農(nóng)產(chǎn)品分析3-2-wenkub
2023-03-20 13:53:25 本頁(yè)面
【正文】 為磺酸型 Na+柱），氨基酸與樹脂中的交換基團(tuán)進(jìn)行離子交換，當(dāng)用不同的 PH值的緩沖溶液進(jìn)行洗脫時(shí)，因交換能力不同而將氨基酸混合物分開。? 有關(guān)氨基酸的測(cè)定方法很多，近些年來(lái)氨基酸分析采用了一系列微量分析及高效率的分離方法。氨基酸的測(cè)定?必需氨基酸的種類、數(shù)量及構(gòu)成比例，越接近機(jī)必需氨基酸的種類、數(shù)量及構(gòu)成比例，越接近機(jī)體合成蛋白質(zhì)所需的各種氨基酸的量及其組成則機(jī)體體合成蛋白質(zhì)所需的各種氨基酸的量及其組成則機(jī)體對(duì)氨基酸的利用率越高。對(duì)嬰兒來(lái)說(shuō)，組氨酸也是必需氨基酸 。若缺乏這些氨基酸，人與動(dòng)物不僅不能發(fā)育，還會(huì)引起某些疾病，而這些氨基酸在貯存和加工過(guò)程中極易損失破壞。全氨基酸和個(gè)別氨基酸的分析測(cè)定是研究蛋白質(zhì)、酶的化學(xué)組成及性質(zhì)的重要手段。 氨基酸分析 生物學(xué)及農(nóng)業(yè)科學(xué)的許多領(lǐng)域都需要分析氨基酸，在評(píng)價(jià)谷物的蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值時(shí)需要測(cè)定游離氨基酸及蛋白質(zhì)中氨基酸的組成。動(dòng)植物產(chǎn)品中的氨基酸以多種形式存在，大致可分為構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸和游離氨基酸兩種。測(cè)定它們的含量已成為衡量谷物、飼料蛋白質(zhì)的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。對(duì)氨基酸的利用率越高。氨基酸分析方法包括測(cè)定氨基酸總含量及測(cè)定全氨基酸中每種氨基酸含量?jī)蓚€(gè)方面。 例如，薄層層析、氣相色譜、液相色譜、氨基酸自動(dòng)分析儀等方法。178。178。? 其中：屬于芳香族氨基酸的是： 色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸 屬于亞氨基酸： 脯氨酸 178。內(nèi)標(biāo)法 :內(nèi)標(biāo)法是將一定量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物 ,加入到準(zhǔn)確稱量的試樣中 ,根據(jù)被測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量及在色譜圖的峰面積或峰高的變化 ,就可以看出標(biāo)準(zhǔn)品和樣品進(jìn)樣體積的差別。l 測(cè)定樣品處理 除去脂肪等雜質(zhì)后的待測(cè)樣品，可直接上柱分析。一般為每種氨基酸 右 (水解樣品干重約 )。? 流速 :。? 緩沖液的 pH與 Na+濃度 溶液的 pH值和鈉離子濃度對(duì)氨基酸的分離有很大關(guān)系，配制不當(dāng)會(huì)影響峰的位置，甚至?xí)箓€(gè)別氨基酸丟失，因此應(yīng)特別精心配制。因此，除氨柱可重復(fù)連續(xù)使用。? 定量測(cè)定的依據(jù) 是氨基酸和茚三酮反應(yīng)生成 紫色化合物 。氨基酸總量 (氨態(tài)氮 )的測(cè)定178。由于這二個(gè)基的相互作用，使氨基酸成為中性的內(nèi)鹽。 。記錄兩次滴定所消耗的堿液毫升數(shù)，用下述公式計(jì)算計(jì)算：V100 V： NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗的總量 (m1) W：樣品溶液相當(dāng)樣品重量 (克 )。與單色法相同，只是在此法中使用了兩種指示劑。試劑：三種試劑同單指示劑法 ％中性紅 (50％乙醇溶液 ) 操作步驟： 取相同的兩份樣品，分別注入 100毫升三角燒瓶中，一份加入中性紅指示劑 23滴，用 NaOH溶液滴定終點(diǎn) (由紅變琥珀色 )，記錄用量，另一份加入麝香草酚酞 3滴和中性甲醛 20ml，搖勻，以 藍(lán)色。 計(jì)算： 氨基酸態(tài)氮 (％ )=[ N(V2V1)]/W100式中： V2：用麝香草酚酞為指示劑時(shí)標(biāo)準(zhǔn)堿液消耗量 (毫升） V1：用中性紅作指示劑時(shí)堿液的消耗量 (m1)。注意事項(xiàng)：178。 國(guó)內(nèi)外應(yīng)用最廣的分析方法有 : 三硝基苯磺酸法、 2氯 3,5二硝基吡啶法、離子交換色譜法 (氨基酸自動(dòng)分析儀法 ) 、 DBL法。 DBL法的原理 在較強(qiáng)酸性 (pH值 23)條件下 ,樣品蛋白質(zhì)中的 3種堿性氨基酸 ,即賴氨酸、組氨酸和精氨酸可與酸性橙 12染料 (AO12,一種單磺酸鹽 )分子結(jié)合 ,生成不溶性絡(luò)合物， 其染料的被結(jié)合量相當(dāng)于賴氨酸、組氨酸和精氨酸的總和 ；178。O賴氨酸的 174。234。e—HN—C—CH2—CH3CH3—CH2—COOH 如果剩余染料溶液的濃度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍時(shí)稱樣量應(yīng)作適當(dāng)調(diào)整。 稱樣量是保證 DBL法準(zhǔn)確度的關(guān)鍵 ，且?；c否的兩份樣品的稱樣量也必須是不等的， ?；瘶悠返姆Q樣量應(yīng)大約為不酰化樣品的 ，谷物飼料中，約 .216。216。216。216。色氨酸的測(cè)定 —— 乙醛酸法 色氨酸也是重要的必需氨基酸之一。它已被公認(rèn)為 “ 第二限制性氨基酸 ” 。? 方法原理? 谷物中蛋白質(zhì)經(jīng) 木瓜蛋白酶 作用水解出色氨酸，然后在 濃硫酸及微量 Fe3+（可將乙酸氧化為乙醛酸）存在的情況下，2mol色氨酸能與 1m
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