【正文】 (b)溶液Ⅱ的作用是使DNA變性 (c)溶液Ⅲ的作用是使DNA復(fù)性 (d)質(zhì)粒DNA分子小，所以沒有變性，染色體變性后不能復(fù)性38. Clark做了一個有趣的實驗，發(fā)現(xiàn)TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在雙鏈DNA的 末端加一個堿基，主要是加( ) ． (a)dGTP (b)dATP (c)dCTP (d)dTTP39．根據(jù)構(gòu)建方法的不同，基因文庫分為基因組文庫、cDNA文庫等。 (b)活性大大提高 (c)切割速度大大加快 (d)識別序列與原來的完全不同13．下面哪一種不是產(chǎn)生星號活性的主要原因?( ) (a)甘油含量過高 (b)反應(yīng)體系中含有有機溶劑 (c)含有非Mg2+的二價陽離子 (d)酶切反應(yīng)時酶濃度過低14．關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有( )不太恰當(dāng) (a)由作用于同一DNA序列的兩種酶構(gòu)成 (b)這一系統(tǒng)中的核酸酶都是Ⅱ類限制性內(nèi)切核酸酶 (c)這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過甲基化作用對DNA進行修飾 (d)不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制修飾系統(tǒng)15．在長模板鏈的指導(dǎo)下引物延伸合成長的DNA互補鏈時應(yīng)選用( ) (a)T4DNA聚合酶 (b)Klenow酶． (c)大腸桿菌DNA聚合酶I (d)T7DNA聚合酶16．末端轉(zhuǎn)移酶是合成酶類，( ) (a)作用時不需要模板 (b)在Ca2+的存在下，可以在突出的3，末端延長DNA鏈 (c)在Ca2+的存在下，可以在隱蔽的3，末端延長DNA鏈(d)上述說法有兩種是正確的17．在基因工程中，可用堿性磷酸酶( ) (a)防止DNA的自身環(huán)化 (b)同多核苷酸激酶一起進行DNA的5，末端標(biāo)記 (c)制備突出的3，末端 (d)上述說法都正確18．下列酶中，除( )外都具有磷酸酶的活性 (a)λ核酸外切酶 (b)外切酶Ⅲ (c)單核苷酸激酶 (d)堿性磷酸酶19． 下列哪一種酶作用時需要引物? ( ) (a)限制酶 (b)末端轉(zhuǎn)移酶 (c)反轉(zhuǎn)錄酶 (d)DNA連接酶20．S1核酸酶的功能是( ) (a)切割雙鏈的DNA (b)切割單鏈的RNA (c)切割發(fā)夾環(huán) (d)以上有兩項是正確的21．Klenow酶與DNA聚合酶相比，前者喪失了( )的活性。53．Northern印跡和Southern印跡有兩點根本的區(qū)別： (1)印跡的對象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)電泳條件不同，前者是變性條件，后者是非變性條件。51．可用T4 DNA聚合酶進行平末端的DNA標(biāo)記，因為這種酶具有__5’174。47．根據(jù)Northern雜交的結(jié)果可以說明：外源基因是否進行了轉(zhuǎn)錄_。其中DNA探針又分為___基因組DNA探針和cDNA 探針。42．目前，在重組體的篩選中，已經(jīng)發(fā)展了許多構(gòu)思巧妙、具有極高準(zhǔn)確性的篩選方法。40．只要知道基因組中某一特定區(qū)域的部分核苷酸組成，用_聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)可以將這段DNA進行百萬倍的擴增。35． 假定克隆一個編碼某種蛋白質(zhì)的基因，必須考慮其表達(dá)的三個基本條件： (1)保持正確的可讀框 (2)能夠使其轉(zhuǎn)錄的啟動子 (3)具有翻譯的起始和終止信號36． 受體細(xì)胞的感受態(tài)是接受外源DNA的生理狀態(tài)_。30． 用乙醇沉淀DNA時，通常要在DNA溶液中加人單價的陽離子，如NaCl和NaAc， 其目的是 中和DNA分子的負(fù)電荷，增加DNA分子間的凝聚力。25． 黏粒(cosmid)是質(zhì)?！删w雜合載體，它的復(fù)制子來自質(zhì)粒、COS位點序列來自 l噬菌體，最大的克隆片段達(dá)到45 kb。pUC系列的載體是通過pBR322和M13 兩種質(zhì)粒改造而來。19． pBR322是一種改造型的質(zhì)粒，它的復(fù)制子來源于pMBl ，它的四環(huán)素抗性基 因來自于pSCl01，它的氨芐青霉素抗性基因來自于pSF2124(R質(zhì)粒)。16．基因工程中有3種主要類型的載體：質(zhì)粒DNA，病毒DNA，質(zhì)粒和病毒DNA雜合體。一339。外切酶的活性。12．測序酶是修飾了的T7 DNA聚合酶，它只有_ 539。539。8．限制性內(nèi)切核酸酶BsuRI和HaeⅢ的來源不同，但識別的序列都是GGCC，它們屬于異源同工酶。2． 基因工程的兩個基本特點是： (1)分子水平上的操作，(2)細(xì)胞水平上的表達(dá)3． 基因克隆中三個基本要點是：克隆基因的類型；受體的選擇；載體的選擇4． 通過比較用不同組合的限制性內(nèi)切核酸酶處理某一特定基因區(qū)域所得到的不同大小 的片段，可以構(gòu)建顯示該區(qū)域各限制性內(nèi)切核酸酶切點相互位置的限制性酶切圖譜。5． 限制性內(nèi)切核酸酶是按屬名和種名相結(jié)合的原則命名的，第一個大寫字母取自屬名的第一個字母，第二、三兩個字母取自_種名的前兩個字母，第四個字母則用株名表示。9．DNA聚合酶I的Klenow大片段是用_枯草桿菌蛋白酶切割DNA聚合酶I得到的分子量為76kDa的大片段，具有兩種酶活性： (1) 539。外切核酸酶的活性。339。13．切口移位(nick translation)法標(biāo)記DNA的基本原理在于利用DNA聚合酶I的__539。合成酶的作用。17．就克隆一個基因(DNA片段)來說，最簡單的質(zhì)粒載體也必需包括三個部分：__復(fù)制區(qū)： 含有復(fù)制起點；選擇標(biāo)記： 主要是抗性基因；克隆位點： 便于外源DNA的插入。20．YAC的最大容載能力是1000kb，BAC載體的最大容載能力是 300kb 。它的復(fù)制子來自 pMBl ，Amp 抗性基因則是來自 轉(zhuǎn)座子。26． 野生型的l噬菌體DNA不宜作為基因工程載體，原因是：(1) 分子量大，(2)酶的多切點，(3)無選擇標(biāo)記27．噬菌粒是由質(zhì)粒和噬菌體DNA共同構(gòu)成的，其中來自質(zhì)粒的主要結(jié)構(gòu)是復(fù)制區(qū)，而來自噬菌體的主要結(jié)構(gòu)是 IG區(qū) 。31． 引物在基因工程中至少有4個方面的用途：(1)合成探針；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反應(yīng)；(4)進行序列分析32．Clark發(fā)現(xiàn)用Taq DNA聚合酶得到的PCR反應(yīng)產(chǎn)物不是平末端，而是有一個突出 堿基末端的雙鏈DNA分子。37． DNA重組連接的方法大致分為四種：(1)黏性末端連接； (2)平末端連接；(3)同聚物接尾連接；(4)接頭連接法。41．人工感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞在溫度為0176。 大致可以分為：(1)遺傳學(xué)方法；(2)物理篩選法；(3)核酸雜交法；(4)表達(dá)產(chǎn)物分析法等。45．如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割雙鏈DNA產(chǎn)生5’突出的黏性末端，則可以用_ Klenow酶填補的方法_進行3’末端標(biāo)記。48．差示雜交(differential hybridization)技術(shù)需要__兩種不同的細(xì)胞群體能夠表達(dá)不同的基因，即在一個群體中能夠表達(dá)一些基因，而在另一個細(xì)胞群體中不能表達(dá)這些基因。3’合成酶_和_3’ 174。54．放射免疫篩選的原理基于以下三點：(1)抗體能夠被吸附到固體支持物上；(2)同一個抗原可以同幾種抗體結(jié)合； (3)抗體能夠被標(biāo)記二、選擇題(單選或多選)1． 因研究重組DNA技術(shù)而獲得諾貝爾獎的科學(xué)家是( ) (a)A．Kornberg (b)W．Gilbert (c)P．Berg (d)B．McClintock2． 第一個作為重組DNA載體的質(zhì)粒是( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl83． 關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有( )不太恰當(dāng)。 (a)5，3，合成酶， (b)3，5，外切酶 (c)5，3，外切酶 (d)轉(zhuǎn)移酶22． 下面關(guān)于松弛型質(zhì)粒(relaxed plasmid)性質(zhì)的描述中，( )是不正確的 (a)質(zhì)粒的復(fù)制只受本身的遺傳結(jié)構(gòu)的控制，而不受染色體復(fù)制機制的制約， 因而有較多的拷貝數(shù) (b)可以在氯霉素作用下進行擴增 (c)通常帶有抗藥性標(biāo)記 (d)同嚴(yán)緊型質(zhì)粒融合后，雜合質(zhì)粒優(yōu)先使用松弛型質(zhì)粒的復(fù)制子 23． 基因工程中所用的質(zhì)粒載體大多是改造過的，真正的天然質(zhì)粒載體很少，在下列載 體中只有( )被視為用作基因工程載體的天然質(zhì)粒載體 (a)pBR322 (b)pSCl01 (c)pUBll0 (d)pUCl8 24． 下列哪種克隆載體對外源DNA的容載量最大?( ) (a)質(zhì)粒 (b)黏粒 (c)酵母人工染色體(YAC) (d) l噬菌體 (e) cDNA表達(dá)載體 25. 松弛型質(zhì)粒： ( ) (a)在寄主細(xì)胞中拷貝數(shù)較多 (b)可用氯霉素擴增 (c)一般沒有選擇標(biāo)記 (d)上述(a)、(b)兩項正確 26．Col El是惟一用作基因工程載體的自然質(zhì)粒，這種質(zhì)粒： ( ) (a)是松弛復(fù)制型 （b)具有，四環(huán)素抗性 (c)能被氯霉素擴增 (d)能產(chǎn)生腸桿菌素27．同一種質(zhì)粒DNA，以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷移速率是：( ) (a)OCDNASCDNALDNA (b)SCDNALDNAOCDNA (c)LDNAOCDNASCDNA (d)SCDNAOCDNALDNA28．pBR322是一種改造型的質(zhì)粒，含有兩個抗性基因，其中四環(huán)素抗性基因來自： ( ) (a)ColEl (b)Ri質(zhì)粒 (c)pSCl01 (d)pUCl829．關(guān)于穿梭質(zhì)粒載體，下面哪一種說法最正確?( ) (a)在不同的宿主中具有不同的復(fù)制機制 (b)在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制起點 (c)在不同的宿主細(xì)胞中使用不同的復(fù)制酶 (d)在不同的宿主細(xì)胞中具有不同的復(fù)制速率30．能夠用來克隆32kb以下大小的外源片段的質(zhì)粒載體是( ) (a)charomid (b)plasmid (C)cosmid (d)phagemid31．第一個作為重組DNA載體的質(zhì)粒是( ) (a)pBR322 (b)ColEl (c)pSCl01 (d)pUCl832. Ti質(zhì)粒：( ) (a)可從農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)到植物細(xì)胞中 (b)作為雙鏈DNA被轉(zhuǎn)移 (c)在植物中導(dǎo)致腫瘤 (d)介導(dǎo)冠癭堿的合成，作為細(xì)菌的營養(yǎng)物和植物的生長激素 (e)需要細(xì)菌的vir基因幫助轉(zhuǎn)移 (f)在植物細(xì)胞中作為染色體外質(zhì)粒33．黏粒(cosmid)是一種人工建造的載體，( ) (a)它具有COS位點，因而可進行體外包裝 (b)它具有質(zhì)粒DNA的復(fù)制特性 (c)進入受體細(xì)胞后，可引起裂解反應(yīng) (d)進入受體細(xì)胞后，可引起溶源化反應(yīng)34．有兩種確定核酸中核苷酸序列的方法：化學(xué)序列分析法(MaxamGlbert)和酶學(xué)序列分析法(Sanger)。在下列文庫中， ( )屬cDNA文庫 (a) YAC文庫 (b) MAC文庫 (c) 扣減文庫 (d) BAC文庫40．下面關(guān)于多克隆位點(multiple clone site,MCS)的描述，不正確的—句是( ) (a)僅位于質(zhì)粒載體中 (b)具有多種酶的識別序列 (c)不同酶的識別序列可以有重疊 (d)一般是人工合成后添加到載體中41．在cDNA技術(shù)中，所形成的發(fā)夾環(huán)可用( ) (a)限制性內(nèi)切核酸酶切除 (b)用3185。 (a)既能標(biāo)記DNA，又能標(biāo)記RNA (b)既能標(biāo)記雙鏈DNA又能標(biāo)記單鏈DNA (c)只能標(biāo)記突出的539。 (a)Southem印跡雜交 (b)Northem印跡雜交 (c)Western印跡 (d)原位菌落雜交53．下列哪一個不是Southern印跡法的步驟?( ) (a)用限制酶消化DNA (a)DNA與載體的連接 (c)用凝膠電泳分離DNA片段 (d)DNA片段轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上 (e)用一個標(biāo)記的探針與膜雜交54． 報告基因( ) (a)以其易于分析的編碼序列代替感興趣基因的編碼序列 (b)以其易于分析的啟動子區(qū)代替感興趣基因的啟動子區(qū) (c)能用于檢測啟動子的活性 (d)能用于確定啟動子何時何處有活性55． 在利用lacZ失活的顯色反應(yīng)篩選法中，IPTG的作用是( ) (a)誘導(dǎo)宿主的α肽的合成 (b)誘導(dǎo)宿主的ω肽的合成 (c)作為酶的作用底物 (d)作為顯色反應(yīng)的指示劑56. 切口移位是指在( )作用下，使( )帶上放射性標(biāo)記。端向339。如果分別用4種雙脫氧核苷酸終止反應(yīng)，則會獲 得4組長度不同的DNA片段。CGAACATATGGAGT339?；蚴褂猛ㄓ镁彌_液。7． 什么是測序酶(sequenaseTM)?所謂測序酶即