有關(guān)人鼠嵌合抗體制備的可行性(文件)
【正文】 A酶限制酶Trizol RNA提取試劑盒反轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒，瓊脂糖，dNTPs，DNA MarkerDNA凝膠回收試劑盒質(zhì)粒抽提試劑盒轉(zhuǎn)染試劑盒LipofectamineTM 2000，篩選劑MTX羊抗人IgG Fc片段HRP酶標(biāo)抗體低溫高速臺(tái)式離心機(jī)水平式電泳儀PCR擴(kuò)增儀紫外透射儀恒溫?fù)u床引物合成測序其它耗材總計(jì)（First Time）。一只種植雜交瘤細(xì)胞的小鼠有時(shí)可產(chǎn)生多達(dá)10ml的腹水。2周后將生長出的陽性克隆利用有限稀釋法單克隆化。然后，分離純化相應(yīng)的酶切片段，重復(fù)上述步驟，（抗原單詞的首字母）。設(shè)計(jì)含酶切位點(diǎn)Apa Ⅰ的上游引物L(fēng)LF，和含EcoR Ⅰ位點(diǎn)的下游引物L(fēng)LR，以質(zhì)粒pAcκCH3為模板，擴(kuò)增出輕鏈信號(hào)肽基因片段；設(shè)計(jì)含EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ位點(diǎn)上游引物L(fēng)CF，和含Pme Ⅰ的下游引物L(fēng)CR，以質(zhì)粒pAcκCH3為模板，擴(kuò)增出輕鏈恒定區(qū)基因片段片段；用EcoR Ⅰ連接上述片段得到含輕鏈信號(hào)肽、MCS及輕鏈恒定區(qū)的基因片段。測序所得序列在GeneBank 核酸數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行分類及同源性分析。3． 主要儀器低溫高速臺(tái)式離心機(jī)，恒溫?fù)u床，恒溫水浴箱，水平式電泳儀，PCR擴(kuò)增儀，紫外分光光度計(jì)，紫外透射儀，CO2培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，潔凈工作臺(tái)，酶標(biāo)儀。三、 應(yīng)用嵌合抗體目前主要用于藥物治療方面，與鼠抗相比，嵌合抗體既保留了鼠源可變的高親和性，又具有人Fc段的多種免疫殺傷功能，從而大大降低了人抗鼠抗體反應(yīng)的發(fā)生幾率，改善了臨床治療效果，與其它小分子基因工程抗體相比，嵌合抗體作為完成的抗體分子，在體內(nèi)半壽期更長，并具有人Fc段的多種免疫殺傷功能。1中科院細(xì)胞所鼠源肝癌臨床研究抗乙型
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