生物化學(xué)簡明教程第四版第五章酶(文件)
【正文】 如何測定米氏常數(shù)？ （ 1） v對 [S]作圖 雙倒數(shù)作圖法（ LineweaverBurk作圖法） 米氏方程的轉(zhuǎn)換 m a xm a xmV1]S[1VKv1 ???pH對酶作用的影響 pH影響反應(yīng)速度的原因 ( 1 ) pH影響了酶分子、底物分子和 ES復(fù)合物的 解離狀態(tài)。 最適溫度與最適 pH一樣，也不是一個固定的常數(shù) 激活劑 （ activator） 對酶反應(yīng)速度的影響 酶的激活劑：能提高酶活力的物質(zhì) 1. 無機離子 金屬離子，如 Na+、 K+、 Mg2+、 Ca2+、 Cu2+、 Zn2+、 Fe2+等。 別構(gòu)酶舉例 大腸桿菌天冬氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶 （ aspartate transcarbamylase, ATCase） ATCase催化的化學(xué)反應(yīng) CO2+Glu+ATP ATCase活性調(diào)節(jié)的機理 C T PA T P有催化活性的構(gòu)象 無催化活性的構(gòu)象 C C CC C CR汞 鹽完 整 的催 化 亞 基 調(diào) 節(jié) 亞 基C C CC C C+（ 三 聚 體 ） （ 二 聚 體 ）（ 活 性 ）A T C a s eR R R R RR R R R R R+ATP +CTP 別構(gòu)酶的Ｓ形曲線 [S] V 1/2Vmax 酶活力的測定 注意事項： 測定反應(yīng)的初速度 在一套固定條件下進行 測定方法 酶活力（ enzyme activity） 在一定條件下，１分鐘能轉(zhuǎn)化 １ μmol底物的酶量稱為一個酶單位 (U)。經(jīng)過一系列純化步驟以后得到的 4ml酶制品 (含有 )，總活力為288單位，整個純化過程的收率是多少？ 純化了多少倍？ 酶的應(yīng)用（臨床方面） 消化類：胃蛋白酶、胰酶、淀粉酶、纖維素酶、木瓜酶、凝乳酶酶等 抗炎凈創(chuàng)類：胰蛋白酶、糜蛋白酶、 α淀粉酶、胰脫氧核糖核酸酶等 血凝和解凝類：凝血酶促使血液凝固，防止微血管出血。 酶的分離純化和活力測定 純化的一般原則 。 Allosteric inhibitors bind specifically to the T state and make it harder for substrate to switch enzyme into the R state. Allosteric activators bind specifically to the R state and pull more of the enzyme into the more active R state. ALLOSTERIC EFFECTORS bind specifically to either the T or the R states. Heterotropic (nonsubstrate) activators bind to and stabilize the R state, while heterotropic inhibitors bind preferentially to the T state. TT RT RR +S +S TT RR RT +S +S 序變模型 (simple sequential model) 齊變模型 (concerted model) Simple sequential model for a tetrameric allosteric enzyme. The binding of a ligand (L) to a subunit changes the conformation of that particular subunit from the T (square) to the R (circle) form. This transition affects the affinity of the other subunits for the ligand. 可逆的共價修飾調(diào)節(jié) 可逆的共價修飾 (covalent modification)方式： 可逆磷酸化 (phosphorylation) 可逆腺苷?；?(adenylylation) 尿苷酰化 (uridylylation) 甲基化 (methylation) COVALENT MODIFICATION IS A MEANS OF REGULATING ENZYME ACTIVITY Phosphorylation Is a Highly Effective Means of Regulating the Activities of Target Proteins 糖原磷酸化酶 磷酸化酶 b (活性低 ) 磷酸化酶 a (活性高 ) 糖原磷酸化酶 b 糖原磷酸化酶 a 磷酸化酶激酶 2ATP 2ADP 磷酸化酶磷酸酶 2Pi 2H2O 酶活力和比活力的表示方式 （ 1）酶活力（ enzyme activity） 酶活力的定義：在一定條件下，１分鐘能轉(zhuǎn)化１ μmol底物 的酶量 酶活力的大小用酶活力單位來表示，簡稱酶單位（ unit, U） 酶單位的定義 1961年國際酶單位（ IU） 1972年 Katal（簡稱 Kat）單位 （ 2）酶的比活
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