【正文】 ()＋ 2H2O 主要協(xié)同萃取體系 體 系 類 型 實(shí) 例 陽(yáng)離子交換與中性配合 P204和 TBP萃取 UO22+ 不同的二元 陽(yáng)離子交換與胺類協(xié)同 TTA和 TOA萃取 Th4+ 協(xié)萃體系 中性配合與胺類協(xié)同 TOPO和 TOA萃取 Am3+ 陽(yáng)離子交換與陽(yáng)離子交換 TTA和 HAA萃取 RE3+ 相同的二元 中性配合與中性配合 TBP和 Ar2SO萃取 UO22+ 協(xié)萃體系 三元協(xié)萃體系 陽(yáng)離子交換 /中性配合 /胺類 P204/TBP/R3N萃取 UO22+ 形成高分子胺鹽的三元絡(luò)合物萃取體系 ? 溶于有機(jī)相中的高分子胺鹽，與水相中的金屬絡(luò)陰離子接觸時(shí)，發(fā)交換過(guò)程，使水相中的金屬絡(luò)陰離子與有機(jī)相中的胺鹽陽(yáng)離子締合生成三元絡(luò)合物而進(jìn)入有機(jī)相。冠醚形似皇冠，而穴醚為具有三維結(jié)構(gòu)的雙環(huán)穴狀化合物。 KD=[Ao]/[Aw]，這關(guān)系稱為分配定律，是溶劑萃取的基本定律。分離效果的好壞可用分離系數(shù) b來(lái) 表示： b=DA/DB 萃取條件的選擇： 形成螯合物的萃取體系 HR??H++R HR Mn+ + nR ?? MRn HR MRn 水相 油相 KDR KDX Ki Kf D = (KDX Kf Kin / KDRn) ? ([HR]o / [H+])n 萃取條件的選擇： 形成螯合物的萃取體系 ? 萃取劑的選擇：對(duì)于形成螯合物的萃取體系，應(yīng)選擇酸性較強(qiáng)的，較易電離和較易溶于水的萃取劑；萃取劑與被萃取離子螯合后所形成的螯合物越穩(wěn)定越好，越易溶于有機(jī)溶劑越好；這些因素通常要綜合考慮。在燒瓶中再將溶劑蒸發(fā)出來(lái)，再次經(jīng)冷凝，萃取，并重復(fù)進(jìn)行直到萃取完成。 ? 1996年在液 液萃取基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，結(jié)合了液 液萃取和固相微萃取的優(yōu)點(diǎn)。 ? LPME技術(shù)還可以方便地與后續(xù)分析儀器連接，實(shí)現(xiàn)在線樣品前處理。同時(shí)，纖維的多孔性增加了溶劑與樣品接觸的表面積，從而提高萃取效率。 （萃取劑與萃取溶劑相同） 三相 LPME ? 中空纖維管壁的微孔內(nèi)浸入的是有機(jī)萃取劑，而纖維腔內(nèi)吸入的是 水溶液接收相 。 三相 LPME的萃取裝置 接受液在中空纖維管中循環(huán)流動(dòng)，以加快纖維壁中萃取劑與接受液之間的傳質(zhì)速度。 ? 如水樣中的十二烷基硫酸鈉，與亞甲基蘭形成離子對(duì)，用氯仿液滴 (~ μl)收集，用光學(xué)檢測(cè)法檢測(cè)。 ?微波指波長(zhǎng)在 1mm至 1m范圍（ 300－ 300000 MHz）的電磁波。 微波加熱原理 ?傳統(tǒng)加熱： 熱傳導(dǎo)、熱輻射方式，由外向里，加熱慢，受熱不均。 密閉型微波萃取裝置 萃取罐 ?可控溫控壓。 開罐型微波萃取裝置 ?通過(guò)一根波導(dǎo)管將微波聚焦于萃取體系上； ?萃取罐是開放式的，與大氣連通，只能控溫、不能控壓?；w影響小，相同萃取條件可以用于不同基體的樣品；萃取效率高；萃取選擇性好；自動(dòng)化程度高。 5 萃取分離法 溶劑萃取 膠團(tuán)萃取 雙水相萃取 超臨界流體萃取 固相萃取 溶劑微膠囊萃取 膠團(tuán)萃取 ? 膠團(tuán)（膠體）萃取 — 被萃取物以膠體或膠團(tuán)形式被萃取。 ? 反向微膠團(tuán) ： 與正相微膠團(tuán)相反， 當(dāng)向非極性溶劑中加 入表面活性劑達(dá)到一 定濃度時(shí)，會(huì)形成憎 水非極性尾朝外（向 溶劑），而極性頭（ 親水基）朝內(nèi)的膠團(tuán)。 ? 由于生物物質(zhì)（蛋白質(zhì)）的親水憎油性，使其難溶于一般有機(jī)溶劑；不適合通常的水相 /有機(jī)溶劑相體系。 ? 反向微膠團(tuán)對(duì)生物物質(zhì)的溶解 反向微膠團(tuán)中有一個(gè)極性核心，它包括了表面活性劑的極性頭組成的內(nèi)表面，平衡離子和水。 ? 陸九芳 p125b ? 吸附模型 蛋白質(zhì)分子吸附在膠團(tuán)內(nèi)部由表面活性劑親水頭組成的親水壁上。 表面活性劑的濃度非極性溶劑中水的濃度?0?3. 影響膠團(tuán)萃取的主要因素 表面活性劑和溶劑種類對(duì)膠團(tuán)萃取的影響 ? 表面活性劑多采用 AOT（琥珀酸二 (2乙基己基 )酯磺酸鈉） ? 陰離子表面活性劑 ? AOT作為反向微膠團(tuán)的表面活性劑的優(yōu)點(diǎn)： 所形成的膠團(tuán)的含水率高（ ?0為 50－ 60），比季銨鹽高一個(gè)數(shù)量級(jí)以上； AOT形成反向微膠團(tuán)時(shí)，不需要助表面活性劑。 ? 當(dāng) pHpI時(shí)，蛋白質(zhì)分子和表面活性劑內(nèi)表面都荷負(fù)電，相互排斥，蛋白質(zhì)難溶于膠團(tuán)中。此過(guò)程較慢，最終得到的含蛋白質(zhì)有機(jī)相是穩(wěn)定的。將含水的反向微膠團(tuán)的有機(jī)溶液與蛋白質(zhì)固體粉末一起攪拌。 ? 仍留在有機(jī)相中的溶菌酶再用 pH=,[KCl]=萃取。 ? 電位差作用 帶電大分子（粒子）在兩相中分配時(shí)，會(huì)在兩相產(chǎn)生電位 — Donnan效應(yīng) 。 2. 富 PEG上相中加鹽后形成新雙水相，目標(biāo)酶進(jìn)入上相。 ? 易于進(jìn)行工業(yè)放大，處理量可以較大。 ? 20世紀(jì) 50年代，美國(guó)將 SFE用于工業(yè)分離。 ? 在較低的溫度和不太高的壓力下操作，特別適合天然產(chǎn)物的分離。 ? 臨界溫度應(yīng)接近室溫或操作溫度，不能太高，也不能太低。 ? 選擇性較好，易于得到純品。 ? SFE除咖啡因 ：浸泡過(guò)的咖啡豆直接置于萃取容器中，連續(xù)（循環(huán)）用超臨界 CO2萃取（ T＝ 70－ 900C； p＝ 16－20MPa） 10h，咖啡因用水吸收，蒸餾可回收咖啡因。 ? 溶劑萃取的問(wèn)題： 繁瑣費(fèi)時(shí)。 ? 主要用于樣品前處理。 ? 操作簡(jiǎn)單、快速； ? 減少乳化現(xiàn)象； ? 可處理大量樣品； ? 不需要使用大量有機(jī)溶劑； ? 應(yīng)用樣品對(duì)象十分廣泛。 固相萃取的主要萃取模式 ? 與 LC分離模式相同，有正相固相萃取、反相固相萃取、吸附固相萃取和離子交換固相萃取 。 正相固相萃取 ? 采用極性固定相，可從非極性溶劑樣品中萃取有機(jī)酸、碳水化合物和弱陰離子等極性物質(zhì)。 離子交換固相萃取 ? 采用離子交換劑固定相，用來(lái)萃取有機(jī)和無(wú)機(jī)離子性化合物，如有機(jī)堿、氨基酸、核酸堿、離子性表面活性劑等。 固相萃取裝置 ? 簡(jiǎn)易固相 萃取儀 ： 萃取小柱 真空萃取箱 蠕動(dòng)泵 SPE真空裝置 能同時(shí)處理多個(gè)樣品 ,利用其獨(dú)特的轉(zhuǎn)動(dòng)上蓋 ,可方便地在 SPE各步驟間任意切換 ,以收取所需要的組分。即使采用最嚴(yán)格的封尾方法，也只能將鍵合相形成后剩余的 70%的硅醇基團(tuán)封住。 ? 例如，固相萃取法萃取胺時(shí)，帶正電荷的胺與帶負(fù)電荷的硅醇基形成非共價(jià)鍵，很難離解。推薦采用緩沖溶液作為二級(jí)調(diào)節(jié)溶劑是因?yàn)樗?pH值是波動(dòng)的，而且沒有緩沖能力。 相互作用能 ? 待測(cè)組分可以通過(guò)氫鍵、偶極 偶極相互作用、疏水作用力、靜電相互作用等機(jī)理保留到固定相上。疏水鍵合能（偶極 偶極，偶極 誘導(dǎo)偶極，色散相互作用）： 1～ 10kcal/mol；極性基團(tuán)間的氫鍵： 5～ 10 kcal/mol，這種類型的相互作用在硅膠表面發(fā)生的機(jī)會(huì)較多。 ? 非極性物質(zhì)，如脂肪、蠟、碳?xì)浠衔铩㈩愔惡头枷泐惢衔?，可以?qiáng)烈地吸附在這類固定相上，如果采用溫和的洗脫條件，上述非極性物質(zhì)可以與極性或離子性污染物分離。如果不進(jìn)行這一步，就會(huì)減少待測(cè)組分的保留，影響回收率，而且有可能出現(xiàn)干擾峰。 ? 右圖為經(jīng) SPE處理并衍生后膽汁酸的 HPLC譜圖。 ? 固相萃取方法 (使用 SepPak C18硅膠載體柱 ) ① 活化 : 往柱中依次加入 1 0ｍｌ乙酸乙酯、甲醇和 。 紫杉醇的常壓反相層析精制 ? 經(jīng)固相萃取初分離的紫杉醇 ,再用 C18 常壓層析進(jìn)一步純化。 ? 通過(guò)石英纖維頭表面的高分子涂層對(duì)樣品中的有機(jī)分子進(jìn)行萃取和預(yù)富集，使樣品預(yù)處理過(guò)程大為簡(jiǎn)化，提高了分析速度及靈敏度。 SPME與 μHPLC聯(lián)用接口的三通具有合適的尺寸，使解吸效率很高，同時(shí)與微分離系統(tǒng)適配，減少了柱外效應(yīng)。 ? 涂層方便易得，種類多樣，易于自動(dòng)化。m C18 ) 。 ? 在一根長(zhǎng) 20cm，內(nèi)徑 mm的 DB1聚二甲基硅氧烷涂層毛細(xì)管中插入一根同樣長(zhǎng)度的內(nèi)徑為 銹鋼絲構(gòu)成萃取器件，與 μHPLC聯(lián)用測(cè)定了人尿中的抗抑郁藥物。 ? 在細(xì)絲表面涂覆聚合物涂層可以提高萃取效率。 ? 新的問(wèn)題：固定化溶劑穩(wěn)定性較差，支撐材料耐溶劑能力不夠。 溶劑分散方式主要有攪拌 、超聲和膜分散等 。 ? 物理 、 機(jī)械法：微膠囊殼材料的變化過(guò)程為物理變化 。 ? 由普通溶劑萃取的液 液傳質(zhì)變?yōu)榱斯?液傳質(zhì) ， 設(shè)備更加簡(jiǎn)單 、 操作更容易 ， 不存在液 液萃取時(shí)的放大失真 。 。 ? 膠囊的壁材選擇范圍很寬 ， 不一定是疏水材料 ， 也可以通過(guò)控制其表面孔徑等方法使溶劑的固定化效果更好 。 ? 聚合反應(yīng)法：界面聚合 、 原位聚合和懸浮交聯(lián)法 。 ? 相分離法 （ 凝聚過(guò)程 ） ：?jiǎn)文酆蛷?fù)凝聚 。 20世紀(jì) 90年代迅速發(fā)展起來(lái)，即在微膠囊形成過(guò)程中將用于萃取的溶劑包覆于微膠囊的空腔內(nèi)。 溶劑微膠囊萃取 ? 溶劑萃取的問(wèn)題：溶劑損失、相分離難。 纖維管內(nèi)固相微萃取 (Fiberintube SPEHPLC) ? 用聚合物細(xì)絲作萃取介質(zhì)，幾百根聚合物細(xì)絲縱向填進(jìn)一個(gè)短的聚醚醚酮 (PEEK)或聚四氟乙烯 (PTFE)毛細(xì)管中。 金屬絲管內(nèi)固相微萃取 (Wireintube SPME) ? 在 intube SPME的萃取毛細(xì)管中插入一根不銹鋼絲，毛細(xì)管的內(nèi)體積顯著減少。 30cm長(zhǎng)， mm內(nèi)徑， ?m膜厚的 Omegawax 250 GC毛細(xì)管柱作為萃取柱。 管內(nèi)固相微萃取 (intube SPME) ? 將涂層涂在石英管的內(nèi)表面，可用 GC開管毛細(xì)管柱作為萃取柱。 管外固相微萃取 ? 采用傳統(tǒng)的外表涂有涂層的纖維頭，其 SPMEHPLC聯(lián)用界面包括一個(gè)六通進(jìn)樣閥和一個(gè)解吸池，樣品萃取后，SPME纖維頭浸入解吸池中用適當(dāng)溶劑解吸，之后將閥切換至進(jìn)樣位置用 HPLC分析檢測(cè)。 固相微萃?。?SPME） ? 1989年加拿大 Pawliszyn等提出。 ③ 雜質(zhì)淋洗 : 先用 10ml的含 20%甲醇的乙酸銨緩沖液淋洗并抽干 ,然后用 10ml含 60%甲醇的乙酸銨淋洗。 實(shí)例 2. 固相萃取分離提純紫杉醇 ? 紫杉醇是一種具有獨(dú)特抗癌機(jī)理的天然抗癌藥物 ,它對(duì)乳腺癌和卵巢癌等有特殊的療效。 實(shí)例 1. HPLC測(cè)定人血清中膽汁酸的樣品前處理。 固相萃取操作 基本步驟： ? 用甲醇等溶劑活化固定