【正文】 codon)：為同—種氨基酸編碼的各個密碼子，稱為同義密碼了。2．密碼子(codon)：mRNA中堿基順序與蛋白質中氨基酸順序的對應關系是通過密碼實現(xiàn)的， mRNA中每三個相鄰的堿基決定一個氨基酸，這三個相鄰的堿基稱為一個密碼子。向胚胎干細胞導入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宮，發(fā)育成幼鼠，雜交獲得純合鼠。ES在無飼養(yǎng)層中培養(yǎng)時會分化為肌細胞、N細胞等多種功能細胞，在含有成纖維細胞中培養(yǎng)時ES將保持分化功能。 說明通過胚胎干細胞獲得轉基因動物的基本過程？胚胎干細胞（embryonic stem cell,ES）：是胚胎發(fā)育期的胚細胞，可以人工培養(yǎng)增殖并具有分化成其它類型細胞的功能。 如pUC質粒含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物Xgal(5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷)產(chǎn)生藍色，從而使菌株變藍。但不能區(qū)分是否已重組?？股乜剐院Y選、抗性的插入失活、蘭白斑篩選 或PCR篩選、差式篩選、DNA探針 多數(shù)克隆載體均帶有抗生素抗性基因（抗氨芐青霉素、四環(huán)素）。 d、對含有重組DNA的細胞進行大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達。 b、將這個重組DNA分子轉入受體細胞并在受體細胞中復制保存，這個過程稱為轉化。②CAP還能抑制RNA聚合酶與DNA中其它位點的結合，從而提高與其特定啟動子結合的概率。 CAP的存在（功能）：能顯著提高酶與啟動子結合常數(shù)。一些依賴于CRP的啟動子缺乏一般啟動子所具有的典型的35區(qū)序列特征（TTGACA）。 激活蛋白（CAP）對轉錄的正調控作用？環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMP receptor protein），cAMP與CRP結合后所形成的復合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivated protein ）。根據(jù)這一方法，就可得到一組以ddNTP結尾的長短不一的DNA片段。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3OH，一旦參入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進一步延長。骨脾融合細胞：在HAT中能生長，脾細胞可以利用次黃嘌呤，骨細胞提供細胞分裂功能。骨骨融合細胞：不能利用次黃嘌呤，但可通過第二途 徑利用葉酸還原酶合成嘌呤。 5．雜交瘤細胞系的產(chǎn)生與篩選？脾B細胞+骨髓瘤細胞，加聚乙二醇（PEG）促進細胞融合，HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)（內含次黃嘌呤、氨基蝶呤、T）生長出來的脾B骨髓瘤融合細胞繼續(xù)擴大培養(yǎng)。 例如：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤細胞會呈現(xiàn)與正常細胞表達水平不同的mRNA，因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關的基因。d、改變復制子，變嚴緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。b、增加或減少合適的酶切位點，便于重組。26．轉基因動物常用的方法有：（逆轉錄病毒感染法）、（DNA顯微注射法）、（胚胎干細胞法 ）。在電泳中最前面的是（ SC構型 ）。 粘端）（在對稱軸處切割產(chǎn)生平段）。 粘端 ）、（在對稱軸339。23．限制性內切酶的切割方式有三種類型分別是（在對稱軸539。其中TFIID的功能是（與TATA盒結合 ）。20．哺乳類RNA聚合酶Ⅱ啟動子中常見的元件TATA、GC、CAAT所對應的反式作用蛋白因子分別是（ TFIID ）、（ SP1 ）和（ CTF/NF1 ）。18．隨著研究的深入第一代抗體稱為（多克隆抗體）、第二代（單克隆抗體）、第三代（基因工程抗體 ）。1轉基因動物的基本過程通常包括：①將克隆的外源基因導入到一個受精卵或胚胎干細胞的細胞核中；②接種后的受精卵或胚胎干細胞移植到雌性的子宮；③完成胚胎發(fā)育，生長為后代并帶有外源基因；④利用這些能產(chǎn)生外源蛋白的動物作為種畜，培育新的純合系。b、具有熱穩(wěn)定性的酶如：TagDNA聚合酶。1質粒的復制類型有兩種：受到宿主細胞蛋白質合成的嚴格控制的稱為（嚴緊型質粒 ），不受宿主細胞蛋白質合成的嚴格控制稱為（ 松弛型質粒 ）。③對那些吸收了重組DNA的受體細胞進行篩選和鑒定。典型的DNA重組實驗通常包含以下幾個步驟：①提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個新的重組DNA分子。12．DNA重組技術也稱為（基因克隆）或（分子克隆 ）。所以需要一個不依賴于cAMP—CRP的啟動子S2進行本底水平的永久型合成；同時需要一個依賴于cAMP—CRP的啟動子S1對高水平合成進行調節(jié)。10．蛋白質折疊機制首先成核理論的主要內容包括（成核 ）、（結構充實）、（最后重排）。8．hnRNA與mRNA之間的差別主要有兩點：（ hnRNA在轉變?yōu)閙RNA的過程中經(jīng)過剪接，）、（ mRNA的5′末端被加上一個m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一個多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。6．分子生物學的研究內容主要包含（結構分子生物學 ）、（基因表達與調控 ）、（ DNA重組技術 ）三部分。4．蛋白質的跨膜需要（ 信號肽 ）的引導，蛋白伴侶的作用是（輔助肽鏈折疊成天然構象的蛋白質）。2． RNA酶的剪切分為（自體催化 ）、（異體催化 ）兩種類型。20．融合蛋白：真核蛋白的基因與外源基因連接，同時表達翻譯出的原基因蛋白與外源蛋白結合在一起所組成的蛋白質。18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了5’ → 3’外切酶活性19．錨定PCR：用于擴增已知一端序列的目的DNA。稱之為藍白斑篩選。16．藍白斑篩選：含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物Xgal(5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷)產(chǎn)生藍色，從而使菌株變藍。14．單克隆抗體：只針對單一抗原決定簇起作用的抗體。12．DNA探針：是帶有標記的一段已知序列DNA，用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應用。PpGpp與pppGpp的作用不只是一個或幾個操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級調控子或稱為魔斑。10．魔斑：當細菌生長過程中，遇到氨基酸全面缺乏時，細菌將會產(chǎn)生一個應急反應，停止全部基因的表達。7．模體：蛋白質分子空間結構中存在著某些立體形狀和拓撲結構頗為類似的局部區(qū)域8．信號肽：在蛋白質合成過程中N端有15~36個氨基酸殘基的肽段，引導蛋白質的跨膜。5．micRNA：互補干擾RNA或稱反義RNA，與mRNA序列互補，可抑制mRNA的翻譯。幾乎所有的三級結構都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來予以描述，因此又將其稱為標準折疊單位。分子生物學試題及答案一、名詞解釋1．cDNA與cccDNA：cDNA是由mRNA通過反轉錄酶合成的雙鏈DNA；cccDNA是游離于染色體之外的質粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。2．標準折疊單位：蛋白質二級結構單元α－螺旋與β－折疊通過各種連接多肽可以組成特殊幾何排列的結構塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級結構。3．CAP：環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP與CRP結合后所形成的復合物稱激活蛋白CAP（cAMP activated protein ）4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互補序列，常是限制性酶切位點。6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工過程中起到自我催化的作用。9．弱化子：在操縱區(qū)與結構基因之間的一段可以終止轉錄作用的核苷酸序列。產(chǎn)生這一應急反應的信號是鳥苷四磷酸(ppGpp)和鳥苷五磷酸（pppGpp）。11．上游啟動子元件：是指對啟動子的活性起到一種調節(jié)作用的DNA序列，10區(qū)的TATA、35區(qū)的TGACA及增強子，弱化子等。13．SD序列：是核糖體與mRNA結合序列，對翻譯起到調控作用。15．考斯質粒：是經(jīng)過人工構建的一種外源DNA載體，保留噬菌體兩端的COS區(qū)，與質粒連接構成。當外源DNA插入后，LacZ基因不能表達，菌株呈白色，以此來篩選重組細菌。17．順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對基因的表達起到調控作用的基因元件。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分別用多聚dC和已知的序列作為引物進行PCR擴增。二、填 空1． DNA的物理圖譜是DNA分子的（限制性內切酶酶解 ）片段的排列順序。3．原核生物中有三種起始因子分別是（IF1）、（ IF2 ）和（IF3 ）。5．啟動子中的元件通?？梢苑譃閮煞N：（核心啟動子元件 ）和（上游啟動子元件 ）。7．證明DNA是遺傳物質的兩個關鍵性實驗是（肺炎球菌感染小鼠 ）、（ T2噬菌體感染大腸桿菌 ）這兩個實驗中主要的論點證據(jù)是：（生物體吸收的外源DNA改變了其遺傳潛能 ）。9．蛋白質多亞基形式的優(yōu)點是（亞基對DNA的利用來說是一種經(jīng)濟的方法 ）、（可以減少蛋白質合成過程中隨機的錯誤對蛋白質活性的影響）、（活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關閉 ）。 11．半乳糖對細菌有雙重作用；一方面（可以作為碳源供細胞生長 ）；另一方面（它又是細胞壁的成分 ）。有G時轉錄從（ S2 ）開始，無G時轉錄從（ S1 ）開始。最終目的是（把一個生物體中的遺傳信息DNA轉入另一個生物體）。②將這個重組DNA分子轉入受體細胞并在受體細胞中復制保存，這個過程稱為轉化。④對含有重組DNA的細胞進行大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達。14．PCR的反應體系要具有以下條件：a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的 DNA引物（約20個堿基左右）。c、dNTPd、作為模板的目的DNA序列15．PCR的基本反應過程包括：（變性）、（退火）、（延伸 ）三個階段。17．雜交瘤細胞系的產(chǎn)生是由（脾B）細胞與（骨髓瘤 ）細胞雜交產(chǎn)生的，由于（脾細胞）可以利用次黃嘌呤，（ 骨細胞 ）提供細胞分裂功能，所以能在HAT培養(yǎng)基中生長。19．目前對昆蟲病毒的基因工程改造主要集中于桿狀病毒，表現(xiàn)在引入（外源毒蛋白基因 ）；（ 擾亂昆蟲正常生活周期的基因 ）；（ 對病毒基因進行修飾 ）。21．RNA聚合酶Ⅱ的基本轉錄因子有、TFⅡA、TFⅡB、TFIID、TFⅡE他們的結合順序是： （ D、A、B、E ）。22．與DNA結合的轉錄因子大多以二聚體形式起作用，轉錄因子與DNA結合的功能域常見有以下幾種（ 螺旋轉角螺旋 ）、（ 鋅指模體 ）、（堿性亮氨酸拉鏈模體 ）。 側切割產(chǎn)生539。 側切割產(chǎn)生339。24．質粒DNA具有三種不同的構型分別是：（ SC構型 ）、（ oc構型 ）、（ L構型 ）。25．外源基因表達系統(tǒng)，主要有（大腸桿菌 ）、（ 酵母）、（ 昆蟲 ）和（ 哺乳類細胞表 ）。三、簡 答1． 分別說出5種以上RNA的功能？轉運RNA tRNA 轉運氨基酸 ；核蛋白體RNA rRNA 核蛋白體組成成 ；信使RNA mRNA 蛋白質合成模板 ；不均一核RNA hnRNA 成熟mRNA的前體 ；小核RNA snRNA 參與hnRNA的剪接；小胞漿RNA scRNA/7SLRNA 蛋白質內質網(wǎng)定位合成的信號識別體的組成成分；反義RNA anRNA/micRNA 對基因的表達起調節(jié)作用；核酶 Ribozyme RNA 有酶活性的RNA2．原核生物與真核生物啟動子的主要差別？原核生物TTGACA TATAAT起始位點 35 10真核生物增強子GC CAATTATAA—5mGpp—起始位點 110 70 253．對天然質粒的人工構建主要表現(xiàn)在哪些方面？天然質粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進行改造構建：a、加入合適的選擇標記基因，如兩個以上，易于用作選擇,通常是抗生素基因。 c、縮短長度，切去不必要的片段，提高導入效率，增加裝載量。e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件 4．舉例說明差示篩選組織特異cDNA的方法？制備兩種細胞群體，目的基因在其中一種細胞中表達或高表達，在另一種細胞中不表達或低表達，然后通過雜交對比找到目的基因。也可利用誘導的方法，篩選出誘導表達的基因。 細胞融合物中包含：脾脾融合細胞：不能生長，脾細胞不能體外培養(yǎng)。氨基蝶呤對葉酸還原酶有抑制作用，因此不能生長。 利用雙脫氧末端終止法（Sanger法）測定DNA一級結構的原理與方法？原理是采用核苷酸鏈終止劑—2，3，雙脫氧核苷酸終止DNA的延長。根據(jù)堿基配對原則，每當DNA聚合酶需要dNMP參入到正常延長的DNA鏈中時