微生物限度檢查法純化水驗證方案 (文件)
【正文】 液 1ml，制備濾膜，濾膜菌面朝上貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，每種培養(yǎng)基至少制備一張濾膜，均不得有菌生長。 、霉菌及酵母菌的計數(shù)方法驗證試驗 供試品對照組： 用滅菌注射器取少量 無菌氯化鈉 蛋白胨緩沖液注入滅菌薄膜過濾器，潤濕濾膜，再取充分混勻的純化水樣 1ml 注入濾器，再用適量的 無菌氯化鈉 蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，使總沖洗量為 100ml,沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于已制備好的平板上， 按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)；細菌、霉菌及酵母菌各制備 2 個平皿。 ℃培養(yǎng) 24～ 48h，用 ％無菌氯化鈉溶液制成每 1ml 含菌數(shù)為 50～ 100cfu 的菌懸液，做活菌計數(shù)備用。 枯草芽孢桿菌 CMCC(B) 6350金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 2600大腸埃希菌 CMCC（ B） 4410白色念珠菌 CMCC (F) 9800 黑曲霉 CMCC(F)98003。 二 目的 建立該純化水的微生物限度檢查方法 ，并對其有效性進行評價，確保試驗方法的完整性，保證檢驗結(jié)果的可靠性。細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證至少應(yīng)進行 3 次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。 六 測試方法 供試品：制水間送水口 1 純化水 《中國藥典》 2020 年版二部微生物限度檢查 —— 薄膜過濾法 培養(yǎng)基及菌種 經(jīng)適用性檢查符合規(guī)定的培養(yǎng)基。 取新鮮的白色念珠菌的培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中， 經(jīng) ℃177。然后吸出孢子懸液（用管口帶有薄的無菌棉花或紗布能過濾菌絲的無菌毛細吸管）至無菌試管內(nèi)，用含 %（ ml/ml）聚山梨酯80 的 ％無菌氯化鈉溶液制成每 1ml 含菌數(shù)為 50～ 100cfu 的菌懸液，做活菌計數(shù)備用。每株試驗菌平行制備 2個平皿，按平皿菌落計數(shù)法測定其細菌數(shù) 稀釋劑對照組： 用相應(yīng)的稀釋液即 無菌氯化鈉 蛋白胨緩 沖液代替供使品，加入各試驗菌 1ml，按實驗組供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù) 。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數(shù)。在特 殊情況下，若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌和酵母菌，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有細菌，則應(yīng)分別點計霉菌和酵母菌，細菌菌落數(shù)。 七 異常情況處理 嚴格按照《微生物限度檢查法 SOP》操作，如在檢測中有不符合要求的情況出現(xiàn)，分析問題原因后，決定是否需對本方案中設(shè)定的微生物限度檢查方法進行修改，并重新進行驗證。細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證至少應(yīng)進行 3 次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。 6 測試方 法 供試品：制水間送水口 1 純化水 《中國藥典》 2020 年版二部微生物限度檢查 —— 薄膜過濾法 培養(yǎng)基及菌種 經(jīng)適用性檢查符合規(guī)定的培養(yǎng)基。 取新鮮的黑曲霉培養(yǎng)物接種至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基，經(jīng) ℃培養(yǎng) d，加入 ml 含 %（ ml/ml）聚 山梨酯 80 的 ％無菌氯化鈉溶液，將霉菌孢子洗脫。 試驗組： 取供試液 1ml，過濾，沖洗，分別在最后一次的沖洗液中加入大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、入白色念珠菌和黑曲霉試驗菌懸液各 1ml，過濾，取出濾膜，菌面朝上貼于瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。 培養(yǎng)和計數(shù) 以上各組中做細菌計數(shù)的平皿與 ℃倒置 培養(yǎng) 天，霉菌、酵母菌與 ℃倒置培養(yǎng) 天，逐日觀察菌落生長情況，點計菌落數(shù)，必要時，可適當延長培養(yǎng)時間至 天進行菌落計數(shù)報告。 一般營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基用于細菌計數(shù)，玫瑰紅鈉培養(yǎng)基用于霉菌及酵母菌計數(shù)。 計算回收率： 試驗組的菌數(shù)回收率（ %）＝（實驗組的平均菌落數(shù) — 供試品對照組的平均菌落數(shù)） /菌液組的平均菌落數(shù) 100% 稀釋劑對照組的回收率（ %）＝ (稀釋劑對照 組平均菌落 /菌液組平均菌落數(shù)數(shù) )液各 1ml，分別注入平皿中，立即傾注培養(yǎng)基，每株試 100% 判斷標準： 本次試驗各試驗組的菌回收率和各稀釋劑對照組的菌回收率均應(yīng)不低于 70%。 附表一 附表一 細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法驗證結(jié)果 檢驗日期： 試驗 分類 實驗 次數(shù) 大腸埃希菌 金黃色 葡萄球菌 枯草芽孢 桿菌 白色念珠菌 黑曲霉菌 試驗組 菌液組 稀釋劑對照組 供試品 對照組 陰性對照組 稀釋劑對照組菌回收率 試驗組的 菌回收率 結(jié)果判定 結(jié)論： 檢驗人： 復核人： 報告日期： 璽噱錐汰葡柔促汞甌芭踵篪猾餉鉿窗盜忮郯敞鏌唯范湖袤撮難蕓窆邏兜撾涫淺鉦馱拐萸涂拈搬碭雪河轄喜豎癇柔皋鉺栲急劐接琛究效操小炮鋈瓢樾暝嵯岸孓葸喃坨氦稼蘗孜撾撐櫻砧冕嶧噦妻朐弈媯朧淑嘴惴穌母膝增釁皆涼臌糞輯
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