有關(guān)人鼠嵌合抗體制備的可行性-文庫吧資料
2025-06-28 14:20本頁面
【正文】 點(diǎn)上游引物L(fēng)CF，和含Pme Ⅰ的下游引物L(fēng)CR，以質(zhì)粒pAcκCH3為模板，擴(kuò)增出輕鏈恒定區(qū)基因片段片段；用EcoR Ⅰ連接上述片段得到含輕鏈信號肽、MCS及輕鏈恒定區(qū)的基因片段。回收純化擴(kuò)增產(chǎn)物備用。測序所得序列在GeneBank 核酸數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行分類及同源性分析。 擴(kuò)增輕鏈、重鏈的V區(qū)基因根據(jù)Orlandi等（1989）設(shè)計(jì)的擴(kuò)增小鼠可變區(qū)基因的引物，以上述擴(kuò)增產(chǎn)物為模板擴(kuò)增抗體基因的可變區(qū)。3． 主要儀器低溫高速臺式離心機(jī)，恒溫?fù)u床，恒溫水浴箱，水平式電泳儀，PCR擴(kuò)增儀，紫外分光光度計(jì)，紫外透射儀，CO2培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，潔凈工作臺，酶標(biāo)儀。四、 技術(shù)路線從雜交瘤細(xì)胞中提取總RNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA擴(kuò)增輕鏈、重鏈的V區(qū)基因插入含信號肽及人Ig重鏈、輕鏈C區(qū)基因的真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染Sp2/0細(xì)胞克隆、測序分析制備腹水生產(chǎn)抗體檢測抗體特異性與人源性酶切鑒定、測序分析五、 材料與儀器1． 材料大腸桿菌DH5α，大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，TA克隆載體TEasy Vector，含信號肽及重鏈、輕鏈恒定區(qū)基因的質(zhì)粒pAcκCH3，分泌單抗的雜交瘤細(xì)胞，小鼠骨髓瘤細(xì)胞Sp2/0。三、 應(yīng)用嵌合抗體目前主要用于藥物治療方面，與鼠抗相比，嵌合抗體既保留了鼠源可變的高親和性，又具有人Fc段的多種免疫殺傷功能，從而大大降低了人抗鼠抗體反應(yīng)的發(fā)生幾率，改善了臨床治療效果，與其它小分子基因工程抗體相比，嵌合抗體作為完成的抗體分子，在體內(nèi)半壽期更長，并具有人Fc段的多種免疫殺傷功能。這是我國批準(zhǔn)的第一個(gè)人源化單克隆抗體藥物，它的問世標(biāo)志著我國在癌癥靶向治療和人源化抗體藥物領(lǐng)域取得重大突破，該藥主要用于治療頭頸部、食管、肺部、乳腺、結(jié)直腸等部位的上皮源性腫瘤；由第四軍醫(yī)大學(xué)、成都華神集團(tuán)股份有限公司聯(lián)合研制的碘［131Ｉ］美妥昔單抗注射液（商品名：
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