【正文】 1）鹽酸 鎂粉反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加鎂粉適量，搖勻，加 2～ 5滴濃鹽酸，即產(chǎn)生劇烈反應(yīng)，如溶液呈紅色或紫紅色，表明可能含有黃酮類(lèi)。 ?2）醋酸鎂反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加數(shù)滴 1％醋酸鎂甲醇溶液，如溶液呈橙紅色、紫色等顏色，表明可能含有蒽醌類(lèi)。加熱至 100℃ 才顯紅色、紅紫色，表明含有三萜類(lèi)成分。 ? 3）碘 碘化鉀反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加 2～ 3滴碘 碘化鉀試劑，如產(chǎn)生褐色或暗褐色沉淀，表明可能含有生物堿。 65 ? 3）冰醋酸 三氯化鐵反應(yīng)：取 1ml供試液于蒸發(fā)皿中，水浴上蒸干，殘留物加 三氯化鐵試劑溶解后，置于試管內(nèi)，沿管壁加入 1ml濃硫酸，使分成二層，如上層為藍(lán)綠色，界面處為紫色或紅色環(huán)，表明可能含有 2， 6二去氧糖的強(qiáng)心苷類(lèi)。 ?2）開(kāi)環(huán) 閉環(huán)反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加 2～ 3滴 1％氫氧化鈉溶液，于沸水浴上加熱3～ 4分鐘，得澄清溶液，再加 3～ 5滴 2％鹽酸使溶液酸化，如溶液變?yōu)榛鞚?，表明可能含有?nèi)酯類(lèi)化合物。 ? 5）熒光反應(yīng)：取供試液，點(diǎn)于濾紙片上或硅膠色譜板上，干燥后置紫外燈下觀察，如呈現(xiàn)藍(lán) 綠色熒光，再?lài)姙?1％氫氧化鉀試劑，熒光加強(qiáng)，表明可能含有香豆素類(lèi)化合物。 ?2）香草醛 濃硫酸反應(yīng)：取供試液點(diǎn)于硅膠色譜板上，揮去石油醚，噴灑香草醛 濃硫酸試劑，如產(chǎn)生紅、藍(lán)、紫等顏色，表明可能含有揮發(fā)油、萜類(lèi)和甾醇。 ?（ 2）預(yù)試驗(yàn)反應(yīng)完成后，首先對(duì)反應(yīng)結(jié)果明顯的成分進(jìn)行分析判斷，作出初步結(jié)論。 73 （五）色譜預(yù)試 色譜預(yù)試不僅可以減少成分間的相互干擾，還可以根據(jù)展開(kāi)劑和各成分的比移值 Rf，推斷各成分的極性大小和溶解性能。篩選方法有兩種：一種是在提取分離得到單體后再進(jìn)行活性測(cè)試，即對(duì)每一個(gè)單體成分進(jìn)行多個(gè)生物活性試驗(yàn)指標(biāo)的觀察。但此方法只是以活性為指標(biāo)進(jìn)行追蹤，可大大減少分離的盲目性，且微量成分不易遺漏，現(xiàn)多采用這種方法進(jìn)行活性成分研究。 78 79 每組用大白鼠 10只分別按不同劑量喂食，觀察其瀉下情況，結(jié)果 (表 123)表明：大黃水提取物瀉下作用最強(qiáng)，所以水提取物是大黃瀉下作用的活性主要部分 。 82 83 （三）篩選時(shí)注意事項(xiàng) ?1．確保供試材料具有活性 這是活性成分篩選的前提。如附子水煎劑中的 Ca2+與微量的烏頭堿共同存在時(shí)，有明顯的強(qiáng)心作用，而單一 Ca2+和單一烏頭堿均無(wú)強(qiáng)心作用，說(shuō)明兩者在強(qiáng)心作用上是協(xié)同完成的。 ?4．中藥在臨床治療上經(jīng)常表現(xiàn)出多方面的活性，研究者應(yīng)力求找出其中最本質(zhì)的作用，選擇建立適宜的活性測(cè)試體系，才有可能追蹤分離出目的活性成分甚至有效成分。一般步驟如下： 86 1．有效成分純度的判斷 獲得單體成分是鑒定和測(cè)定結(jié)構(gòu)的前提。 87 ?2．物理常數(shù)測(cè)定 常用物理常數(shù)包括熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、折光率、相對(duì)密度、比旋度等。一個(gè)未知結(jié)構(gòu)的最后確定尚有待于與合成品進(jìn)行比較。 ?3．分子式的測(cè)定 經(jīng)典方法是進(jìn)行元素定性分析，再測(cè)定各元素的百分含量，求出實(shí)驗(yàn)式，并根據(jù)分子量，推出分子式；目前最精確的方法是質(zhì)譜法或高分辨質(zhì)譜（ HRMS）。最好選用兩種以上溶劑系統(tǒng)或色譜條件，采用正相和反相色譜同時(shí)進(jìn)行檢驗(yàn)，以確保結(jié)論的正確性。一般通過(guò)化學(xué)、物理常數(shù)及光譜鑒定，有針對(duì)性的查對(duì)文獻(xiàn)，初步確定是已知物還是未知物，如果通過(guò)一定的依據(jù)判斷其可能為已知物，最好用對(duì)照品同時(shí)進(jìn)行熔點(diǎn)、色譜和紅外光譜對(duì)照來(lái)判定試樣與對(duì)照品是否為同一化合物。由于人和動(dòng)物的異種差異及動(dòng)物的個(gè)體差異，病理模型難以建立，使得活性篩選方法不太適宜。 ?2．中藥對(duì)某種活性成分的表現(xiàn)，有可能不是由一種成分所產(chǎn)生，而是由多種成分相互協(xié)同表現(xiàn)出來(lái)的。將乙醇不溶物重結(jié)晶后，得到番瀉苷 A，其瀉下作用較乙醇不溶物更強(qiáng)。有瀉熱通便、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)的功效。 76 另一種是將提取分離的每一階段的組分進(jìn)行活性評(píng)估，追蹤其活性最強(qiáng)部分，再繼續(xù)追蹤，結(jié)合藥理試驗(yàn)篩選，直到活性單體成分的得到。各類(lèi)成分的常用色譜預(yù)試條件見(jiàn)表 122。 72 ?（ 3）判斷分析各反應(yīng)結(jié)果時(shí)，應(yīng)綜合考慮，例如異羥肟酸鐵反應(yīng)為陽(yáng)性的有酯、內(nèi)酯、香豆素類(lèi)等化合物，要配合香豆素的特有反應(yīng)，將香豆素與其它酯類(lèi)化合物進(jìn)行區(qū)別。 ? （ 2）普魯士藍(lán)反應(yīng)：取 1g樣品，檢前搗碎，置于試管中，加蒸餾水使?jié)駶?rùn)，立即用濾紙將試管口包緊，并在濾紙上加 1滴 10％氫氧化鉀溶液，于 50～ 60℃ 水浴中加熱 15～ 30分鐘，再在濾紙上分別滴加 10％硫酸亞鐵試劑、 10％鹽酸、 5％三氯化鐵試劑各 1滴，如濾紙顯藍(lán)色，表明可能含有氰苷。 （ 1）甾體、三萜類(lèi)：同醇溶性成分甲項(xiàng)檢識(shí) 。 ? 4）間硝基苯反應(yīng)：取供試液點(diǎn)于濾紙片上，噴灑 2％間硝基苯試劑，待乙醇揮發(fā)后，再?lài)姙?氫氧化鉀溶液，置 70～ 100℃ 的恒溫箱中加熱，如呈紫紅色，表明可能含有內(nèi)酯類(lèi)化合物。 ? 本實(shí)驗(yàn)也可取強(qiáng)心苷固體樣品少許，加入 1ml呫噸氫醇試劑振搖，置水浴上加熱 3分鐘，如呈現(xiàn)紅色，表明可能含有 2， 6二去氧糖。 64 丙項(xiàng)檢識(shí) （ 1） 強(qiáng)心苷類(lèi) ?1）堿性苦味酸反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加數(shù)滴堿性苦味酸試劑，如溶液即刻或 15分鐘內(nèi)顯紅色或橙紅色，表明可能含有強(qiáng)心苷類(lèi)。 63 乙項(xiàng)檢識(shí) （ 1） 生物堿類(lèi) ? 1）碘化鉍鉀反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加 1～ 2滴碘化鉍鉀試劑，如立即有棕黃色至棕紅色沉淀產(chǎn)生，表明可能含有生物堿。如溶液最終呈現(xiàn)紅或紫色，表明含有三萜類(lèi)成分。 ? 3）氨熏反應(yīng)：取供試液滴于濾紙片上或硅膠色譜板上，置氨氣中熏片刻，斑點(diǎn)呈亮黃色，在紫外燈下觀察，斑點(diǎn)呈黃色熒光，表明可能含有黃酮類(lèi)。酸水不溶部分，加 10ml醋酸乙酯溶解，醋酸乙酯液用 5％氫氧化鈉溶液振搖洗滌 2次（每次2～ 3ml），棄去堿水層。本實(shí)驗(yàn)也可在試管中進(jìn)行。 ?2）溴酚藍(lán)反應(yīng)：取供試液點(diǎn)于濾紙片上，噴灑 ％溴酚藍(lán)試劑的 70％乙醇溶液，如在藍(lán)色背景上產(chǎn)生黃色斑點(diǎn)，表明可能含有有機(jī)酸。 56 ?3）香草醛 鹽酸反應(yīng)：取供試液點(diǎn)于濾紙片上，干燥后，噴灑香草醛 鹽酸試劑，如立即呈不同程度的紅色，表明含有間苯二酚和間苯三酚結(jié)構(gòu)的化合物。 55 （ 3）酚類(lèi)、鞣質(zhì)類(lèi)化合物 ?1）三氯化鐵反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加醋酸酸化后，加數(shù)滴 1％三氯化鐵試劑，溶液如呈顯綠、藍(lán)綠、藍(lán)黑或紫色，表明可能含有酚性成分或鞣質(zhì)。 將上述溶液中沉淀濾過(guò)除去，濾液加 1ml 10％鹽酸溶液，置沸水浴中加熱水解數(shù)分鐘，放冷后，滴加 10％氫氧化鈉溶液調(diào) pH至中性，重復(fù)上述斐林反應(yīng)，如仍產(chǎn)生磚紅色氧化亞銅沉淀，表明可能含有多糖或苷類(lèi)。 52 ?1．水溶性成分的檢識(shí) 取中藥粗粉 5g，加 50ml蒸餾水，浸泡過(guò)夜，或于 50～ 60℃ 水浴中溫浸 1小時(shí)，濾過(guò)，濾液供檢識(shí)下列各類(lèi)成分： 53 （ 1）糖、多糖和苷類(lèi) ? 1） Molish反應(yīng)：取 1ml供試液于試管中，加入 1～ 2滴 10％ α 萘酚乙醇試劑搖勻，傾斜試管 45176。每級(jí)提取液，可進(jìn)一步結(jié)合化合物的酸堿性不同，采用酸、堿液處理，使其分為酸性、堿性和中性部分。 ?（ 1）水提取液：取藥材粉末 10g，加 100ml蒸餾水，室溫浸泡 24小時(shí)，濾過(guò)，取少量濾液檢查蛋白質(zhì)、氨基酸，剩余濾液和濾渣水浴加熱（ 55～ 60℃ ） 1小時(shí)，濾過(guò)，濾液檢查糖、皂苷、有機(jī)酸、鞣質(zhì)、生物堿鹽。 46 ?（二）預(yù)試驗(yàn)的方法 天然藥物化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)的方法可以分為兩類(lèi)。在檢識(shí)方法上，可配合 TLC或 PC檢識(shí)，往往可提高檢出的準(zhǔn)確度。 ?2．制備供試液時(shí)，應(yīng)盡量除去雜質(zhì)，以減少成分間的相互干擾。薄層色譜比紙色譜展開(kāi)時(shí)間短，操作方便，更適用于預(yù)試驗(yàn)工作。 42 二、天然藥物化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn) （一）預(yù)試驗(yàn)的目的和要求 中藥化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)是指通過(guò)簡(jiǎn)單的提取分離和定性反應(yīng)，初步檢驗(yàn)?zāi)持兴幹锌赡芎心男┗瘜W(xué)成分，然后按照所含化學(xué)成分的性質(zhì)，設(shè)計(jì)有效成分提取、分離的具體方法。 “ 新 ” ，是指劑型新，根據(jù)疾病治療的需要，從制劑學(xué)上做文章，提高中藥的制劑水平。否則，常用中藥的有效部位的工藝和用途都被專(zhuān)利保護(hù)后，即使有很好的處方或思路，也無(wú)法進(jìn)