【正文】 .............................. 18 圖 317 五靈脂與人參配伍 3:1HPLC ............................................ 18 圖 318 五靈脂與人參配伍 5:1HPLC ............................................ 18 圖 319 人參皂苷 Rb Rb Rf、 Rg Rg2含量變化趨勢(shì) .......................... 49 圖 320 人參皂苷 Rb3含量變化趨勢(shì) ............................................ 49 圖 321 人參皂苷 Rc、 Rd含量變化趨勢(shì) ........................................ 50 圖 322 人參皂苷 Re含量變化趨勢(shì) ............................................ 50 圖 41五靈脂各層提取物清除 DPPH 的能力逐漸減弱。 DPPH 自由基有清除能力。并分別用紫外分光光度法、高效液相法對(duì)不同比例配伍后樣品中的總黃酮、原兒茶酸、總皂苷和9種單體皂苷的含量變化進(jìn)行了考察，結(jié)果表明： ① 對(duì)人參皂苷的含量測(cè)定表明：二者并用后使人參皂苷類活性成分含量普遍降低， 總皂苷及 不同配伍比例的人參皂苷類活性成分降低程度有區(qū)別；但配伍比例變化與含量變化并不成線性關(guān)系，且經(jīng)配伍后的樣品中人參皂苷 Rb3含量明顯升高。 在 化學(xué)方面 主要進(jìn)行了以下研究： 物中分離得到 2個(gè)化合物，分別為： β谷甾醇和原兒茶酸；從人參中分離提取得到 3個(gè)化合物，分別為：人參皂苷 Rd、 Rc、 Rb1。 本人 （同意 /不同意，務(wù)必打印后填寫）吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)將本論文版權(quán)授權(quán)給不同媒體進(jìn)行電子出版、多媒體出版、網(wǎng)絡(luò)出版以及其他形式出版 （涉密學(xué)位論文 解密后應(yīng)遵守此協(xié)議 ）。盡我所知，除文中特別加以標(biāo)注和致謝所列內(nèi)容外，論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。 本人聲明畢業(yè)后若發(fā)表在攻讀研究生學(xué)位期間完成的論文 及相關(guān)的學(xué)術(shù)成果，必須以吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)作為第一署名單位。 對(duì)五靈脂脂肪酸及其他脂溶性成分進(jìn)行了 GCMS分析 ， 鑒定出 42種化合物，其中脂肪酸 15種，占脂溶性成分總含量的 %，非 脂肪酸 類成分 27種 ， 占脂溶性成分總含量的 %。 ② 對(duì)總黃酮的含量測(cè)定表明： 配伍后溶液中的總黃酮含量變化顯著，但并不成線性相關(guān)，且 五靈脂與人參 配伍為 3:1時(shí)，溶液中總黃酮含量達(dá)到一個(gè)接近于單一五靈脂溶液中的總黃酮含量值 。 五靈脂的乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物對(duì) ， 本文選擇了大腸桿菌和金黃色葡萄球菌對(duì)五靈脂不同溶劑提取物及其揮發(fā)油、五靈脂與人參不同比例配伍后的醇提物的體外抑菌活性進(jìn)行研究，結(jié)果表明： 各組分對(duì)大腸桿菌 ATCC8099 和金黃色葡萄球菌 ATCC6538 均表現(xiàn)出不同的抑制 其 生長(zhǎng) 的 活性。 DPPH 活性 ...................................... 26 圖 42五靈脂與人參配伍的醇提物 清除 DPPH 活性 .............................. 26 表 43五靈脂揮發(fā)油清除其中以五靈脂功效、主治為主的方劑有 34首，以人參功效、主治為主的方劑有 8首，以二者功 效并重的有 5首。 處方來(lái)源 ： 《玉案》卷五。 處方來(lái)源：《圣惠》卷四十六。 處方來(lái)源 ： 《圣濟(jì)總錄》卷六十五。 處方來(lái)源 ： 《雞峰》卷二十。 處方來(lái)源 ： 《溫病條辨》卷一。 處方來(lái)源 ： 《瘍醫(yī)大全》卷二十八。 處方來(lái)源 ： 《醫(yī)學(xué)入門》卷七。 處方來(lái)源 ： 《奇方類編》卷下。 處方來(lái)源 ： 《普濟(jì)方》卷三十六引《指南方》。 處方來(lái)源 ： 《圣惠》卷八十二。 處方來(lái)源 ： 《北京市中藥成方選集》。 處方來(lái)源 ： 《朱氏集驗(yàn)方》卷十。 處方來(lái)源 ： 《萬(wàn)氏家抄方》卷五引錢氏方。處方來(lái)源 ： 《圣濟(jì)總錄》卷一七七。處方來(lái)源 ： 《張氏醫(yī)通》卷十三。處方來(lái)源《醫(yī)學(xué)入門》卷七。處方來(lái)源：《普濟(jì)方》卷二四三。處方來(lái)源 ： 《金鑒》卷四十八。處方來(lái)源 ： 《醫(yī)方類聚》卷八十九引《施圓端效方》。處方來(lái)源 ： 《醫(yī)學(xué)入門》卷一。處方來(lái)源：福建中醫(yī)藥 1993,24（ 5）： 13 ：人參 3 錢，五靈脂 3 錢。 ：人參（去蘆）半兩，五靈脂 1 分。 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 3 討論： 人參從古至今一直作為重要藥物，在各方面應(yīng)用的都比較多，尤其在抗衰老方面應(yīng)用較多。 張旭等人從化學(xué)方面，對(duì)五靈脂與人參的配伍實(shí)質(zhì)，采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，對(duì)其配伍前后的人參皂苷的變化進(jìn)行了比較系統(tǒng)的研究。 國(guó)內(nèi)在對(duì)五靈脂與人參配伍后的化學(xué)方面進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)研究，多數(shù)是針對(duì)人參部分活性成分變化進(jìn)行研究，到目前為止對(duì)五靈脂與人參配伍后五靈脂活性成分含量變化方面尚缺乏研究來(lái)證實(shí)，因此，本論文以此作為深入研究的方向之一。 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 4 免疫實(shí)驗(yàn) 魯耀邦 [7]等人通過(guò)對(duì)人參與五靈脂 1:1 配伍后，正常小鼠免疫功能研究的實(shí)驗(yàn)證明了，人參與五靈脂配伍組與人參、五靈脂單煎液組比較，對(duì)正常小鼠單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬功能、免疫 器官發(fā)育、溶血素抗體形成，均有顯著增強(qiáng)的作用，但各組比較并無(wú)顯著差異，即人參與五靈脂配伍后，未使免疫功能降低。 毛曉健 [9]等報(bào)道了在環(huán)磷酰胺（ CPA）造成小鼠免疫 功能抑制條件下及正常條件下，人參，五靈脂不同比例配伍前后對(duì)小鼠骨髓中血中紅細(xì)胞，有核細(xì)胞數(shù)，白細(xì)胞數(shù)，免疫器官重量，凝血時(shí)間等影響的研究成果，即人參能增加 CPA 作用下骨髓中有核細(xì)胞數(shù)，五靈脂及五靈脂與人參的配伍組的影響不明顯。 有實(shí)驗(yàn)證明 五靈脂與人參配伍并用，對(duì)小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞（ EBC）擴(kuò)散有抑制作用，能延長(zhǎng)荷瘤小鼠的存活期，且效果明顯優(yōu)于單味人參。五靈脂與人參并用在臨床自古就有，且應(yīng)用較多，療效顯著。 ”顯然，五靈脂善通瘀血，與人參并用則效力更佳。 五靈脂研 究概況 五靈脂為脊索動(dòng)物門，哺乳綱，鼯鼠科 （ Petauristidae） ，復(fù)齒鼯鼠 （ Trogopterus xanthipes MilneEdwards） 的干燥糞便，主產(chǎn)于山西、河北等省，及北京市郊，湖北，四川等省亦有少量飼養(yǎng)，全年均可在巖洞或石縫周圍尋找收集 [14]。”據(jù)李時(shí)珍的《本草綱目》記載：“鹖鴠乃侯時(shí)之鳥也，五臺(tái)諸山甚多，其狀如小雞，四足有肉翅，夏月毛采五色，自鳴若曰：鳳凰不如我。凡用糖心潤(rùn)澤者為真。從 1990 版《中國(guó)藥典》起，也將五靈脂的原動(dòng)物正式確定為復(fù)齒鼯鼠 [17]。野生 的從巖洞中掏取后，揀去雜質(zhì)，曬干。湖南、湖北、山西產(chǎn)區(qū)主要以野生為主，不易收集，導(dǎo)致產(chǎn)量較少。隨著勞動(dòng)價(jià)值的提升 ，采集的人減少且采收難度增大，導(dǎo)致貨源越來(lái)越少。 三萜類化合物 三萜類化合物多具有抑菌、抗炎和溶血活性。 L酪氨酸醫(yī)藥上多用作治療甲狀腺功能亢進(jìn)。 微量元素 陳月開 [25]等人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，五靈脂中含有鈣、鐵、鋅、鎂、錳、銅、鈉、鉻、鉬、鈷、鎳、鍶、鎘等，還含有少量的鋁。 其他成分 李強(qiáng)等人 [29]還發(fā)現(xiàn)五靈脂中含有正二十七烷、維生素類和樹脂等物質(zhì)。 ， 1965 年《 江蘇省中醫(yī)雜志》，共治療 10 例，皆痊愈。用于治療子宮內(nèi)膜異位 [3132]，治療 30 例，痊愈 12 例，顯效吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 8 16 例，無(wú)效 2 例。 人參研究概況 人參 (Panax Ginseng )是五加科多年生草本植物，也是長(zhǎng)白山區(qū)盛產(chǎn)的道地藥材之一，以干燥根入藥。 其中人參皂苷是人參的主要有效成分，現(xiàn)已明確的人參皂苷單體約有 40 余種，而不同的人參皂苷也具有不同的藥理活性。熔點(diǎn) 197~198℃ 。 人參皂苷 Rb1不僅具有抑制細(xì)胞質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，具有清除自由基的能力，還可以使過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性增強(qiáng) [38]。旋光度 +（ c=，甲醇） 藥理活性： 人參皂苷 Rb2可中等程度抑制貓的行為和腦電，并抑制電刺激貓所引起的腦電覺(jué)醒反應(yīng)。 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 9 人參皂苷 Rb3 性質(zhì)： 白色粉末（甲醇 正丁醇）。還對(duì)大鼠局灶性腦缺血損傷有保護(hù)作用 [41]。 藥理活性： 人參皂苷 Rc 對(duì) BaCl2引起的大鼠心律不齊有一定抵抗作用；對(duì)血壓有雙向性作用；抗疲勞；鈣拮抗；促進(jìn) 皮質(zhì)酮血漿分泌。 人參皂苷 Re 性質(zhì)： 無(wú)色針狀晶體（ 50%乙醇）。人參皂苷 Re 能有效改善大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的作用 [42]。 無(wú)色針狀 晶體（ 50%乙醇）。 人參皂苷 Rg1 性質(zhì)： 結(jié)晶性粉末（正丁醇 甲基乙基酮或甲酸乙酯）。其乙?；锶苡诩状肌⑦拎?、熱丙酮，稍溶于乙酸乙酯及氯仿。劉單 [46]， 通過(guò)開闊實(shí)驗(yàn)、斜板實(shí)驗(yàn)、爬桿試驗(yàn)、牽引實(shí)驗(yàn)觀察研究表明 Rg1可劑量依賴性地改善老年動(dòng)物衰退的行為活動(dòng)功能。 人參皂苷 Rg2 具有雙向調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮與抑制過(guò)程，影響腦內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，促進(jìn)需氧代謝，影響神經(jīng)遞質(zhì)合成及減少氧自由基的產(chǎn)生等作用，能減少 Glu 的胞內(nèi)合成，降低Glu、 NR1 和 NR2B 在神經(jīng)細(xì)胞中的表達(dá)，使 NMDAR 親和力下降，減少 Glu 與 NMDAR的結(jié)合，降低其興奮毒性，減少 Ca2+的內(nèi)流，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞 ［ 41］ ，從而具有改善學(xué)習(xí)記憶的作用 ，其更詳細(xì)機(jī)制尚需深入探討。為了進(jìn)一步研究五靈脂與人參配伍的化學(xué)變化，所以對(duì)五靈脂也進(jìn)行了化學(xué)成分研究，以期從中找到有活性的天然產(chǎn)物，為其藥理研究奠定基礎(chǔ)，也為分析人參五靈脂配伍禁忌打下物質(zhì)基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)儀器 HH6B 數(shù)顯恒溫水浴鍋 RE52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 電子天平 予華牌循環(huán)水真空泵 電磁爐 HJ6型多頭磁力加熱攪拌器 泰特牌 上海亞榮生化儀器廠 余姚紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司 河南鞏義市英峪予華儀器廠 美的電磁爐 江蘇省金 壇市榮華儀器制造有限公司 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 12 實(shí)驗(yàn)試劑 提取 圖 21 五靈脂提取流程圖 Faeces Trogopterpri extract Flow Chat 采用水提醇沉法，取干燥五靈脂加入 8 倍量的蒸餾水浸泡 45min，沸水煮提 3 次，每次 2 小時(shí)。 蒸餾水 乙醇 （分析純 ） 石油醚（分析純 ） 三氯甲烷 （分析純 ） 乙酸乙酯 （分析純 ） 正丁醇 （分析純 ） 丙酮 （分析純 ） 甲醇 （分析純 ） 薄層層析硅膠（化學(xué)純 G） 羧甲基纖維素鈉（分析純 ） 柱層層析硅膠（試劑級(jí)） 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)蒸餾水室 北京化工廠 天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司 北京化工廠 北京化工廠 北京化工廠 北京化工廠 北京化工廠 青島海洋化工有限公司 天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所 青島海洋化工有限公司 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 五靈脂與人參配伍化學(xué)成分及體外藥理活性 變化研究 13 將醇提物依次用石油醚，三氯甲烷，乙酸乙酯，正丁醇反復(fù)萃 取至無(wú)色， 合并各層提取液并減壓濃縮，分別得到五靈脂石油醚層提取物、三氯甲烷層提取物、乙酸乙酯層提取物、正丁醇層提取物。 結(jié)果與分析 化合物 Ⅰ ：無(wú) 色針狀晶體（三氯甲烷），薄層鑒定，與 β谷甾醇標(biāo)準(zhǔn)品在不同溶劑系統(tǒng)下展開， Rf 值、顯色均一致，且混合后熔點(diǎn)不下降，故確定化合物 Ⅰ 為 β谷甾醇（ C29H50O）。 加入 4mL苯 － 石油醚（ 1∶ 1）混合溶劑 于 油狀物中使之溶解，將其置于 25mL具塞試管中，再加入 min1升至 200℃ ， 再以 1℃ 以 峰 面積歸一法定量分析各成分的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，按上述 GCMS分析條件對(duì) 五靈脂 成分進(jìn)行分析，得其總離子流圖如圖 22所示。 表 22 五靈脂非脂肪酸成分組分及相對(duì)含量 Table22 Results of GCMS analysis of no liposoluble constituent of Faeces Trogopterori 序號(hào) 化合物名稱 分子式 分子量 相對(duì)含。 表 21 五靈脂脂肪酸成分組分及相對(duì)含量 Table21 Results of GCMS a