巴西橡膠樹乙烯途徑中抑制因子ein3的western印跡畢業(yè)論文(文件)
【正文】 略物資,它與石油、鐵礦石、有色金屬并列為四種緊缺型工業(yè)原料,在生產(chǎn)地域和產(chǎn)品的性能上具有不可替代的作用。保障我國(guó)的天然橡膠資源的安全,事關(guān)中國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和穩(wěn)定,對(duì)世界天然橡膠的安全保障也具有非常重要的意義。年降雨量1500一2500mm,但干濕季節(jié)明顯,11月至翌年4月為旱季,5月一10月為雨季, 降雨量占全年的60一90%，相對(duì)濕度在80%以上,由于中國(guó)植膠區(qū)位于赤道以北18一24度,大大超過了世界植膠的熱帶地區(qū)(赤道以南10 度至赤道以北15度)的界限,是公認(rèn)的不宜植膠地,主要問題是臺(tái)風(fēng)和低溫兩大自然災(zāi)害,對(duì)橡膠樹的影響帶來了一系列的問題。[3]我國(guó)橡膠產(chǎn)業(yè)發(fā)展的戰(zhàn)略定位是“鞏固”、“提升”、“穩(wěn)定”、“發(fā)展”。ACC被其氧化酶催化形成乙烯、HCN和二氧化碳。乙烯最重要的生物學(xué)反應(yīng)是黃化胚芽的三重反應(yīng)：即莖桿的偏向水平生長(zhǎng)、下胚軸膨脹變粗和頂端鉤狀芽彎曲的加劇。對(duì)巴西橡膠樹木質(zhì)器官進(jìn)行的錘擊實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，巴西橡膠樹木質(zhì)器官遭到機(jī)械創(chuàng)傷后與離體的組織器官一樣，會(huì)產(chǎn)生傷害乙烯。l 10% APS 70181。l 10% SDS 25181。后面分別隔1h、4h、6h、12h、24h從兩株橡膠樹上取葉片鋁箔包裹并標(biāo)記后保存于80度冰箱。其他幾個(gè)時(shí)間處理按此步驟提取蛋白并20度保存。[1] BCA 法的測(cè)定原理為蛋白質(zhì)價(jià)銅離子還原成亞銅離子, 后者在堿性溶液中與BCA 結(jié)合生成紫紅色絡(luò)合物。[2] method（1） 在高通量蛋白定性濾紙上畫出1cm1cm的方格。（5） 棄去蛋白固定液后加入Esen staining buffer在搖床上染色15min。（9） 記錄數(shù)據(jù)并做標(biāo)準(zhǔn)曲線（相似度R178。在凝膠的左邊第一個(gè)孔中各加入6μl的雙色預(yù)染寬分子量蛋白Marker。然后一塊膠進(jìn)行染色脫色，另一塊膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜及后續(xù)工作。（2）平衡：將膠放入轉(zhuǎn)移液中在搖床上平衡以除去SDS。然后將夾板放入轉(zhuǎn)移槽中，黑板相對(duì)黑極，白板對(duì)白極(正極）。（6）交聯(lián)和封閉： ①將膜取出后，先用去離子水清洗，然后入1TBS中浸洗5min，%戊二醛的TBS中交聯(lián)45min。（7）一抗孵育與清洗： ①一抗孵育：將膜從封閉液中取出浸入用封閉液稀釋1000倍的一抗Ein3中，放入搖床，在37度60rpm下孵育23h。二氨基聯(lián)苯胺（DAB）是過氧化物酶的生色底物，在過氧化氫存在的情況下失去電子從而呈現(xiàn)出顏色的變化和積累，形成淺棕色不溶性的產(chǎn)物。然后用移液槍加到二抗孵育后的PVDH膜上，在搖床上顯色1030min。相對(duì)于BCA法而言，Esen method和Bradford法所得樣品的OD值比較接近，且各個(gè)處理的濃度變化差異也相差不大。從顯色的明暗程度來說，0h、1h、6h、12h的比較明顯，而4h的比較暗，而且24h的觀察不到蛋白的存在。致 謝本論文是在翟金玲副教授的悉心指導(dǎo)下完成的。在此向翟金玲副教授致以衷心的感謝和崇高的敬意。另外，還要感謝王啟超師兄、范玉龍師兄等師兄師姐在我實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)困難時(shí)的幫助和對(duì)此實(shí)驗(yàn)的支持。長(zhǎng)期以來，翟老師不僅在實(shí)驗(yàn)過程中幫助我，在我有疑惑時(shí)給予細(xì)心的指導(dǎo)，讓我學(xué)會(huì)了很多實(shí)驗(yàn)的方法和技術(shù)，還在學(xué)習(xí)和生活上給予我關(guān)懷和鼓勵(lì)。P本實(shí)驗(yàn)主要采用的就是Esen method定蛋白濃度，用BCA法和Bradford法可以更好地驗(yàn)證Esen method的精確性，同時(shí)也可大致確定所提取的橡膠葉片蛋白的濃度。4結(jié)果與分析 method 定蛋白濃度（1）OD612數(shù)據(jù)記錄表Protein probeOD612 wert1OD612 wert2averageBSA（mg/ml）Sample 0h 1h 4h 6h 12h 24h（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線（3）樣品蛋白濃度（OD612值代入y=+）樣品蛋白濃度(μg/μl)上樣量(μl)0h1h4h6h12h24h（1）Bradford數(shù)據(jù)記錄表Protein probeBradford wert1Bradford wert2averageBSA（mg/ml）0 000 Sample 0h 1h 4h 6h 12h 24h(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線（3）樣品蛋白濃度（OD值代入y=+）樣品蛋白濃度(μg/μl)上樣量(μl)0h1h4h6216h12h24h（1）BCA數(shù)據(jù)記錄表Protein probeBCA wert1BCA wert2averageBSA（mg/ml）
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