酶標(biāo)儀的工作原理與基本結(jié)構(gòu)-wenkub
2023-07-03 01:31:55 本頁面
【正文】 關(guān)系可以用下式表示：A＝KT越大，表明有色溶液的透光程度越大。則它們之間有如下關(guān)系：Io＝Ia+Ir+It在實際比色分析時，所用的比色皿都是同質(zhì)料、同規(guī)格的，因此反射光的強(qiáng)度為一定值，不會引起誤差，即反射光的影響可以不考慮。三、朗伯比爾（LamberBeer）定律溶液顏色的深淺與濃度之間的數(shù)量關(guān)系可以用吸收定律來描述。由于有色物質(zhì)對光的吸收具有選擇性，因此，在進(jìn)行比色測定時，只能用光波中能被有色溶液吸收的那部分光線，即應(yīng)該有單色光進(jìn)行比色測定。如同根據(jù)指紋可以辨認(rèn)眾人一樣，在光譜分析中，可以根據(jù)吸收光譜的不同來鑒別物質(zhì)。從圖2中可以看出，在可見光范圍內(nèi)，高錳酸鉀溶液對波長為525nm左右的綠色光吸收程度最大，而對紫色和紅色光很少吸收。通常用吸收曲線來描述溶液對各種波長的光的吸收情況。實踐證明，溶液所呈現(xiàn)的顏色是它的主要吸收光的互補(bǔ)色。透明物質(zhì)的顏色就是它透過光波的顏色。圖1中處于直線關(guān)系的兩種光為互補(bǔ)色。波長越短，即頻率越高，能量越大。式中υ是光的頻率，h為普朗克常量。在可見光之外是紅外線和紫外線。首先，光是一種電磁波。利用這種方法制成的儀器叫光電比色計。因此，可以通過比較溶液顏色深淺的方法來確定有色溶液的濃度，對溶液中所含的物質(zhì)進(jìn)行定量分析。. . . .酶免測試的工作原理吸光度測試的準(zhǔn)確性對于酶免測試結(jié)果的重要性酶標(biāo)儀的組成部分和工作原理第一節(jié) 比色分析的基本理論許多化學(xué)物質(zhì)具有顏色，有些無色的化合物也可以和顯色劑作用而生成有色物質(zhì)。如納氏管比色法，它是按濃度由高到低，配好一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度管，然后拿待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)管逐個比較，看和哪一個標(biāo)準(zhǔn)管的顏色最相近，便讀取該標(biāo)準(zhǔn)管的濃度值為待測樣品的濃度值，這就是（目視）比色法。光電比色計屬于吸收光譜儀器范圍。可以用描述電磁波的術(shù)語，如振動頻率（υ）、波長（λ）、速度（c ）、周期（T ）來描述它。各種色光及紅外線、紫外線的近似波長范圍如表1所示。同樣，光被吸收時，其能量一份一份地被吸收的。反之亦然。如綠光和紫光為互補(bǔ)色，黃光和藍(lán)光為互補(bǔ)色等等。不透明物質(zhì)的顏色是其反射光波的顏色。如一束白光通過高錳酸鉀溶液時，綠光大部分被選擇吸收，其他的光透過溶液。讓不同波長的光通過一定濃度的有色溶液，分別測出它對各種波長的光的吸收程度（用吸光度A來表示），以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，所得到的曲線稱為溶液的吸收曲線或吸收光譜圖。對于任何一種有色溶液，都可以測繪出它的吸收曲線。從圖2中還可以看出，溶液的濃度越大，對（綠）光的吸收程度越大。至于不被有色溶液吸收的光線，則應(yīng)設(shè)定在未透過有色溶液之前或之后將其消除掉。它是由朗伯定律和比爾定律相結(jié)合而成的，所以又稱朗伯比爾定律。這樣，上式可簡化為：Io＝Ia +It當(dāng)入射光的強(qiáng)度一定時，被吸收的光的強(qiáng)度越大，透過光的強(qiáng)度就越小。當(dāng)一束平行單色光通過有色溶液時，由于溶液吸收了一部分光線，光線的強(qiáng)度就要減弱。C這一定律是比色分析和其他吸收光譜分析的理論基礎(chǔ)。K值越大，說明比色分析時的靈敏度越高。（一）計算法根據(jù)被測溶液濃度的大致范圍，先配制一已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。LS在待測溶液中： Ax＝KxLS/（Kx這一關(guān)系式是設(shè)計光電比色計和分光光度計的基礎(chǔ)，也是比色分析的基本計算公式之一。（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線法這種方法分以下幾步進(jìn)行：(1) 先配制5種以上標(biāo)準(zhǔn)濃度的溶液；(2) 測出每種溶液的吸光度A；(3) 做A、C標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，如圖3所示。 第二節(jié) 光電比色計的基本結(jié)構(gòu)利用光電池或光電管等光電元件作檢測器，來測量通過有色溶液的透射比或吸光度，進(jìn)而求出物質(zhì)含量的方法叫光電比色法。圖4 光電比色計方框圖光源發(fā)出的復(fù)合光經(jīng)濾光片濾除后，變?yōu)榻频膯紊?。實際上，這種理想的光源并不存在，所有光源的光強(qiáng)都隨波長而變。鎢絲燈的特點是結(jié)構(gòu)簡單、價格便宜、壽命較長，通常可以工作1000h以上。嚴(yán)重的會使燈壁發(fā)黑，無法使用。鹵鎢燈有比普通鎢燈高得多的發(fā)光效率和長得多的壽命，這主要是因為在鹵鎢燈中，鎢蒸氣在靠近燈壁的低溫區(qū)與鹵素相結(jié)合，生成了揮發(fā)性的鹵化鎢氣體。這一過程一般稱為鹵鎢循環(huán)或鎢的再生循環(huán)。已知在可見光區(qū)，其能量輸出的波動約為所加電壓波動的4次方倍。在直流供電時，通常采用電子穩(wěn)壓電路供電。濾光片通過單色光的純度，通常用其光譜特性曲線的半寬度表示。即：半寬度＝λ2λ1。圖6 吸收濾光片的透光曲線（一）吸收濾光片吸收濾光片又叫玻璃濾光片，它是在熔化的玻璃中摻以不同的添加劑制成的。帶通濾光片的透光特性如圖6所示。復(fù)合濾光片可以得到比玻璃濾光片窄得多的半寬度。陡度定義為：陡度＝半高波長/(λ1λ3)。如42號和50號的峰值波長分別為420nm和500nm，65號的半高波長為650nm。溫度變化還從其他途徑影響比色分析。（三）干涉濾光片由光的干涉原理可知，來自同一光源的兩束光線，在空間不同的路徑而相互疊加時，若光程差為波長的整數(shù)倍，則互相加強(qiáng)；若光程差為半個波長的奇數(shù)倍，則互相減弱。干涉濾光片雖然性能優(yōu)越，但其價格昂貴。需要說明的是，這種濾光片上的標(biāo)稱吸光度值，可能與實際值有偏差，使用時要以實際使用的波長下的測定值為準(zhǔn)。此外，還有流動比色皿、微量比色皿、可拆卸比色皿等，如圖9所示。盡管可以做成各種形狀和尺寸，但國際上規(guī)定，液層厚度為10mm
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