轉染技術原理及應用-wenkub
2022-08-11 22:42:07 本頁面
【正文】 解的PEI衍生物。目前在設計更復雜的基因載體時，PEI經常做為核心組成成分。其中樹枝狀聚合物（Dendrimers）和聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的轉染性能最佳，但樹枝狀聚合物的結構不易于進一步改性，且其合成工藝復雜。一些傳統(tǒng)的轉染技術，如DEAE右旋糖苷法，磷酸鈣法，電穿孔法，脂質體法各有利弊，其主要原理及應用特點見下表：轉染方法原理應用特點磷酸鈣法磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞穩(wěn)定轉染瞬時性轉染不適用于原代細胞操作簡便但重復性差有些細胞不適用DEAE右旋糖苷法帶正電的DEAE右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞瞬時性轉染相對簡便、結果可重復但對細胞有一定的毒副作用轉染時需除血清電穿孔法高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入穩(wěn)定轉染瞬時性轉染所有細胞適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大， 需根據不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件病毒介導法通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中穩(wěn)定轉染可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等逆轉錄病毒特定宿主細胞但攜帶基因不能太大細胞需處分裂期需考慮安全因素腺病毒通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中瞬時轉染特定宿主細胞可用于難轉染的細胞需考慮安全因素陽離子脂質體法帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞穩(wěn)定轉染瞬時性轉染所有細胞適用性廣，轉染效率高，重復性好，但轉染時需除血清。后者也稱穩(wěn)定轉染，外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體（episome）存在。細胞轉染技術原理及應用常規(guī)轉染技術分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩(wěn)定轉染（永久轉染）。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。轉染效果隨細胞類型變化大Biolistic顆粒傳遞法將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞，DNA在胞內逐步釋放，表達瞬時性轉染可用于：人的表皮細胞，纖維原細胞，淋巴細胞系以及原代細胞顯微注射法用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核穩(wěn)定轉染瞬時性轉染轉染細胞數有限,多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞（各種轉染方法的比較）聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個碳個原子，即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(proton sponge)體。線型PEI（Line PEI,LPEI）與其衍生物用作基因轉染載體的研究比分枝狀PEI（Branched PEI,BPEI）要早一些，過去的研究認為在不考慮具體條件，LPEI/DNA轉染復合物的細胞毒性較低，有利于細胞定位，因此與BPEI相比應該轉染效率高一些。聚合物的分枝結構使得其具有較高的正電性，因此易于高效地包裹各種DNA、RNA分子及質粒形成小的納米顆粒，從而提高轉染效率，當所形成復合物進入細胞以后，其中所含的生理條件下可降解的化學鍵在細胞內水解，使交聯聚合物分解為無細胞毒性的小分子PEI，這樣結構的轉染試劑在體外應用可以獲得高的轉染效率和低的細胞毒性，其可降解性對體內應用也具有重要的意義。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的
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