20xx年醫(yī)學專題—流式細胞術(shù)樣品制備(完整)-wenkub
2024-11-15 05 本頁面
【正文】 l加入盛有被消化組織的試管中。ng)的限制性，特別是在進行免疫標記實驗時，酶處理可能改變細胞膜的成分，從而影響細胞亞群的區(qū)分。 ﹡三是可以水解組織間的粘多糖物質(zhì)。,⒈酶消化法 酶對實體組織分散作用原理主要有三方面： ﹡一是可以破壞組織間的膠原。)目的而采取的樣品，此樣品應及時進行適當?shù)谋４嫣幚恚缂皶r用固定劑或低溫對組織進行保存，以避免由于室溫過高、放置時間過長而造成組織自溶，影響檢測(jiǎn c232。i) 操作步驟： 離心去除舊培養(yǎng)液，PBS液洗滌細胞一次，離心去掉上清液，約留0.5ml細胞懸液，用振蕩器使細胞分散。 如果不是及時上機檢測，則需要對細胞進行固定，常規(guī)固定液為70%乙醇，然后保存于4℃冰箱中。,一、單層培養(yǎng)細胞(x236。d236。流式細胞術(shù)的樣品(y224。ng)，并可以根據(jù)細胞亞群的特點性質(zhì)對其進行分類的技術(shù)。bāo)分散為單個細胞(x236。,第三頁，共三十一頁。 如果不是及時上機檢測，則需要對細胞進行固定，常規(guī)固定液為70%乙醇，然后保存于4℃冰箱中。)結(jié)果。 ﹡二是可以水解組織細胞的緊密連結(jié)裝置的蛋白性物質(zhì)(w249。 酶消化法是實體組織分散為單細胞的主要方法，常用的酶類試劑有： ? 蛋白酶類，(如胃蛋白酶，木瓜蛋白酶，鏈蛋白酶和中性蛋白酶等)都能夠釋放所有組織中的細胞； ? 胰酶，能水解脂鍵和肽鍵； ? 膠原酶，能降解幾種分子類型的膠原； ? 溶菌酶，能水解糖蛋白和肽的糖苷鍵； ? 彈性蛋白酶，能消化連接組織的糖蛋白和彈性蛋白的纖維，可用于解離血管、心臟和肝臟的細胞。應指出，用于組織分散的很多酶是不夠純的，不僅含有一種占主導的酶，而且在不同程度上也混有其他污染物質(zhì)，它們的活性可能有利于組織分散，也可能對組織的結(jié)構(gòu)或功能產(chǎn)生不利的影響。 ③一般消化2030分鐘(恒溫37186。,第九頁，共三十一頁。,第十頁，共三十一頁。 ④用吸管吸取組織勻漿，先以100目尼龍網(wǎng)過濾到試管中。n)固定，放入4℃冰箱。 ③用300目的尼龍網(wǎng)過濾細胞懸液除去大的團塊 ④收集細胞懸液，離心沉淀1000prm，5分鐘。 ②放入組織研磨器中，加入12ml生理鹽水。xīn)沉淀500800prm，12分鐘，再用生理鹽水洗三次，離心(l237。o)原理是將細胞間起粘連作用 的鈣鎂離子置換出來，從而使細胞分散下來。 各取40ml混合，分裝置冰箱保存，用時過濾既可。n)放入試管。 ⑤70%乙醇固定置冰箱中被檢。n)和細胞叢結(jié)的量不穩(wěn)定，因此，化學試劑處理方法不單獨使用，可與其他方法聯(lián)合使用。,注意事項： Ⅰ新鮮組織標本應及時進行保存，以免組織在室溫下放置時間過長，造成細胞自溶導致DNA降解，影響FCM測定結(jié)果。 Ⅳ需注意不同的組織選用適當?shù)姆椒?，如富于細胞的腫瘤(淋巴瘤、視神經(jīng)母細胞瘤、腦瘤、未分化癌、髓樣癌以及一些軟組織肉瘤)不一定要用酶學或化學法，往往用單獨的機械法就可以收到大量單分散細胞。 ②將切取的組織片放入試管中。 ⑤消化：加入2ml 0.5%胃蛋白酶(pH值1.52.0)置37℃恒溫水浴中消化30分鐘，消化期間每隔10分鐘振蕩一次。 ⑦經(jīng)300目尼龍網(wǎng)過濾，未消化完的組織片可
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