蛋白質(zhì)測定方法之雙縮脲法(biuret法)-wenkub
2024-11-17 22 本頁面
【正文】 要有：硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等。在強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物，稱為雙縮脲反應(yīng)。凡具有兩個酰胺基或兩個直接連接的肽鍵，或能過一個中間碳原子相連的肽鍵，這類化合物都有雙縮脲反應(yīng)。此法的優(yōu)點(diǎn)是較快速，不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近，以及干擾物質(zhì)少。如有需要，標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)還可預(yù)先用微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，計(jì)算出其純度，再根據(jù)其純度，稱量配制成標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液。若貯存瓶中有黑色沉淀出現(xiàn)，則需要重新配制。用未加蛋白質(zhì)溶液的第一支試管作為空白對照液。三、Folin—酚試劑法（Lowry法）（一）實(shí)驗(yàn)原理這種蛋白質(zhì)測定法是最靈敏的方法之一。Folin—酚試劑中的磷鉬酸鹽—磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。這個測定法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多，缺點(diǎn)是費(fèi)時間較長，要精確控制操作時間，標(biāo)準(zhǔn)曲線也不是嚴(yán)格的直線形式，且專一性較差，干擾物質(zhì)較多。濃度較低的尿素（%），硫酸納（1%），硝酸納（1%），三氯乙酸（%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（%）等溶液對顯色無影響，但這些物質(zhì)濃度高時，必須作校正曲線。此法也適用于酪氨酸和色氨酸的定量測定。溶解于500毫升蒸餾水中。稀釋至1升，過濾，濾液置于棕色試劑瓶中保存。（1）可見光分光光度計(jì)（2）旋渦混合器（3）秒表（4）試管16支（三）操作方法：取16支大試管，1支作空白，3支留作未知樣品，
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