【正文】 品中加入 4ml ； ? 樣品通過柱子后 ,用 20mL水沖洗； ? 再用 2mL甲醇將膽汁酸洗脫； ? 在 45℃ 下用 N2將洗脫液吹干 ,以丙酮定容至 1mL,衍生化； ? 取 20μ L樣品做 HPLC分析（ ODS柱）。 ? Saito等發(fā)展了 SPME與 μHPLC的聯(lián)用接口。 ? 相對于開管式 intube SPME技術(shù)，由于增大了萃取接觸面，萃取率明顯提高。 溶劑微膠囊萃取的優(yōu)點(diǎn) ? 微膠囊中萃取劑 （ 溶劑 ） 的包覆量遠(yuǎn)高于萃淋樹酯 ， 因此其萃取容量高 。 單凝聚僅用一種聚合物材料進(jìn)行凝聚；復(fù)凝聚用兩種以上帶相反電荷的聚合物材料進(jìn)行凝聚 。用這種結(jié)構(gòu)可以獲得更有效的萃取。 ? SPME是基于固相與樣品之間的平衡而建立起來的集進(jìn)樣、萃取、濃縮功能于一體的技術(shù)。 用有機(jī)溶劑（如甲醇）潤濕柱子的目的 ? 消除萃取柱中可能會干擾待測組分的有機(jī)雜質(zhì)； ? 打開碳鏈，增加萃取柱與待測組分相互作用的表面積，也就是通常所說的活化。 殘余硅醇基的利用 ? 使用沒有封尾的固定相和 pH≥ 4的緩沖溶液以保證殘余硅醇基離子化。 反相固相萃取 ? 采用非極性或弱極性固定相，適用于萃取從非極性至中等極性的化合物； ? 應(yīng)用對象最廣泛，是樣品前處理中使用最多的一種固相萃取模式； ? 被萃取物與固定相間主要是基于范德華力和色散力的疏水相互作用； ? 使用的固定相主要是在硅膠載體表面鍵合了疏水性烷烴，如 18烷、辛烷、二甲基丁烷。 固相萃取 固相萃取 ： ? 以固體吸附劑作固定相，被測物或干擾物吸附到固定相中，使被測物與樣品基體或干擾組分得以分離。 超臨界流體的選擇原則： ? 化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，對設(shè)備無腐蝕。 ? 鹽的種類和濃度 ? 陸九芳 p137－ 330 雙水相萃取體系的應(yīng)用 ? 酶、核酸、生長激素、病毒等生物物質(zhì)的分離純化 ? 萃取流程（右圖） 聚乙二醇（ PEG） 磷酸鹽體系萃取酶 1. 目標(biāo)酶進(jìn)入富 PEG上相 。 ? 陸九芳 p127－ 320 離子強(qiáng)度對膠團(tuán)萃取的影響 4. 膠團(tuán)萃取分離過程 制備含蛋白質(zhì)的反向微膠團(tuán)的三種方法 ? 相轉(zhuǎn)移法 ：將含蛋白質(zhì)的水相和含表面活性劑的有機(jī)溶劑相接觸，在緩慢攪拌下，部分蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)入有機(jī)相。 ? 對生物物質(zhì)萃取所用溶劑的要求 能溶解蛋白質(zhì)并能與水分相，不破壞蛋白質(zhì)生物功能。在較高溫度（ 50?200OC）和較高壓力（ 10?20MPa）下用溶劑萃取固體或半固體樣品； ?與索氏萃取、微波輔助萃取、超臨界流體萃取等固體樣品萃取技術(shù)相比， ASE使用的有機(jī)溶劑少，萃取 10g樣品僅需15mL溶劑；萃取速度快，完成一個(gè)萃取操作全過程只需 15分鐘。 液滴收集 示意圖 ?微波輔助溶劑萃?。?microwave assisted solvent extraction,MASE）也稱微波輔助萃取或微波萃取。 ? 改進(jìn)方法： 將多孔中空纖維管固定在針頭上保護(hù)和容納有機(jī)萃取劑。 K a = [H + ]w [A c ]w[H A c ]wK p = [( H A c ) 2 ]o[H A c ]o2K D = [ H A c ] o[ H A c ] w電離平衡 : 聚合平衡 : 分配平衡 : 分配比 : D = C H A c , oC H A c , w= [H A c ]o + 2 [( H A c )2 ]o[H A c ]w + [A c ]w= K D ( 1 + 2 K p [ H A c ]o )1 + K a / [ H+ ]wD隨 [HAc]o和 [H+]w而變！ K = [I 2 ]w [I ]w[I 3 ]wK D = [ I 2 ]o [ I 2 ]w配合平衡 : 分配平衡 : 分配比 : D = [I 3 ]w [ I 2 ]o [ I 2 ]w C I 2 , o C I 2 , w = += K D1 + K [ I ]w D隨 [ I ]W而變 萃取百分?jǐn)?shù) 在兩相中的總量和在有機(jī)相中的總量AAE ?WOOWW,AOO,AOO,AVDVDVVCVCVC????OW V/VDD??分離系數(shù) ? 在分析化學(xué)中，為了達(dá)到分離的目的，不僅要求被萃取物質(zhì)的分配比大，萃取百分?jǐn)?shù)高，而且要求溶液中共存組分間的分離效果好。 協(xié)同萃取體系 協(xié)同萃取體系 協(xié)同萃取作用 : 混合萃取劑同時(shí)萃取某一物質(zhì)時(shí)，其分配比顯著大于相同濃度下各單一萃取劑分配比之和。 有機(jī)共沉淀劑的優(yōu)點(diǎn) ? 害集效率較高； ? 選擇性較好； ? 有機(jī)載體容易通過高溫灼燒除去。 ? 破壞可溶性絡(luò)合物：加熱，絡(luò)合離子置換 均相沉淀的缺點(diǎn) ? 操作時(shí)間冗長； ? 生成的沉淀會牢固粘附于器壁。該兩種試劑能沉淀的離子種類較多，選擇性不高。不同離子產(chǎn)物沉淀的溶解度不同，因此完全沉淀時(shí)的 pH也不同。 均相沉淀的途徑 ? 改變?nèi)芤旱?pH值：最常采用的是尿素水解法。 ? 惰性共沉淀劑：加入結(jié)構(gòu)相似但不溶于水的惰性載體，促使痕量組沉淀析出，又稱固相萃取劑。 (Synergic Effects in Solvent Extraction: ? 協(xié)萃系數(shù) R： R=D協(xié)同 /D加和 M(w) + R1(w) + R2(w) = MR1R2(o) 協(xié)同萃取體系 ? 協(xié)同萃取體系實(shí)質(zhì)上也是一種三絡(luò)合物體系，它是由被萃物質(zhì)與螯合劑及中性有機(jī)磷萃取劑組成的三元絡(luò)合物萃取體系。 KD=[Ao]/[Aw]，這關(guān)系稱為分配定律，是溶劑萃取的基本定律。 ? LPME技術(shù)還可以方便地與后續(xù)分析儀器連接，實(shí)現(xiàn)在線樣品前處理。 ? 如水樣中的十二烷基硫酸鈉，與亞甲基蘭形成離子對，用氯仿液滴 (~ μl)收集，用光學(xué)檢測法檢測。 開罐型微波萃取裝置 ?通過一根波導(dǎo)管將微波聚焦于萃取體系上； ?萃取罐是開放式的，與大氣連通，只能控溫、不能控壓。 ? 由于生物物質(zhì)（蛋白質(zhì)）的親水憎油性，使其難溶于一般有機(jī)溶劑；不適合通常的水相 /有機(jī)溶劑相體系。 ? 當(dāng) pHpI時(shí)，蛋白質(zhì)分子和表面活性劑內(nèi)表面都荷負(fù)電，相互排斥，蛋白質(zhì)難溶于膠團(tuán)中。 ? 電位差作用 帶電大分子（粒子）在兩相中分配時(shí)，會在兩相產(chǎn)生電位 — Donnan效應(yīng) 。 ? 在較低的溫度和不太高的壓力下操作，特別適合天然產(chǎn)物的分離。 ? 溶劑萃取的問題： 繁瑣費(fèi)時(shí)。 正相固相萃取 ? 采用極性固定相，可從非極性溶劑樣品中萃取有機(jī)酸、碳水化合物和弱陰離子等極性物質(zhì)。 ? 例如，固相萃取法萃取胺時(shí)，帶正電荷的胺與帶負(fù)電荷的硅醇基形成非共價(jià)鍵，很難離解。 ? 非極性物質(zhì)，如脂肪、蠟、碳?xì)浠衔?、類脂類和芳香類化合物，可以?qiáng)烈地吸附在這類固定相上，如果采用溫和的洗脫條件，上述非極性物質(zhì)可以與極性或離子性污染物分離。 紫杉醇的常壓反相層析精制 ? 經(jīng)固相萃取初分離的紫杉醇 ,再用 C18 常壓層析進(jìn)一步純化。m C18 ) 。 溶劑分散方式主要有攪拌 、超聲和膜分散等 。 ? 膠囊的壁材選擇范圍很寬 ， 不一定是疏水材料 ， 也可以通過控制其表面孔徑等方法使溶劑的固定化效果更好 。 溶劑微膠囊萃取 ? 溶劑萃取的問題：溶劑損失、相分離難。 管內(nèi)固相微萃取 (intube SPME) ? 將涂層涂在石英管的內(nèi)表面，可用 GC開管毛細(xì)管柱作為萃取柱。 實(shí)例 2. 固相萃取分離提純紫杉醇 ? 紫杉醇是一種具有獨(dú)特抗癌機(jī)理的天然抗癌藥物 ,它對乳腺癌和卵巢癌等有特殊的療效。了解是哪些力在起作用，有利于制訂特效的分離方法。接著 ,安裝在機(jī)械臂上的移液針將ＳＰＥ支架移動(dòng)到托盤后面的位置 ,使ＳＰＥ柱位于相應(yīng)的洗脫液收集管上方并將洗脫下來的化合物收集在收集管中 . 固相萃取與色層分離、萃取色層的區(qū)別 固相萃取 色層分離 萃取色層 兩相 固 /液 固 /液 液 /液 (水 ) 固定相制備 鍵合、化學(xué)修飾 鍵合、化學(xué)修飾 液體附于固體載體 固定相種類 較多 很多 較少 分離機(jī)理 吸附、分配、交換等 吸附、分配、交換等 分配 柱尺寸 小， (3－ 5)cm X 1cm 大， (20－ 100)cm X 5cm 中等 主要用途 樣品前處理 分離、純化、工業(yè)制備 無機(jī)分離 殘余硅醇基 ? 非極性固定相通常采用封尾技術(shù)將硅膠表面的殘余硅醇基屏閉，但極性或離子交換固定相通常不封尾。 ? 同液相色譜中分離柱的原理一樣，固相萃取也是基于待測組分與樣品基體在固定相上吸附和分配性質(zhì)的不同來進(jìn)行分離的。 ? 以往工業(yè)上除咖啡豆中咖啡因采用二氯乙烷萃取。 超臨界流體萃取 (Supercrtical Fluid Extraction, SFE) ? 以超臨界流體作流動(dòng)相，直接從固體（粉末）或液體樣品中萃取目標(biāo)物質(zhì)（有機(jī)物）。 ? pH=9,[KCl]=，核糖核酸酶不溶于膠團(tuán)，留在水相。 ? 陸九芳 p125c 水殼模型是比較公認(rèn)的蛋白質(zhì)溶解機(jī)理 ? 膠團(tuán)中水含量（ ?0） ? “水池”中的水與正常水有所不同，特別是當(dāng) ?0相當(dāng)?shù)停ㄈ??010）時(shí)，其冰點(diǎn)通常低于 00C。 如：氯仿（或 CCl4）萃取膠體金； 乙醚或氯仿萃取膠體銀或硫酸鋇。 ?微波加熱的選擇性： 不同物質(zhì)的極性不同，吸收微波能的程度就不同，因而產(chǎn)生和傳遞給周圍環(huán)境的熱量不同。目標(biāo)物先被有機(jī)萃取劑從樣品水溶液中萃出，然后進(jìn)入接收相。 連續(xù)萃取器 ? Friedrich 萃取器（溶劑比水輕） ? Schmall萃取器（溶劑比水輕但不易揮性） ? 連續(xù)萃取器（溶劑比水重） ? 索氏萃?。ㄌ崛?、抽提）器（固體樣品） 逆流萃取 Craig提出的萃取模式 一般來說，二項(xiàng)分布的圖形形狀取決于 n 和 p ，如果 p=q=1/2 ，不論 n 有多大，二項(xiàng)分布呈對稱形狀；當(dāng) p≠q 時(shí)，圖的形狀呈偏斜狀，而且若在 n 一定情況下， （ p+q)n 中的 p 值與 q 值相差越大，則偏度越大；當(dāng) p 與 q 為一定值，盡管二者相差較大，但隨著 n 的增大而偏斜度相