將普通硅膠經(jīng)化學(xué)修飾，鍵合上長(zhǎng)度不同的烴基(R)，形成親油表面而成。但因薄層層析時(shí)吸附劑的表面積一般為柱層析時(shí)表面積的2倍左右。上樣時(shí)注意除去樣品硅膠中的氣泡。要求在層析柱四周敲擊均勻，否則，由于層析柱兩側(cè)硅膠緊密程度不一，造成色譜帶產(chǎn)生斜面，影響分離效果。⑵濕法裝柱 將硅膠混懸于洗脫劑中，不斷攪拌待空氣除去后，連同溶劑一起傾入，否則由于不同粒度大小的硅膠沉降速度不一，使硅膠柱有明顯的分段，容易影響分離效果。硅膠的活性與含水量有關(guān)，含水量高則吸附力減弱，當(dāng)游離水含量高達(dá)17%以上時(shí)，吸附能力極低，而可作為分配層析載體。⑶酸堿薄層：在鋪制薄層時(shí)采用稀酸或稀堿以代替水調(diào)制的薄層。⑵絡(luò)合薄層：硝酸銀薄層，用于分離碳原子數(shù)目相等而其中碳碳雙鍵數(shù)目不等的一系列化合物。因此，如果用某種展開(kāi)劑去展開(kāi)某一化合物時(shí)，當(dāng)Rf值太小時(shí)，就要考慮換用一種極性較大的溶劑去展開(kāi)；Rf值過(guò)大時(shí)，就降低溶劑的極性。因此，在進(jìn)行薄層層析時(shí)，選擇展開(kāi)劑比選擇吸附劑要復(fù)雜的多。⑷點(diǎn)樣時(shí)避免將固體物質(zhì)點(diǎn)到薄層上，否則，當(dāng)展開(kāi)劑 時(shí)樣品邊溶解，邊移動(dòng)，形成嚴(yán)重拖尾，組分交叉重疊，達(dá)不到分離目的。鋪板注意事項(xiàng)： ⑴用蒸餾水調(diào)制吸附劑時(shí)，有時(shí)為了把氣泡趕盡，可加12滴乙醇消泡；⑵國(guó)內(nèi)產(chǎn)硅膠G 中的石膏經(jīng)常不起粘合作用，因此，常用2‰的CMCNa溶液調(diào)硅膠G制成硬板。根據(jù)薄層的厚度在玻璃管兩端繞幾圈膠布。其中硅膠由于它們的吸附性能良好，適用于各類化合物的分離，應(yīng)用最廣。薄層層析優(yōu)點(diǎn)：⑴價(jià)廉、設(shè)備簡(jiǎn)單、易于操作；⑵展開(kāi)時(shí)間短，一般只須數(shù)分鐘到期數(shù)十分鐘；⑶斑點(diǎn)擴(kuò)散小，檢出靈敏度高；⑷分離情況受溫度影響小；⑸可
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