【正文】 選舉出3種方法并簡述過程。典型的DNA重組實驗通常包括哪些步驟？a、提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個新的重組DNA分子。因此RNA聚合酶難以與其結合。 方法是分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反應后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。 利用雙脫氧末端終止法（Sanger法）測定DNA一級結構的原理與方法？原理是采用核苷酸鏈終止劑—2，3，雙脫氧核苷酸終止DNA的延長。 細胞融合物中包含：脾脾融合細胞：不能生長，脾細胞不能體外培養(yǎng)。e、根據基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件 4．舉例說明差示篩選組織特異cDNA的方法？制備兩種細胞群體，目的基因在其中一種細胞中表達或高表達，在另一種細胞中不表達或低表達，然后通過雜交對比找到目的基因。三、簡 答1． 分別說出5種以上RNA的功能？轉運RNA tRNA 轉運氨基酸 ；核蛋白體RNA rRNA 核蛋白體組成成 ；信使RNA mRNA 蛋白質合成模板 ；不均一核RNA hnRNA 成熟mRNA的前體 ；小核RNA snRNA 參與hnRNA的剪接；小胞漿RNA scRNA/7SLRNA 蛋白質內質網定位合成的信號識別體的組成成分；反義RNA anRNA/micRNA 對基因的表達起調節(jié)作用；核酶 Ribozyme RNA 有酶活性的RNA2．原核生物與真核生物啟動子的主要差別？原核生物TTGACA TATAAT起始位點 35 10真核生物增強子GC CAATTATAA—5mGpp—起始位點 110 70 253．對天然質粒的人工構建主要表現(xiàn)在哪些方面？天然質粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進行改造構建：a、加入合適的選擇標記基因，如兩個以上，易于用作選擇,通常是抗生素基因。24．質粒DNA具有三種不同的構型分別是：（ SC構型 ）、（ oc構型 ）、（ L構型 ）。 側切割產生539。21．RNA聚合酶Ⅱ的基本轉錄因子有、TFⅡA、TFⅡB、TFIID、TFⅡE他們的結合順序是： （ D、A、B、E ）。17．雜交瘤細胞系的產生是由（脾B）細胞與（骨髓瘤 ）細胞雜交產生的，由于（脾細胞）可以利用次黃嘌呤，（ 骨細胞 ）提供細胞分裂功能，所以能在HAT培養(yǎng)基中生長。14．PCR的反應體系要具有以下條件：a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的 DNA引物（約20個堿基左右）。②將這個重組DNA分子轉入受體細胞并在受體細胞中復制保存，這個過程稱為轉化。有G時轉錄從（ S2 ）開始，無G時轉錄從（ S1 ）開始。9．蛋白質多亞基形式的優(yōu)點是（亞基對DNA的利用來說是一種經濟的方法 ）、（可以減少蛋白質合成過程中隨機的錯誤對蛋白質活性的影響）、（活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關閉 ）。5．啟動子中的元件通?？梢苑譃閮煞N：（核心啟動子元件 ）和（上游啟動子元件 ）。二、填 空1． DNA的物理圖譜是DNA分子的（限制性內切酶酶解 ）片段的排列順序。17．順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對基因的表達起到調控作用的基因元件。15．考斯質粒：是經過人工構建的一種外源DNA載體，保留噬菌體兩端的COS區(qū)，與質粒連接構成。11．上游啟動子元件：是指對啟動子的活性起到一種調節(jié)作用的DNA序列，10區(qū)的TATA、35區(qū)的TGACA及增強子，弱化子等。9．弱化子：在操縱區(qū)與結構基因之間的一段可以終止轉錄作用的核苷酸序列。3．CAP：環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP與CRP結合后所形成的復合物稱激活蛋白CAP（cAMP activated protein ）4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互補序列，常是限制性酶切位點。分子生物學試題及答案一、名詞解釋1．cDNA與cccDNA：cDNA是由mRNA通過反轉錄酶合成的雙鏈DNA；cccDNA是游離于染色體之外的質粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。5．micRNA：互補干擾RNA或稱反義RNA，與mRNA序列互補，可抑制mRNA的翻譯。10．魔斑：當細菌生長過程中，遇到氨基酸全面缺乏時，細菌將會產生一個應急反應，停止全部基因的表達。12．DNA探針：是帶有標記的一段已知序列DNA，用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應用。16．藍白斑篩選：含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物Xgal(5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷)產生藍色，從而使菌株變藍。18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了5’ → 3’外切酶活性19．錨定PCR：用于擴增已知一端序列的目的DNA。2． RNA酶的剪切分為（自體催化 ）、（異體催化 ）兩種類型。6．分子生物學的研究內容主要包含（結構分子生物學 ）、（基因表達與調控 ）、（ DNA重組技術 ）三部分。10．蛋白質折疊機制首先成核理論的主要內容包括（成核 ）、（結構充實）、（最后重排）。12．DNA重組技術也稱為（基因克?。┗颍ǚ肿涌寺?）。③對那些吸收了重組DNA的受體細胞進行篩選和鑒定。b、具有熱穩(wěn)定性的酶如：TagDNA聚合酶。18．隨著研究的深入第一代抗體稱為（多克隆抗體）、第二代（單克隆抗體）、第三代（基因工程抗體 ）。其中TFIID的功能是（與TATA盒結合 ）。 粘端 ）、（在對稱軸339。在電泳中最前面的是（ SC構型 ）。b、增加或減少合適的酶切位點，便于重組。 例如：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤細胞會呈現(xiàn)與正常細胞表達水平不同的mRNA，因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關的基因。骨骨融合細胞：不能利用次黃嘌呤，但可通過第二途 徑利用葉酸還原酶合成嘌呤。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3OH，一旦參入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進一步延長。 激活蛋白（CAP）對轉錄的正調控作用？環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMP receptor protein），cAMP與CRP結合后所形成的復合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivated protein ）。 CAP的存在（功能）：能顯著提高酶與啟動子結合常數。 b、將這個重組DNA分子轉入受體細胞并在受體細胞中復制保存，這個過程稱為轉化。抗生素抗性篩選、抗性的插入失活、蘭白斑篩選 或PCR篩選、差式篩選、DNA探針 多數克隆載體均帶有抗生素抗性基因（抗氨芐青霉素、四環(huán)素）。 如pUC質粒含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物Xgal(5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷)產生藍色，從而使菌株變藍。ES在無飼養(yǎng)層中培養(yǎng)時會分化為肌細胞、N細胞等多種功能細胞，在含有成纖維細胞中培養(yǎng)時ES將保持分化功能。2．密碼子(codon)：mRNA中堿基順序與蛋白質中氨基酸順序的對應關系是通過密碼實現(xiàn)的， mRNA中每三個相鄰的堿基決定一個氨基酸，這三個相鄰的堿基稱為一個密碼子。6．移碼突變(frameshift mutation)：在mRNA中，若插入或刪去一個核苷酸，就會使讀碼發(fā)錯誤，稱為移碼，由于移碼而造成的突變、稱移碼突變。(二)問答題1．參與蛋白質生物合成體系的組分有哪些?它們具有什么功能?①mRNA：蛋白質合成的模板；②tRNA：蛋白質合成的氨基酸運載工具；③核糖體：蛋白質合成的場所；④輔助因子：(a)起始因子—參與蛋白質合成起始復合物形成；(b)延長因子—肽鏈的延伸作用；(c)釋放因子一終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來。 (2)密碼不重疊：組成一個密碼的三個核苷酸只代表一個氨基酸，只使用一次，不重疊使用。 (6)起始密碼子AUG，同時也代表Met，終止密碼子UAA、UAG、UGA使用頻率不同。 (3)rRNA 核糖體的組分，在形成核糖體的結構和功能上起重要作用，它與核糖體中蛋白質以及其它輔助因子一起提供了翻譯過程所需的全部酶活性。6．氨基酸在蛋白質合成過程中是怎樣被活化的?催化氨基酸活化的酶稱氨酰tRNA合成酶，形成氨酰tRNA，反應分兩步進行： (1)活化 需Mg2+和Mn2+，由ATP供能，由合成酶催化，生成氨基酸AMP酶復合物。 (2)肽鏈合成的起始：由起始因子參與，mRNA與30S小亞基、50S大亞基及起始甲酰甲硫氨酰tRNA(fMettRNAt)形成70S起始復合物，整個過程需GTP水解提供能量。8．蛋白質合成中如何保證其翻譯的正確性?提示：(1)氨基酸與tRNA的專一結合，保證了tRNA攜帶正確的氨基酸；(2)攜帶氨基酸的tRNA對mRNA的識別，mRNA上的密碼子與tRNA上的反密碼子的相互識別，保證了遺傳信息準確無誤地轉譯；(3)起始因子及延長因子的作用，起始因子保證了只有起始氨酰tRNA能進入核糖體P位與起始密碼子結合，延伸因子的高度專一性，保證了起始tRNA攜帶的fMet不進入肽鏈內部；(4)核糖體三位點模型的E位與A位的相互影響，可以防止不正確的氨酰tRNA進入A位，從而提高翻譯的正確性；(5)校正作用：氨酰tRNA合成酶和tRNA的校正作用；對占據核糖體A位的氨酰tRNA的校對；變異校對即基因內校對與基因間校對等多種校正作用可以保證翻譯的正確。11．蛋白質的高級結構是怎樣形成的? 提示：蛋白質的高級結構是由氨基酸的順序決定的，不同的蛋白質有不同的氨基酸順序，各自按一定的方式折疊而成該蛋白質的高級結構。利用放射性同位素標記法，通過核糖體的分離證明之。 Val: GUU GUC GUA GUG Arg: CGU CGC CGA CG AGA AGG正常肽段的核苷酸序列為：AUG GUA UGC GU… CG…；突變體肽段的核苷酸序列為：AUG GCU AUG CGU 。DNARNA一級結構Primary structure核苷酸序列AGTTCT 或AGUUCU 的排列順序3，5， 磷酸二酯鍵氨基酸排列順序肽鍵二級結構Secondarystructure超螺旋多條肽鏈（或不同蛋白）15. 試比較原核生物與真核生物的翻譯。氨酰tRNA __為原料直接供體，以__核糖體_____為合成楊所。5．延長因子T由Tu和Ts兩個亞基組成，Tu為對熱___不穩(wěn)定___蛋白質，Ts為對熱__ 穩(wěn)定_蛋白質。9．原核細胞核糖體的____小___亞基上的 ___16SrRNA_______協(xié)助辨認起始密碼子。13．原核生物的核糖體由_____30S_______小亞基和____50S________大亞基組成，真核生物核糖體由___40S______小亞基和_______60S________大亞基組成。 ①從C→N端 ②定點雙向進行 ③從N端、C端同時進行 ④從N→C端2．不能合成蛋白質的細胞器是( ③ )。 ①A、G ②C、U ③U ④U、C、A 6．蛋白質合成所需能量來自( ③ )。 ①肽基轉移酶形成肽鍵 ②氨酰一tRNA與核糖體的“A，’位點結合 ③核糖體沿mRNA移動 ④fMet—tRNAf與mRNA的起始密碼子結合以及與大、小亞基的結合10．在真核細胞中肽鏈合成的終止原因是( ④ )。 ①氨基酸必須活化 ②需要消耗能量 ③每延長一個氨基酸必須經過進位、轉肽、移位、稅落四個步驟 ④合成肽鏈由C端向N端不斷延長 ⑤新生肽鏈需加工才能成為活性蛋白質15．下列哪些內容屬于蛋白質合成后的加工、修飾( ②③④⑤ )。端富含嘧啶的互補順序 ④啟動基因的順序特征 ⑤以上都正確19.( √ )3．每—種氨基酸都有兩種以上密碼子。( )7．大腸桿菌的核糖體的大亞基必須在小亞存在時，才能與mRNA結合。( √ )11．每種氨基酸只能有一種特定的tRNA與之對應。( √ )15．核糖體的活性中心“A”位和“P”位都主要在大亞基上。2．半保留復制(簡稱復制)（semicons