轉(zhuǎn)染技術(shù)原理及應用-文庫吧在線文庫
【正文】 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染瞬時性轉(zhuǎn)染所有細胞適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大， 需根據(jù)不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件病毒介導法通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染可用于難轉(zhuǎn)染的細胞、原代細胞，體內(nèi)細胞等逆轉(zhuǎn)錄病毒特定宿主細胞但攜帶基因不能太大細胞需處分裂期需考慮安全因素腺病毒通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中瞬時轉(zhuǎn)染特定宿主細胞可用于難轉(zhuǎn)染的細胞需考慮安全因素陽離子脂質(zhì)體法帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染瞬時性轉(zhuǎn)染所有細胞適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復性好，但轉(zhuǎn)染時需除血清。目前在設計更復雜的基因載體時，PEI經(jīng)常做為核心組成成分。 轉(zhuǎn)染技術(shù)是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術(shù)。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。這會導致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細胞行為的變化。推薦在轉(zhuǎn)染前24小時分細胞，這將提供正常細胞代謝，增加對外源DNA攝入的可能。一般轉(zhuǎn)染時貼壁細胞密度為50%90%，但這個需要參考所選轉(zhuǎn)染試劑的說明書。（4）抗生素細胞培養(yǎng)過程中往往會添加抗生素來防止污染，但是這些添加劑可能對轉(zhuǎn)染造成麻煩。核酸純化世界第一品牌德國QIAGEN公司提供的超純質(zhì)粒抽提試劑盒，能達到兩倍2CsCl梯度離心以上的純度效果，使您不必為DNA質(zhì)量操心。轉(zhuǎn)染技術(shù)的要點及轉(zhuǎn)染試劑正確選擇轉(zhuǎn)染技術(shù)的要點及轉(zhuǎn)染試劑正確選擇轉(zhuǎn)染技術(shù)是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術(shù)，它是研究基因表達調(diào)控，突變分析等的常規(guī)工具。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細胞能整合，通常需要通過一些選擇性標記，如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細胞系。胎牛血清（FCS）經(jīng)常用到，便宜一點的有馬或牛血清。除載體構(gòu)建外，載體的形態(tài)及大小對轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋及線性DNA對瞬時和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。電穿孔法高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時性轉(zhuǎn)染，所有細胞 適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大，需根據(jù)不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件 陽離子性的脂質(zhì)體法帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染瞬時性轉(zhuǎn)染，所有細胞 適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復性好但轉(zhuǎn)染時需除血清轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大 病毒介導法逆轉(zhuǎn)錄病毒 通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，特定宿主細胞 可用于難轉(zhuǎn)染的細胞、原代細胞，體內(nèi)細胞等，但攜帶基因不能太大細胞需處分裂期，需考慮安全因素 ，腺病毒 瞬時轉(zhuǎn)染，特定宿主細胞 可用于難轉(zhuǎn)染的細胞，需考慮安全因素。核酸純化世界第一品牌德國QIAGEN公司提供的超純質(zhì)粒抽提試劑盒，能達到兩倍2x CsCl梯度離心以上的純度效果，使您不必為DNA質(zhì)量操心。有些轉(zhuǎn)染技術(shù)如脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染在有血清存在情況下效率很低，因此在轉(zhuǎn)染前要除血清。高的轉(zhuǎn)染效率需要一定的細胞密度，一般的轉(zhuǎn)染試劑都會有專門的說明。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析。4．載體構(gòu)建轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建（病毒載體，質(zhì)粒DNA，RNA，PCR產(chǎn)物，寡核苷酸
范文總結(jié)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1