巴西橡膠樹(shù)乙烯途徑中抑制因子ein3的western印跡畢業(yè)論文(完整版)
【正文】 要Abstract1前言2實(shí)驗(yàn)器材及試劑配方、試劑配方3方法步驟：（SDS)聚丙烯酰胺凝膠電泳4結(jié)果與分析1前言 天然橡膠是經(jīng)濟(jì)建設(shè)和國(guó)防建設(shè)不可缺少的稀缺資源和戰(zhàn)略物資,它與石油、鐵礦石、有色金屬并列為四種緊缺型工業(yè)原料,在生產(chǎn)地域和產(chǎn)品的性能上具有不可替代的作用。年降雨量1500一2500mm,但干濕季節(jié)明顯,11月至翌年4月為旱季,5月一10月為雨季, 降雨量占全年的60一90%，相對(duì)濕度在80%以上,由于中國(guó)植膠區(qū)位于赤道以北18一24度,大大超過(guò)了世界植膠的熱帶地區(qū)(赤道以南10 度至赤道以北15度)的界限,是公認(rèn)的不宜植膠地,主要問(wèn)題是臺(tái)風(fēng)和低溫兩大自然災(zāi)害,對(duì)橡膠樹(shù)的影響帶來(lái)了一系列的問(wèn)題。ACC被其氧化酶催化形成乙烯、HCN和二氧化碳。對(duì)巴西橡膠樹(shù)木質(zhì)器官進(jìn)行的錘擊實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，巴西橡膠樹(shù)木質(zhì)器官遭到機(jī)械創(chuàng)傷后與離體的組織器官一樣，會(huì)產(chǎn)生傷害乙烯。l 10% SDS 25181。其他幾個(gè)時(shí)間處理按此步驟提取蛋白并20度保存。[2] method（1） 在高通量蛋白定性濾紙上畫(huà)出1cm1cm的方格。（9） 記錄數(shù)據(jù)并做標(biāo)準(zhǔn)曲線（相似度R178。然后一塊膠進(jìn)行染色脫色，另一塊膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜及后續(xù)工作。然后將夾板放入轉(zhuǎn)移槽中，黑板相對(duì)黑極，白板對(duì)白極(正極）。（7）一抗孵育與清洗： ①一抗孵育：將膜從封閉液中取出浸入用封閉液稀釋1000倍的一抗Ein3中，放入搖床，在37度60rpm下孵育23h。然后用移液槍加到二抗孵育后的PVDH膜上，在搖床上顯色1030min。從顯色的明暗程度來(lái)說(shuō)，0h、1h、6h、12h的比較明顯，而4h的比較暗，而且24h的觀察不到蛋白的存在。在此向翟金玲副教授致以衷心的感謝和崇高的敬意。另外，還要感謝王啟超師兄、范玉龍師兄等師兄師姐在我實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)困難時(shí)的幫助和對(duì)此實(shí)驗(yàn)的支持。P4結(jié)果與分析 method 定蛋白濃度（1）OD612數(shù)據(jù)記錄表Protein probeOD612 wert1OD612 wert2averageBSA（mg/ml）Sample 0h 1h 4h 6h 12h 24h（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線（3）樣品蛋白濃度（OD612值代入y=+）樣品蛋白濃度(μg/μl)上樣量(μl)0h1h4h6h12h24h（1）Bradford數(shù)據(jù)記錄表Protein probeBradford wert1Bradford wert2averageBSA（mg/ml）0 000 Sample 0h 1h 4h 6h 12h 24h(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線（3）樣品蛋白濃度（OD值代入y=+）樣品蛋白濃度(μg/μl)上樣量(μl)0h1h4h6216h12h24h（1）BCA數(shù)據(jù)記錄表Protein probeBCA wert1BCA wert2averageBSA（mg/ml） Sample 0h 1h 4h 6h 12h 24h(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線（3）樣品蛋白濃度（OD值代入y=+）樣品蛋白濃度(μg/μl)上樣量(μl)0h1h4h6h12h24h三種定蛋白的方法所用到的牛血清蛋白和樣品蛋白是在同一條件下保存的同一試管中取得的，因此其蛋白濃度理論上應(yīng)該是相等的，但是從三種方法的結(jié)果來(lái)看，不同方法所得的結(jié)果有一定的差距。（8）、二抗孵育與清洗： ①二抗孵育：將清洗掉一抗的膜浸入用封閉液稀釋2000倍的二抗羊抗兔中，放入搖床，在37度60rpm下孵育23h。染色完成后將膠從染色液中取出放入另一玻璃皿中并加入脫色液I在低轉(zhuǎn)速搖床上脫色30min，棄去脫色液Ⅰ，加入脫色液Ⅱ在相同轉(zhuǎn)速的搖床上脫色過(guò)夜。染色完成后將膠從染色液中取出放入另一玻璃皿中并加入脫色液I在低轉(zhuǎn)速搖床上脫色30min，棄去脫色液Ⅰ，加入脫色液Ⅱ在相同轉(zhuǎn)速的搖床上脫色過(guò)夜。 按照試劑配方配置4%，用移液槍吸取濃縮膠溶液緩慢加入分離膠上面,直至凝膠溶液將要到達(dá)前玻璃板的頂端,插入梳子,凝膠聚合時(shí)間約30 min,然后小心拔出梳子,將凝膠放入電泳槽內(nèi),接好電極,將電泳緩沖液加入電泳槽中，,一塊用考馬斯亮藍(lán)進(jìn)行染色后脫色觀察對(duì)照，另一塊則進(jìn)
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