20xx核酸檢測(cè)基本知識(shí)-wenkub
2024-10-17 10 本頁(yè)面
【正文】 和預(yù)防、法醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的核酸檢測(cè)。RNA平均長(zhǎng)度大約為2000個(gè)核苷酸，而人的DNA卻是很長(zhǎng)的，約有3X10^9個(gè)核苷酸。核酸具有非常重要的生物功能，主要是貯存遺傳信息和傳遞遺傳信息。核酸大分子可分為兩類：脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。在蛋白質(zhì)的復(fù)制和合成中起著儲(chǔ)存和傳遞遺傳信息的作用。目前主要使用的方法有以下幾種：NASBA是由一對(duì)引物介導(dǎo)的、連續(xù)均一的、體外特異性核苷酸序列等溫?cái)U(kuò)增RNA的新技術(shù)。雙鏈DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,經(jīng)其啟動(dòng)子序列起動(dòng)而轉(zhuǎn)錄RNA，RNA又可在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下反轉(zhuǎn)錄成DNA，進(jìn)入循環(huán)相,對(duì)模板進(jìn)行大量擴(kuò)增。它的原理就是由2段寡核苷酸單鏈DNA探針與目標(biāo)序列雜交,當(dāng)該2段DNA探針與沒(méi)有發(fā)生突變的模板褪火后,如果2探針是緊鄰的,中間沒(méi)有核苷酸間隔,則可在連接酶作用下連接起來(lái),連接以后的新鏈又可以作為模板,引導(dǎo)下一周期的連接產(chǎn)生新的子鏈。①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備。檢測(cè)HIVRNA,需要先利用逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)將RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA，繼而以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增即可，這樣的反應(yīng)稱為RTPCR。發(fā)出的熒光可以被熒光探頭檢測(cè)到,一邊擴(kuò)增,一邊檢測(cè),這樣就實(shí)現(xiàn)了“實(shí)時(shí)”檢測(cè)。將HIV的RNA通過(guò)離心從病毒顆粒中釋放出來(lái),然后用捕獲探針1將其捕獲到微孔中。在微孔中形成HIVRNA寡核苷酸復(fù)合物。bDNA有數(shù)十個(gè)覆蓋整個(gè)基因
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