有關人鼠嵌合抗體制備的可行性(文件)
【正文】 A酶限制酶Trizol RNA提取試劑盒反轉錄PCR試劑盒，瓊脂糖，dNTPs，DNA MarkerDNA凝膠回收試劑盒質(zhì)粒抽提試劑盒轉染試劑盒LipofectamineTM 2000，篩選劑MTX羊抗人IgG Fc片段HRP酶標抗體低溫高速臺式離心機水平式電泳儀PCR擴增儀紫外透射儀恒溫搖床引物合成測序其它耗材總計（First Time）。一只種植雜交瘤細胞的小鼠有時可產(chǎn)生多達10ml的腹水。2周后將生長出的陽性克隆利用有限稀釋法單克隆化。然后，分離純化相應的酶切片段，重復上述步驟，（抗原單詞的首字母）。設計含酶切位點Apa Ⅰ的上游引物LLF，和含EcoR Ⅰ位點的下游引物LLR，以質(zhì)粒pAcκCH3為模板，擴增出輕鏈信號肽基因片段；設計含EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ位點上游引物LCF，和含Pme Ⅰ的下游引物LCR，以質(zhì)粒pAcκCH3為模板，擴增出輕鏈恒定區(qū)基因片段片段；用EcoR Ⅰ連接上述片段得到含輕鏈信號肽、MCS及輕鏈恒定區(qū)的基因片段。測序所得序列在GeneBank 核酸數(shù)據(jù)庫中進行分類及同源性分析。3． 主要儀器低溫高速臺式離心機，恒溫搖床，恒溫水浴箱，水平式電泳儀，PCR擴增儀，紫外分光光度計，紫外透射儀，CO2培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，潔凈工作臺，酶標儀。三、 應用嵌合抗體目前主要用于藥物治療方面，與鼠抗相比，嵌合抗體既保留了鼠源可變的高親和性，又具有人Fc段的多種免疫殺傷功能，從而大大降低了人抗鼠抗體反應的發(fā)生幾率，改善了臨床治療效果，與其它小分子基因工程抗體相比，嵌合抗體作為完成的抗體分子，在體內(nèi)半壽期更長，并具有人Fc段的多種免疫殺傷功能。1中科院細胞所鼠源肝癌臨床研究抗乙型
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